丝裂霉素C对肝癌细胞中NF-κB基因表达和分布的影响

目的:探讨丝裂霉素C(MMC)对肝癌细胞中NF-κB分布和基因表达的影响.方法:应用细胞免疫组织化学检测不同浓度的MMC对SK-HEP-1细胞中NF-κB分布的影响,Western-blot检测50μg/ml MMC作用不同时间的NF-κB蛋白水平,RT-PCR方法比较50μg/ml MMC持续处理细胞不同时间和作用2 h停止用药后不同时间NF-κB基因表达水平的影响.结果:不同剂量的MMC能够不同程度地使细胞核中NF-κB免疫组化染色增强,50μg/ml的MMC导致了NF-κB蛋白蛋白印迹水平升高,并在MMC处理8 h的细胞中升至最高,RT-PCR方法检测NF-κB基因mRNA水平在MMC持续处理的细胞中也上升,在第2小時水平最高,随后下降,但是在MMC处理2 h停止用药后NF-κB基因mRNA水平没有下降反而继续上升,并持续到第12小時.结论:MMC能够促进NF-κB自细胞浆进入细胞核,50μg/ml的MMC导致了NF-κB自身表达升高并在撤除用药后仍旧存在,提示NF-κB同细胞抗MMC活性密切相关.     

丝裂霉素C对肝癌细胞中NF-κB基因表达和分布的影响

目的：探讨丝裂霉素C(MMC)对肝癌细胞中NF-kB分布和基因表达的影响。方法：应用细胞免疫组织化学检测不同浓度的MMC对SK-HEP-l细胞中NF-kB分布的影响，Western-blot检测50μg／ml MMC作用不同时间的NF-kB蛋白水平，RT-PCR方法比较50μg/ml MMC持续处理细胞不同时间和作用2h停止用药后不同时间NF-kB基因表达水平的影响。结果：不同剂量的MMC能够不同程度地使细胞核中NF-kB免疫组化染色增强，50μg/ml 的MMC导致了NF-kB蛋白蛋白印迹水平升高，并在MMC处理8h的细胞中升至最高，RT-PCR方法检测NF-kB基因mRNA水平在MMC持续处理的细胞中也上升，在第2小时水平最高，随后下降，但是在MMC处理2h停止用药后NF-kB基因mRNA水平没有下降反而继续上升，并持续到第12小时。结论：MMC能够促进NF-kB自细胞浆进入细胞核，50μg/ml的MMC导致了NF-kB自身表达升高并在撤除用药后仍旧存在，提示NF-kB同细胞抗MMC活性密切相关。     

聚糖蛋白抗体的制备及其在肝癌组织及细胞系蛋白表达检测中的应用

目的制备聚糖蛋白3(glypican-3,GPC3)抗体并应用其对肝癌组织及细胞系中GPC3蛋白表达进行研究,探讨GPC3蛋白作为肝癌潜在的新的肿瘤标志物的可能性。方法利用原核表达系统诱导表达了GPC3抗原并制备了特异性好的兔抗GPC3多克隆抗体,应用该纯化的抗体对40例组织(正常肝7例,肝细胞型肝癌26例,胆管细胞型肝癌7例)及4个细胞系(肝癌细胞系HepG2、HuH-7、Hep3B,非肝癌细胞系Hela)进行了蛋白印记杂交试验。结果Western blot结果显示,肝癌组织及肝癌细胞系HepG2、HuH-7、Hep3B细胞系中有相对相对分子质量约70000的蛋白主带,与GPC3的核心蛋白带相对分子质量大小相一致;正常肝组织不表达GPC3蛋白,肝细胞型肝癌中癌组织(HCC)及癌旁组织表达GPC3蛋白的比例分别为84.6%(22/26)及30.8%(8/26),7例胆管细胞型肝癌(ICC)中有2例癌组织及其旁组织表达GPC3。结论GPC3蛋白广泛存在于肝癌组织中,很可能成为一种新的肝癌肿瘤标志物。     

原发性肝细胞性肝癌分子机理研究的几个热点问题

肝细胞性肝癌 (ＨＣＣ)是最常见的一种肝癌 ,我国每年新发病例约占全球 4 5 %。且近年来 ,我国肝癌发病率上升 ,严重危害劳动人民的健康与生命安全。经过半个世纪的努力 ,我国医学工作者在肝癌的外科治疗上已取得了突破性的成绩 ,但传统的外科手术加化疗或放疗等方法仍有其局限性 ,肝癌的生物治疗也很不成熟 ,肝癌根治性切除后的复发率很高 ,复发的危险因素主要与肝癌的侵袭转移性有关。要使肝癌患者的生存率提高到一个新的水平 ,应加强肝癌分子病理机制的研究 ,寻找肝癌复发转移的靶基因 ,探讨肝癌生物治疗的新途径。现提出肝癌分子生物学…     

实时超声弹性成像评价无水酒精所致兔肝坏死灶的研究

目的 探讨应用实时超声弹性成像技术评价无水酒精注射所致兔肝局部坏死灶形态及大小的价值.方法 健康日本大耳兔24只,随机分成4组:酒精注射即刻组、1周组、2周组、4周组,每组6只,将1mL无水酒精注入兔肝左叶,分别用常规二维超声及超声弹性成像测量坏死灶的最大横径,并与大体标本测量的结果进行对照.结果 各组弹性图上均显示坏死灶呈均匀蓝色(较硬区),明显区别于周围正常肝组织(绿色区域).弹性成像测量的各组坏死灶大小与大体标本的相关性(r)分别为0.803、0.854、0.858、0.844(P值分别为0.039、0.030、0.029、0.035).其中常规二维超声与大体标本测量值比较,差异有统计学意义(P<0.05),实时超声弹性成像与大体标本测量的结果比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 常规二维超声不能准确评价坏死灶的大小,而实时超声弹性成像能很好的反映无水酒精所致兔肝坏死灶的大小,实时超声弹性成像可能成为评价无水酒精所致兔肝坏死灶形态及大小的有效方法.     

成人社区获得性肺炎住院病人支原体、衣原体IgM抗体检测结果分析

社区获得性肺炎(community acquired pneumonia,CAP)是威胁人类健康的常见病。随着生存环境的改变,抗生素的广泛应用以及先进诊断方法的不断出现等,CAP中非典型病原体如肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,Mp)、肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae,Cp)的感染率在不断上升。为了解本地区下呼吸道Mp、Cp感染的情况,我们对2001年10月-2003年9月期间于我院呼吸内科住院的242例CAP患者进行了回顾性分析。     

PCP-2胞外区/Fc融合蛋白的真核表达、纯化及其生物学活性鉴定

目的:构建PCP-2胞外区(PCP-2EC)与人免疫球蛋白IgG Fc融合蛋白表达载体,在哺乳动物细胞中表达并纯化PCP-2EC/Fc蛋白,研究其在神经细胞黏附中发挥的作用.方法:以PBLIISK-PCP-2为模板扩增PCP-2EC片段,定向插入真核表达载体pIGplus;重组质粒分别转染COS-7细胞和293细胞,可溶性表达PCP-2EC/Fc融合蛋白,并通过金葡菌蛋白A特异性纯化;以此融合蛋白作为基质,观察原代培养神经元的黏附情况.结果:成功构建PCP-2EC/Fc融合蛋白表达载体,表达载体的构建与预期设计相符;进一步在哺乳动物细胞中表达并纯化PCP-2EC/Fc蛋白;PCP-2EC/Fc蛋白可以促进原代培养神经元的黏附作用.结论:本研究成功地构建了PCP-2EC/Fc融合蛋白真核表达载体,获得有活性的PCP-2胞外区可溶性分子,初步研究发现其在神经细胞黏附中发挥促进作用,为后续神经及其他领域中的功能研究奠定基础.     

血清瘦素水平及瘦素受体基因Gln223Arg多态性与阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征的关系

目的　比较阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（OSAHS）患者和对照组之间血清瘦素（Leptin,Lep）水平的差异,分析瘦素受体（Leptin receptor,Lepr）基因Gln223Arg各基因型的分布特征和等位基因频率,探讨其多态性与OSAHS易感性之间的关系。方法　选取经多导睡眠（PSG）监测的OSAHS患者为病例组（221例）,分为肥胖OSAHS组（107例）,非肥胖OSAHS组（114例）,同期查体的健康人为对照组（213例）,分为肥胖对照组（110例）及正常对照组（103例）。所有受试者均抽血检测血清Lep水平,并做Lepr基因组DNA的提取和基因型分析。结果　Lep水平,非肥胖OSAHS组患者（13.59±5.01）μg/L和肥胖对照组患者（13.10±1.87）μg/L均较正常对照组升高,但两者之间比较无差异,当OSAHS合并肥胖后Lep水平明显升高（19.01±3.43）μg/L,与其他3组相比,差异显著。4组Lepr基因Gln223Arg的基因型及等位基因频率的比较,差异无统计学意义,但GG基因型患者颈围大于AA/AG患者。结论　OSAHS患者Lep水平显著高于对照人群,当合并肥胖时,Lep水平显著升高。Lepr基因Gln223Arg多态性与OSAHS的发病无关,但可能调节OSAHS患者颈部脂肪的分布。     

血清HIF-1、Ngb检测对脑梗死合并OSAHS患者决策功能障碍的评估价值

目的 探讨血清低氧诱导因子1(HIF-1)、脑红蛋白(Ngb)检测对脑梗死合并阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)患者决策功能障碍的评估价值。方法 选择脑梗死患者332例,伴OSAHS 164例(观察组,OSAHS轻度67例、中度52例、重度45例)、不伴OSAHS 168例(对照组)。酶联免疫吸附法检测两组血清HIF-1、Ngb水平,爱荷华赌博任务(IGT)测评决策功能,用Pearson相关分析参数的关系,用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清HIF-1、Ngb对决策功能障碍的预测效能。结果 与对照组比较,观察组血清HIF-1、Ngb水平升高,IGT评分降低(P均<0.05);OSAHS轻度、中度、重度患者血清HIF-1、Ngb水平比较差异有统计学意义(P均<0.05)。血清HIF-1、Ngb水平与IGT评分呈负相关(r分别为-0.665、-0.664,P均<0.05)。血清HIF-1、Ngb水平预测决策功能障碍的ROC曲线下面积分别为0.858、0.884。结论 血清HIF-1、Ngb检测有助于早期预测脑梗死合并OSAHS患者的决策功能障碍。     

两种巨噬细胞系中PKC亚型表达的差别与其抗瘤活性的比较:依赖一氧化氮的杀瘤机制

目的 探讨LPS诱导的巨噬细胞杀瘤效应以及与PKC相关的分子机制。方法 两种巨噬细胞系P388D1和RAW264．7用LPS刺激、或先用PMA长期处理下调PKC表达、或用L-NAME阻断iNOS后再以LPS刺激,检测其杀伤肿瘤细胞系P815(MTT法)及分泌IL-1,TNF-α(ELISA法)和NO(Griess试剂)的作用;并用Western blot法检测PMA长期作用后两株细胞系中PKC亚型的表达。结果 LPS刺激的RAW264．7细胞有杀伤靶细胞的功能,而P388D1几乎没有杀伤作用。PMA预处理(1μg／mL,24h)后可明显抑制LPS诱导的杀瘤作用。因上述结果提示PKC在巨噬细胞杀瘤活性中可能的重要作用,比较了PMA处理后两株细胞PKC亚型的表达：Western blot结果显示,在所检测的PKCα,β1,β2,δ及ε5种亚型中,在P388D1细胞均有表达,而在RAW264．7细胞仅有PKcd,PKCα,PKCβ1,PKCδ表达;1μg/mL PMA作用24h后明显下调了RAW264．7细胞PKCα,PKCβ1和PKCδ的表达,在P388D1则有PKCα、PKCδ和PKCε下调,而PKCβ1和PKCβ2不被下调。结合LPS诱导的与PKC活化有关的IL-1、TNF-α及NO的产生,发现在P388D1细胞几乎不产生NO,而在RAW264．7细胞,NO合成酶抑制剂L-NAME不仅能阻断LPS诱导的NO的产生,而且明显抑制LPS诱导的杀瘤活性。结论 LPS诱导的巨噬细胞杀瘤作用主要是NO的杀伤作用来完成而非巨噬细胞直接与瘤细胞作用所致;而该作用与PKCβ活性密切相关。