紫外线照射引起血管内皮细胞损伤及其对TM活性的影响

本研究以紫外线作为损伤因素,并加以定量,以观察紫外线照射对血管内皮细胞的影响。结果表明,在不同程度的紫外线作用下,血管内皮细胞出现变园浮起、细胞溶解的不同的形态变化特征,当照射量大于1J/cm~2时,其存活率显著降低(P<0.01)。同时,在紫外线照射作用下,内皮细胞表面的血栓调节蛋白(Thrombomodulin简称TM)活性降低,其降低程度与照射量及照射后经过的时间有关。0.1J/cm~2照射量组24小时后可见明显下降(P<0.05);1J/cm~2照射量组3小时后显著降低(P<0.01);13.3J/cm~2照射量组照射后立即测定TM活性.可见显著降低(P<0.01),且随着时间的增加呈持续下降趋势。     

基因检测与肾脏病诊断

近年来,随着人类基因组计划的进行,基因检测应用于疾病诊断方面的研究取得了显著的进步,首先,通过连锁分析对染色体片段进行疾病区点定位,加深了对于家族性特殊疾病的认识。其次,基因标记图谱的改善使得公认的基因区点标记更精确。第三,许多基因已被标记在特定的染色体区域并被克隆。因此,当这种疾病基因标记在相同的区域内出现,这便提供了对该疾病的侯选基因突变进行分析的资料。第四,转基因动物模型的建立,使我们能够对有关特定基因的功能、特定基因突变的结果以及基因之间的相互关系进行研究,并且对治疗结果进行检测。1　基因检测方法及…     

维持性血液透析患者输血传播性病毒感染状况及其基因分析

目的研究维持性血液透析患者输血传播性病毒(TTV)感染状况,及进行其部分基因序列分析.方法设计TTVORF1部分基因引物,巢式PCR检测80例血液透析患者及12例血液透析工作人员血清标本,将PCR产物克隆、测序分析.结果血液透析患者TTV感染率为35%(28/80),12名工作人员中有1例呈TTV阳性(8.3%).与日本株相比较,本实验分离株TTVORF1部分基因同源性为96.7%.TTV合并HBV感染者8例(8%),合并HCV感染者5例(6%);TTV与HBV、HCV同时感染者2例(2%).TTV阳性患者中,有输血史者占57%.结论血液透析患者中存在严重的TTV感染,血液透析工作人员亦存在TTV感染.TTV可以与HBV、HCV重叠感染,TTV感染者可能与输血有关,但TTV的非血液传播同样应引起重视.     

中医辨证治疗胆汁返流性胃炎的临床观察

目的 :观察中医辨证治疗胆汁返流性胃炎的临床疗效。方法 :中西医病证结合 ,辨证施治 ,选择50例患者分为中医治疗组、西医对照组 ,治疗前后作胃镜检查 ,观察临床疗效。结果 :两组总有效率分别为85.7 %、73.4 %(P<0.05) ;治疗组对症状的缓解明显优于对照组(P<0.01)。结论 :采用中医辨证治疗胆汁返流性胃炎其疗效及对症状的缓解优于西医组 ,值得推广     

遗传性耳聋家系的SLC26A 4 IVS7-2A>G基因突变分析

目的检测常染色体隐性遗传耳聋家系SLC26A4IVS7-2A〉G基因突变情况,寻找耳聋患者的发病原因,为患者提供遗传咨询。方法收集耳聋家系及散发病例的临床资料,对患者进行纯音电测听检查;应用聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）和直接测序法,对2个家系的7名患者和35名散发病例进行SLC26A4exon7＋exon8基因突变检测。结果2个家系中发现SLC26A4IVS7-2A〉G突变,其中1个家系发生SLC26A4IVS7-2A〉G杂合性突变;1个系发生SLC26A4IVS7-2A〉G纯合性突变,该突变患者为极重度感音神经性耳聋。另外,在35名散发病例中发现1例携带IVS7-2A〉G杂合性突变。结论SLC26A4IVS7-2A〉G纯合性突变为致病突变。该位点具有较高的突变率,是导致常染色体隐性遗传的常见病因之一。     

CTX-M-38型β-内酰胺酶的克隆与表达

目的构建新型β-内酰胺酶CTX-M-38的表达载体。方法应用PCR扩增CTX-M-38基因全长编码序列,经NdeI、XhoI酶切后连接至pET-26b(+)表达载体,重组质粒经酶切及DNA测序确证后,转入大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。超声破碎法提取表达蛋白产物,检测其活性,等电聚焦电泳检测蛋白的等电点(pI)。结果PCR扩增获得894bp的产物,重组表达载体经NdeI、XhoI酶切及DNA测序后表明,目的基因已成功接入表达载体,重组菌的粗提物经头孢硝噻吩检测显示具有β-内酰胺酶活性,显示载体[pET-26b(+)/CTX-M-38]构建成功。蛋白pI为8.4。结论β-内酰胺酶CTX-M-38在原核表达细胞中实验了基因重组表达,为进一步分析酶的特性提供条件。     

LEN-5型β-内酰胺酶基因的克隆及原核表达

目的对来自肺炎克雷伯菌临床菌株的LEN-5型β-内酰胺酶进行基因克隆和重组表达。方法从相应临床菌株提取质粒DNA;以质粒为模板,PCR扩增LEN-5基因,扩增产物经NdeI、XhoI酶切后连接至pET-26b(+)表达载体,重组质粒经DNA测序确证后,转入大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达。超声破碎法提取蛋白表达产物,头孢硝噻吩检测其活性,并检测蛋白的等电点(pI)。结果PCR扩增获得879bp的产物,DNA序列显示该片断序列与目的序列完全一致。重组表达载体经NdeI、XhoI酶切及DNA测序后表明,目的基因已成功接入表达载体,表达产物经头孢硝噻吩检测显示具有β-内酰胺酶活性,显示载体〔pET-26b(+)/LEN-5〕构建成功。表达蛋白的等电点为7.6。结论β-内酰胺酶LEN-5基因在原核细胞中完成了重组和表达,为进一步做酶动力学及酶的其他分子生物学特性研究奠定基础。     

维持性血液透析患者经血液传播嗜肝病毒感染状况

目的：探讨血液透析（血透）患者HBV,HCV,HDV,HGV和TTV等经血液传播的肝炎病毒感染状况。方法;对80例长期维持性血透患者和12位血透工作人员应用ELISA法检测HBV两对半及HCV,HDV抗体;逆转录－套式PCR检测血清HGV RNA;巢式PCR检测TTV DNA。结果：80例患者中,经血液传播肝炎病毒感染51例（63.8%),其中HBV阳性21例（22.5％）,未检出HDV,HGV阳性15例（18.7％）,TTV阳性28例（35％）。二重或二重以上感染18例（22.5％）,其中二重感染12例（15.2%) ,三重感染4例（5％）,四重感染2例（2.5％）。HBV单独感染8例（10％）,合并HCV感染4例（5％）,合并TTV感染4例（5％）;与HGV和TTV三重感染3例（3.8％）,与HCV,HGV和TTV四重感染2例（2.5％）。HCV单独感染10例（12.5％）,合计TTV感染1例（1.2％）;与HGV和TTV三重感染1例（12.5％）。HGV单独感染8例（10％）,合并TTV感染2例（2.5％）。TTV单独感染15例（18.8％）。12例工作人员HBV,HCV,HDV和HGV检测均阴性,1例TTV阳性。与非输血组相比,输血 组除HDV外,HGV,HBV,HCV和TTV的感染率明显增加,均P＜0.05。结论：血液透析患者经血液传播性肝炎病毒感染严重,重叠感染率高,其高发生率与输血有关。     

整合素α2对神经母细胞瘤细胞粘附于胶原蛋白的调节作用

目的：探讨两价阳离子和针对整合素α2的 特异性阻断性单克隆抗体对神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH细胞粘附于胶原蛋白（Col）的影响，探讨整合素α2β1对该细胞粘附反应的调节作用。方法:将含有不同M g2+、Ca2+浓度和有或无抗α2单克隆抗体6F1的SK-N-SH细胞混悬液。加入96孔 平底非细胞培养板，此反应板已包被Ⅰ型大鼠尾Col（4 μg/well），所粘附的细胞用BCA方 法测定，以吸光度（A570）代表粘附细胞的数量。结果:Mg 2+能明显增加SK-N-SH细胞Ⅰ型Col的粘附反应；Mg2+浓度为1 mmol/L时，细胞 粘附的反应已接近高峰,与对照组相比A570分别为0.59±0.03和0.2 5±0.0 1 (P＜0.01），而Ca2+对细胞的粘附无明显影响；抗α2单克隆抗体6F1（10 mL /L）能显著阻断SK-N-SH细胞粘附于胶原蛋白(A=0.27±0.01)，其粘附水平接近无Mg 2+的粘附反应水平（A=0.32±0.01）。 结论:整合素α2介导 SK-N-SH细胞对胶原蛋白粘附反应，提示整合素α2可能参与调节神经母细胞瘤的转移。     

系统性红斑狼疮患者血清IL-18和sFas/sFasL的变化及相关性研究

目的 :研究系统性红斑狼疮 (SLE)血清IL - 18和可溶性sFas/可溶性sFas配体 (sFas/sFasL)的变化及相关性。方法 :采用ELISA检测 4 5例SLE患者和 18例正常人群血清中IL - 18,sFas及sFasL水平。结果 :SLE各组sFas/sFasL水平与正常对照组比较 ,差异具有非常显著性意义 (P <0 .0 1) ,其中相对活动期sFas较相对缓解期明显增高 (P <0 .0 1) ,sFasL无明显差异 (P >0 .0 5 )。IL - 18水平在SLE患者显著高于正常对照组 (P<0 .0 1) ,相对活动期患者较正常对照组和相对缓解期患者差异显著 (P <0 .0 1) ,而相对静止期患者血清水平则与正常对照组无明显差异 (P >0 .0 5 )。SLE患者和相对活动期患者血清IL - 18水平与sFas增高呈显著的正相关 (P <0 .0 1)。结论 :IL - 18,sFas及sFasL在SLE发病中有一定意义 ,IL - 18的变化与sFas表达具有相关性