利用定点突变技术构建突变nm23-H1和EGFP融合基因

背景与目的以前的研究已经证明nm23-H1基因是肿瘤转移抑制基因，但其抑制肿瘤转移的分子机制目前还不完全清楚。基因定点突变技术可以精确地改变基因的特定碱基序列，获得突变蛋白质。本研究的目的是应用基因定点突变技术构建突变型nm23-H1-增强型绿色荧光蛋白（EGFP）融合基因，为进一步研究肿瘤抑制基因nm23-H1的功能、生化作用机制提供理论基础和实验依据。方法以逆转录病毒PLXSN-野生型nm23-H1-EGFP质粒为突变模板，应用QuikChange^TM定点突变方法，简单、快速、高效地引入nm23-H1^S44A、nm23-H1^P96S、nm23-H1^H118F、nm23-H1^S120G四个点突变和一个联合位点突变nm23-H1^P96S-S120G，构建了突变型nm23-H1-EGFP融合基因。结果成功构建了nm23-H1^S44A-EGFP、nm23-H1^P96S-EGFP、nm23-H1^H118F-EGFP、rim23-H1^S120G-EGFP、nm23-H1^P96S-S120G-EGFP五个突变型nm23-H1-EGFP融合基因，经DNA序列分析突变的碱基序列与实验设计完全一致。结论成功构建了五个具有不同突变位点的突变型nm23-H1-EGFP融合基因。QuikChange^TM定点突变技术是一种简单、快速、高效的基因定点突变方法。     

nm23-H1基因点突变对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981的GSK-3β激酶活性的影响

背景与目的我们的前期研究结果表明nm23-H1基因的肺癌转移抑制作用可能与上调Wnt信号通路中关键激酶GSK-3β的活性、进而抑制Wnt信号通路相关.本研究的目的是探讨nm23-H1点突变对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981中胞质和胞核的GSK-3β激酶活性的影响,为阐明nm23-H1基因调控肺癌转移相关信号传导通路的分子机制提供实验依据.方法将原代人低转移大细胞肺癌细胞株NL9980、原代人高转移大细胞肺癌细胞株L9981、空载体转染细胞株L9981-pEGFP、稳定转染nm23-H1基因的细胞株L9981-nm23-H1-pEGFP以及稳定转染在44、96、118、120号位点发生突变后的nm23-H1基因的转基因肺癌细胞株L9981-nm23-H1 S44A-pEGFP、L9981-nm23-H1P96S-pEGFP、L9981-nm23-H1H118F-pEGFP和L9981-nm23-H1S120G-pEGFP作为研究对象,应用免疫共沉淀同位素闪烁计数法测定上述肺癌细胞株胞质和胞核中的GSK-3β激酶活性.结果nm23-H1基因发生点突变后,所有转基因肺癌细胞株细胞胞质和胞核中的GSK-3β活性均较突变前有所下降.L9981-nm23-H1S44A-pEGFP、L9981-nm23-H1P96S-pEGFP、L9981-nm23-H1 H118F-pEGFP、L9981-nm23-H1 S120G-pEGFP分别与L9981-nm23-H1-pEGFP比较,胞质与胞核中GSK-3β激酶活性均存在显著性差异(P＜0.05),其中L9981-nm23-H1P96S-pEGFP与L9981-nm23-H1-pEGFP胞质中GSK-3β活性存在极显著差异(P＜0.01),L9981-nm23-H1S44A-pEGFP、L9981-nm23-H1P96S-pEGFP和L9981-nm23-H1 H118F-pEGFP与L9981-nm23-H1-pEGFP的胞核中GSK-3β活性存在极显著差异(P＜0.01).结论①nm23-H1基因突变能显著影响其对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981胞质和胞核中GSK-3β激酶活性的调控作用;②nm23-H1基因可能通过调控L9981中GSK-3β激酶活性来抑制L9981细胞株中Wnt信号传导.     

某电解铝厂职业病危害控制效果评价

目的识别、评价、控制建设项目（某电解铝厂）可能产生的职业病危害，为卫生行政部门审批建设项目提供依据。方法依据《工业企业设计卫生标准）（GBZ1-2（102）、《工作场所空气中有害物质监测的采样规范》（GBZ159—2004），采用现场调查、现场检测、检查表、定量分级等方法对建设项目进行评价。结果该建设项目的选址与总体布置、生产设备布局、职业病防护设施、个人使用的防护用品、职业卫生管理、生活饮用水、辅助用室等符合国家有关法规，该项目生产过程中产生的主要职业病危害因素有：粉尘、毒物、噪声与振动、高温与热辐射、紫外线、工频电场等。结论该项目的职业病危害控制措施有效、可行。     

深昏迷病人胃管置入方法探讨及护理

胃管置入是临床护理工作中常见的基础操作.传统的昏迷病人胃管置人更常见的方法是在插管前去枕,协助患者头向后仰,当胃管插入15cm时左手将患者的头托起,使下颌靠近胸骨柄,增大咽部通道弧度,便于管壁沿咽后壁后行,徐徐插入预定的长度.此法对重症监护病房(ICU)内大多数昏迷病人均能达到预期目的.     

取宫内节育器后子宫穿孔2例

1 病例报告 例1,患者,38岁,G4P2.放置Cu功能性宫内节育器(IUD)术后1年,停经40天来我院门诊就诊.查尿HCG阳性,B超检查示:宫内早孕,孕囊大小15mm× 13 mm,并见宫内节育器,位置正常,诊断为宫内早孕.患者要求终止妊娠.选择吸宫术,术前探官腔深9cm,扩张宫口,用6号刮匙进行吸宫术,压力给予400 mmHg,顺时针吸刮1周后感觉宫内容物已刮除,退出刮匙,再用取环钩进宫腔钩取节育器,顺利取出后用刮匙准备清理宫腔.     

急性冠脉综合征患者血浆脑钠肽浓度测定的临床意义

目的:观察不同时期急性冠脉综合征患者血浆脑钠肽(BNP)的浓度变化,探讨血浆脑钠肽浓度在急性冠脉综合征的早期诊断、治疗中的作用。方法:测定不同时期急性冠脉综合征患者血浆脑钠肽(BNP)的含量,与对照组及自身进行比较。结果:患者组BNP明显升高,随着病情加重BNP持续升高;随着病情治疗好转,BNP明显降低。结论:血浆脑钠肽(BNP)可作为急性冠脉综合征的早期诊断及衡量治疗效果的有效指标。     

黄连的药证及临床应用

黄连为毛莨科植物黄连（Coptis ch．enensis F．）、三角叶黄连、峨嵋野连或云连的根茎，其味苦寒，是清热、泻火、燥湿、解毒的重要药物。黄连是常用药物，宋以前13部方书中，含黄连的方剂约占5％。总结其药证主治烦、痞、利三证。临床应用：（1）以烦躁、焦虑乃至精神障碍为主诉的疾病；（2）以心下痞、上腹部不适感、疼痛感为主诉的疾病；（3）以下利、腹痛为主诉的疾病；（4）以烦热而有吐血、衄血等出血倾向为特征的疾病；（5）以烦热、心下痞为兼有症状的疾病。     

慢性盆腔炎血瘀证的血液流变学研究

慢性盆腔炎是妇科常见病、多发病,其发病机制为“寒 湿热瘀蓄积胞中,气血运行不畅所致”。慢性炎症由于久治 不愈,反复发作,给病人造成很大痛苦。血液流变学检测近 年来广泛应用于血瘀证的诊断和研究,目前认为血液流变 性、血液黏度的异常是形成血瘀证的病理基础之一。本课题 应用血液流变学理论,通过血液流变学检测,来研究慢性盆 腔炎血瘀证在血液流变学方面的改变,为慢性盆腔炎发病机 制的认识及治疗提供依据。     

医学青年医师教学技能培训现状及对策研究

目的 了解新疆医科大学第二临床医学院青年医师教学实践现状、存在问题、教师培训的方式及改进策略,为我院临床课程青年医师教学能力的发展与提升提供意见.方法 采用自行设计的调查问卷,对新疆某三甲教学医院45岁以下的270名医师进行问卷调查(青年医师基本情况、教学能力现状、影响教学能力提升因素及提升教学能力需求的自我认识等部分...     

信息化血糖管理在现代医疗糖尿病管理中的应用

糖尿病是威胁人类健康的慢性疾病,随着移动医疗及信息化管理系统等血糖数据化管理模式的兴起,血糖管理模式发展将进入互联网+时代.关注糖尿病血糖监测手段及信息化管理快速发展,通过阐述互联网血糖监测系统在国内外的应用现状,分析及探讨适用于我国医疗现状的信息化智能管理模式,以期为了解我国信息化网络医联体的建设研究现状及实际开展提...