人脐带源间充质干细胞分离培养方法的改进

背景：脐带来源的间充质干细胞因其具有高度的自我更新和多向分化潜能,以及取材方便等优点而日益受到关注。 目的：建立一种改进的人脐带间充质干细胞分离、培养方法,并对其生物学特性进行分析。 方法：无菌条件下获取足月妊娠分娩胎儿脐带,利用改良的组织块贴壁法分离培养脐带间充质干细胞,即将传统组织贴壁法中本应丢弃的组织转移到新的培养瓶中进行二次贴壁培养,取第3代脐带间充质干细胞进行生物学特性分析。 结果与结论：组织贴壁后第5-7天可见有梭形细胞从组织块边缘爬出,第10天左右可形成明显的细胞克隆。将组织块转移到新培养瓶中继续培养,2d后即可见有细胞爬出,细胞生长速度较快,5d即可形成细胞克隆。传代后的细胞形态均一,呈成纤维细胞样的长梭形。流式细胞仪检测细胞高表达CD90、CD105,不表达CD34、CD45、HLA-DR。细胞增殖能力旺盛,平均倍增时间为50 h左右,41.24%的细胞处于G2/S期。体外可诱导分化为成骨细胞和脂肪细胞。上述实验结果证明二次贴壁培养出的细胞也具有间充质干细胞的生物学特性,而且通过这种培养方法获得的原代间充质干细胞数是传统方式培养的2倍。     

防己诺林碱对增生性瘢痕的抑制作用

目的探究防己诺林碱对增生性瘢痕的抑制作用。方法提取原代瘢痕组织成纤维细胞,分别用DMSO(对照组),10、20、40μmol/L的防己诺林碱处理成纤维细胞24 h后,通过MTT实验检测对其增殖能力的影响;通过流式细胞术及Hochest33258染色检测对其增殖、凋亡能力的影响;通过western blot和real time PCR检测防己诺林碱对瘢痕组织成纤维细胞中Cyclin D1和Bcl-2表达水平的影响。结果 10、20、40μmol/L的防己诺林碱作用瘢痕组织成纤维细胞24 h后,细胞的抑制率分别为(21.32±4.87)%、(27.13±1.71)%和(29.86±5.59)%,与对照组相比差异均具有统计学意义;防己诺林碱还可抑制细胞周期进程,促进其凋亡;Western blot和real time PCR检测结果显示,防己诺林碱可抑制Cyclin D1和Bcl-2在瘢痕组织成纤维细胞中的表达。结论防己诺林碱可抑制瘢痕组织成纤维细胞的生长。     

miR-137通过PTN抑制瘢痕成纤维细胞生长

目的分析miR-137对瘢痕成纤维细胞生长的影响。方法通过芯片分析技术筛选出增生性瘢痕差异性表达的miRNAs,并在增生性瘢痕组织中进行验证。通过miRDB软件预测miR-137能够打靶的蛋白质,采用荧光素酶报告基因实验分析miR-137对PTN的靶向作用。提取原代瘢痕成纤维细胞分别构建miR-137过表达或低表达的细胞系。采用western blot及real time PCR检测miR-137对细胞中PTN的影响,以及MTT方法检测miR-137对细胞增殖的作用;检测miR-137对细胞中Cyclin B1的影响。结果 miR-137在增生性瘢痕组织中呈低表达,可以与PTN的3′UTR区域直接结合来抑制其表达及活性,从而抑制瘢痕成纤维细胞的增殖。Western blot和real time PCR检测结果显示,miR-137能抑制Cyclin B1在瘢痕成纤维细胞中的表达。结论 miR-137可以抑制PTN的表达,而且可以通过抑制PTN来抑制瘢痕成纤维细胞的生长。     

山萘酚通过抑制Akt磷酸化的水平抑制增生性瘢痕成纤维细胞的迁移和生长

目的 探讨山萘酚是否能通过抑制Akt的磷酸化水平抑制增生性瘢痕成纤维细胞（hypertrophic scar fibroblasts,HSFB）迁移的能力、阻滞其细胞周期、促进其凋亡,并抑制其增殖能力。方法 选取自2021年2-12月,北部战区总医院烧伤整形科接受瘢痕切除术治疗的15例患者的增生性瘢痕（hypertrophic scars,HS）组织。获取HSFB后,将细胞分为3组,分别使用0、50、100μmol/L山萘酚对细胞进行处理,在处理后的第0、12、24、36、48 h采用MTT检测细胞的增殖情况,通过流式细胞技术检测不同细胞周期中的细胞占比;Hoechst 33258实验检测细胞的凋亡情况,Transwell实验检测细胞迁移能力;Western blot实验检测山萘酚对于蛋白激酶B(protein kinase B, Akt)、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B, p-Akt)表达的作用。将经过Akt si-RNA转染后的细胞分为4组,空白对照组、si-Akt组、50μmol/L山萘酚组、50μmol/L山萘酚+si-Akt组...     

山萘酚对兔耳增生性瘢痕抑制作用的研究

目的探讨山萘酚对兔耳增生性瘢痕(HS)的抑制作用。方法 4月龄新西兰大耳白兔8只, 4只雄兔, 4只雌兔, 体质量约(2.5±0.2)kg, 体质量范围为2.3～2.7 kg。采用随机数表法将8只大耳白兔随机分为山萘酚组和氯化钠组, 每组4只。兔耳瘢痕模型建模成功后, 对组织进行大体观察, 并行HE染色、Masson染色、免疫组化检测、Western-blot检测测定兔耳瘢痕组织内蛋白激酶B(Akt)和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)的表达水平。结果给药7 d后, 山萘酚组的瘢痕较氯化钠组的瘢痕颜色更淡, 表面更平, 触感稍软。HE染色可见山萘酚组表皮层及真皮层较氯化钠组稍薄、无明显增厚, 炎症细胞可见明显减少, 胶原纤维排列较整齐规律且有序, 成纤维细胞呈纺锤形、细长且排列较为规整。Masson染色可见氯化钠组过度堆积的胶原纤维, 山萘酚组可见胶原纤维束且胶原厚度较氯化钠组更薄、排列更整齐。免疫组化检测可见山萘酚组兔耳瘢痕p-Akt表达明显低于氯化钠组。Western-blot检测可见p-Akt表达明显低于氯化钠组, 但Akt的表达未见明显差异。结论山萘酚可通过抑制p-Akt的表达水平...     

A型肉毒毒素通过抑制SMAD3信号通路抑制兔耳瘢痕形成

目的 探讨A型肉毒毒素通过抑制SMAD3信号通路对增生性瘢痕形成的影响。方法 选取12只清洁级新西兰大白兔,将其随机分为对照组与观察组,每组各6只,制作瘢痕模型。建模成功后,观察组于创面9点每点注射2 U浓度为40 U/ml的A型肉毒毒素;对照组于造模后即刻于创面9点每点注射0.05 ml生理盐水。于术后30 d将动物处死取材。HE、Masson染色检测观察组织形态;实时荧光定量PCR检测Ⅰ型胶原(ColⅠ)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;蛋白质免疫印迹实验检测ColⅠ、α-SMA、SMAD3和SMAD3磷酸化的表达情况;免疫组织化学染色检测SMAD3磷酸化表达水平。结果 HE和Masson染色结果显示,经A型肉毒毒素治疗后,组织纤维化程度明显减轻,胶原沉积减少。实时荧光定量PCR检测结果发现,观察组的COLⅠ和α-SMA的mRNA均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。蛋白质免疫印迹实验结果发现,A型肉毒毒素能够显著抑制组织中COLⅠ、α-SMA蛋白的表达及SMAD3的磷酸化水平,但是不影响总的SMAD3表达情况。免疫组织化学染色结果显示,A型肉毒毒素能够明显...     

富血小板血浆促进成纤维细胞的生长和迁移

目的探讨富血小板血浆对成纤维细胞生长和迁移的作用。方法获取大鼠成纤维细胞,提取大鼠富血小板血浆。分别以大鼠血清(对照组)、血小板浓度为4×10~(11)/L、8×10~(11)/L和12×10~(11)/L的富血小板血浆处理细胞,采用MTT试验检测不同浓度的富血小板血浆对成纤维细胞增殖的作用;分别以大鼠血清(对照组)、血小板浓度为4×10~(11)/L和8×10~(11)/L的富血小板血浆处理细胞,通过Annexin V-FITC/PI染色法观察富血小板血浆对成纤维细胞凋亡的影响;Transwell实验检测富血小板血浆对成纤维细胞迁移的作用;通过Western blot实验检测富血小板血浆对成纤维细胞中TGF-β1、VEGF和bFGF蛋白的影响。结果与对照组相比,当血小板浓度为4×10~(11)/L、8×10~(11)/L和12×10~(11)/L的富血小板血浆作用细胞24 h时,对细胞增殖的促进比例分别为(23.66±5.83)%、(65.45±9.76)%和(90.59±7.69)%;不同血小板浓度的富血小板血浆均可以抑制成纤维细胞的凋亡,并促进其迁移;与对照组相比其差异具有统计学意义(P0.05)。富血小板血浆能够促进成纤维细胞中TGF-β1、VEGF和b FGF的表达。结论富血小板血浆能够通过增加成纤维细胞中的多种生长因子实现促进成纤维细胞生长和迁移的作用。     

基于MRI的阴茎深悬韧带及毗邻结构的三维重建

目的 建立阴茎深悬韧带三维图像,以探索对患者个体的阴茎深悬韧带的立体化多角度的观察方法.方法 以阴茎短小欲行阴茎延长术者作为受试者,于术前行磁共振成像(MRI)检查并将结果导入三维重建软件(MIMICS 10.0)中,重建阴茎深悬韧带、阴茎海绵体和耻骨联合等结构,并对其进行观察.结果 薄层MRI图像上可较为清晰的显示耻骨联合、阴茎海绵体、尿道海绵体,耻骨联合前下方和阴茎海绵体之间可见斑片状分布的阴茎深悬韧带.通过MIMICS 10.0可以对上述结构进行三维重建,对阴茎深悬韧带起止,以及其与阴茎海绵体的夹角、在阴茎海绵体上附着的范围等进行精确的描述.结论 基于MRI的阴茎深悬韧带及毗邻结构的三维重建,可对患者的阴茎深悬韧带进行动态、立体化多角度的观察,且利用重建后的图像还可为阴茎延长手术前判断阴茎海绵体延长长度,以及阴茎深悬韧带切除深度,提供一定的理论依据.     

5.31暴恐袭击批量伤员救治的医疗物资消耗及保障的探讨

目的 探讨马里5.31暴恐袭击批量伤员紧急救治医疗耗材与器械使用消耗及保障的情况,为批量伤员救治提供数据及经验. 方法 回顾5.31中国维和二级医院批量伤员通过救治使用消耗的医疗耗材与器械.统计24h、72h内(除外24h)使用量前五位医疗耗材与器械.统计分析24h内医疗耗材与器械及72h内(除外24h)使用消耗的情况. 结果 在本次救治中共使用31种医疗耗材与器械,其中手术室27种(87.10%).24h内使用消耗量前五位的医疗耗材与器械(包括无菌纱布等)占24h内使用总量的69.49%.72h内(除外24h)使用和消耗量前五位的医疗耗材与器械占72h内使用总量的76.36%.24h内使用消耗的量占72h内使用总量的91.47%.首个24h内使用的医疗耗材和器械与72h内(除外24h)比较差异有统计学意义(P<0.05). 结论 本次批量伤员救治中,第1个24h是最重要的医疗物品使用消耗时间段,保障充足的医疗物品,是成功救治的关键.     

负压封闭引流结合植皮术治疗严重皮肤撕脱伤患者的护理

目的总结严重污染的前臂皮肤撕脱伤患者行负压封闭引流加植皮术治疗的术后护理。方法对20例严重污染的前臂皮肤撕脱伤行负压封闭引流加植皮术患者的术后护理进行回顾性分析。结果 20例患者均未发生筋膜间室综合征及骨髓炎等并发症,所植皮片成活,均获愈合,愈合时间为(4.1±0.6)周。结论加强负压封闭引流装置的维护,保证有效的负压吸引和引流通畅,监测植皮术后皮片生长情况及观察患肢末梢血运等,可促进皮肤撕脱伤植皮术患者的康复。