Fas转染及抗体处理对舌鳞癌细胞Tca8113移植瘤形成和增殖的影响

目的　研究Fas转染和抗Fas单克隆抗体对舌鳞癌细胞系Tca8113裸鼠体内移植瘤形成和增殖的影响,探讨相关机制。方法　脂质体法以真核表达重组质粒pBK-fas转染舌鳞癌细胞系Tca8113。部分转染细胞行抗Fas单克隆抗体处理。未转染细胞、Fas转染细胞、Fas转染抗体处理细胞分别接种裸鼠皮下。观测移植瘤生长,绘制生长曲线。RT-PCR检测肿瘤细胞Fas mRNA表达。流式细胞术(FCM)检测肿瘤细胞凋亡、增殖及Fas蛋白表达。结果　Fas转染和抗体处理延迟肿瘤形成,抑制肿瘤增殖。Fas转染上调移植瘤Fas mRNA表达,提高Fas蛋白表达强度和凋亡指数,但不影响Fas蛋白阳性表达率和增殖指数。抗体处理不影响Fas mRNA和蛋白表达,但可提高凋亡指数,降低增殖指数。结论　Fas转染抑瘤效应是上调Fas转录和表达、促进凋亡的结果。抗Fas单克隆抗体抑瘤效应则与激活凋亡和抑制增殖有关。     

靶向人端粒酶反转录酶RNA干扰载体质粒的构建与筛选

目的:设计靶向人端粒酶反转录酶的RNAi序列,构建shRNA表达载体质粒和hTERT真核表达质粒,采用共转染工具细胞筛选出有效靶点.方法:首先以EASYMsiRNA软件针对hTERT设计5个靶点siRNA序列和1条通用阴性对照序列,合成shRNA oligo表达框架,将其分别连接至经酶切消化的载体质粒、pGCsi-U6/Neo/GFP、pGCL-GFP,重组质粒转化1)H5α,阳性克隆进行PCR与测序鉴定;然后从cDNA文库中利用PCR钓取hTERT基因片段,与表达载体pEGFP-C1分别进行双酶切、纯化及定向连接、重组、转化,阳性克隆行PCR与测序鉴定,荧光镜检GFP表达;最后上述2个质粒系统共转染293T细胞,Western印迹检测hTERT蛋白表达水平,筛选最有效序列.应用SPSS16.0软件包对所得数据进行单因素方差分析.结果:BLAST检索5条hTERT siRNA序列均能100%命中,且不与其他基因同源:PCR鉴定及阳性克隆测序验证shRNA oligo与载体质粒成功连接、重组.hTERT基因PCR钓取片段产物大小1.4 Kp,经酶切与质粒连接,形成pEGFP-C1-hTERT表达载体,阳性克隆PCR、测序鉴定确定成功重组;转染293T细胞48h时荧光镜F可观察到GFP标记的hTERT融合蛋白.hTERT表达质粒和shRNA载体质粒共转染293T细胞,48h时Western印迹榆测结果显示:实验各组hTERT蛋白量均有不同程度减少,而内参对照B-aetin和GAPDH尤明显变化.经β-actin校正,得到各组hTERT蛋向相对表达量:KD No.1-5实验组与NC组相比,hTERT基因表达均得到不同程度的敲减(54.61%～76.84%.P＜0.05),其中No.4敲减效能最高.结论:5条RNAi设计序列均可有效、特异性地沉默hTERT基因的转录和表达水平,其中以5'-GCAAGTTGCAAAGCArrGGAA-3'敲减效能最优;构建外源基因的过表达载体质粒转染工具细胞,可作为RNAi敲减效率筛选的验绩标靶.     

两种联合局部麻醉法对下颌第一磨牙急性牙髓炎开髓治疗的镇痛效果比较

目的探讨下牙槽神经阻滞麻醉联合颊侧浸润或牙周膜注射对下颌第一磨牙急性牙髓炎开髓治疗的镇痛效果。方法40例下颌第一磨牙急性牙髓炎患者随机分为2组,均予以4%盐酸阿替卡因（含1∶100 000肾上腺素）1.7 mL行下牙槽神经阻滞麻醉,另取0.4 mL相同麻醉剂,A组加行颊侧浸润麻醉,B组加行牙周膜注射。阻滞麻醉后等待5 min并完成疼痛评估,然后行颊侧浸润或牙周膜注射,等待5 min并完成疼痛评估。另一名医生行开髓,作开髓疼痛评估。由牙医助理记录各种注射麻醉及开髓疼痛的视觉模拟量值。结果B组有1例因下牙槽神经阻滞麻醉失败被排除,39例纳入统计分析。2组年龄（t=1.42,P=0.22）、性别（χ2=1.97,P=0.60）、术前疼痛的差异（t=0.93,P=0.71）均无统计学意义。所有患者在下牙槽神经阻滞麻醉起效后行颊侧浸润或牙周膜注射均感到无痛或轻度疼痛。2组下牙槽神经阻滞麻醉疼痛差异无统计学意义（t=0.62,P=0.71）,A组牙周膜注射和B组颊侧浸润疼痛差异无统计学意义（t=1.19,P=0.33）。A组麻醉成功率80.0%（16/20）,B组麻醉成功率为84.2%（16/19）,二者差异无统计学意义（X^2=2.45,P=0.33）。结论 下牙槽神经阻滞麻醉联合颊侧浸润或牙周膜注射应用于下颌第一磨牙急性牙髓炎开髓治疗均可取得较高的麻醉成功率。     

组织瓣轴心动脉超声检测在口腔颌面外科中的应用

目的探讨术前组织瓣轴心动脉超声检测在组织瓣选择和设计中的应用价值。方法组织瓣转移修复术前．对116例患者的137条轴心动脉进行高频超声检测．判断其有无变异及动脉硬化，测量其内径、斑块大小、狭窄度及血流．对其走行进行体表定位并与术中所见进行对照。术后随访组织瓣存活情况。结果超声检测发现1例单侧颈横动脉缺如．其余137条轴心动脉均能显示。14例患者的17条（17／137，12．4％）轴心动脉存在明显的动脉硬化及不同程度的管腔变细或局部狭窄．其中血管内径最细仅约0．5mm，内径狭窄度最大达50％。除3例在术中没有使用皮瓣外，113例患者均根据超声检测结果选择了组织瓣．其中9例（9／113．7．96％）在术中选择了备用组织瓣。113例的轴心动脉体表定位与术中对照均一致。术后随访2～36周．110例（110／113．97．3％）患者（包括术中选择备用组织瓣的9例）组织瓣存活，2例（2／113，1．77％）部分坏死，1例（1／113，0．89％）完全坏死。结论带轴心动脉组织瓣转移修复口腔颌面部组织缺损术前高频超声检测可以明确组织瓣轴心动脉有无变异或动脉硬化．评价轴心动脉的血管条件及血流情况，并准确进行体表定位，为临床上选择和设计组织瓣提供有价值的参考信息。     

RANKL、MMP-9和MMP-2在成釉细胞瘤中的表达及意义

目的：探讨RANKL、MMP-9和MMP-2与成釉细胞瘤骨吸收机制之间的关系。方法：应用免疫组化、荧光定量RT—PCR及Western印迹方法，分别在不同分子水平检测RANKL、MMP-2和MMP-9在成釉细胞瘤中的表达，所有实验数据均经SPSS11．0统计软件包进行分析处理，组间比较采用t检验。结果：在所有成釉细胞瘤标本中，3种方法均可检测到RANKL、MMP-2和MMP-9的表达。其中，RANKL各型成釉细胞瘤中均呈恒定的高表达，而荧光定量RT—PCR检测结果显示，MMP-2在基底细胞型成釉细胞瘤中的表达水平显著高于其他两型（P〈0．05）。结论：MMP-2、MMP-9及RANKL可能共同参与成釉细胞瘤引起的骨质吸收过程。与MMP-9相比，MMP-2可能与成釉细胞瘤的侵袭性更为相关。     

舌鳞癌发生发展过程中COX-2蛋白表达的研究

目的 :探讨环氧合酶 -2 (COX -2 )在舌鳞癌的表达及其与微血管密度和舌鳞癌临床病理特征的关系。方法 :应用免疫组化SP法 ,检测 5 9例舌鳞癌标本及 45例增生性病变 (轻、中、重度不典型增生分别为 2 2例、2 0例、3例 )和癌旁正常鳞状上皮 3 6例中COX -2蛋白的表达情况和 5 9例舌鳞癌中的微血管密度 ,并对这些指标进行相关分析。结果 :在癌旁正常上皮、轻、中、重度不典型增生上皮和舌鳞癌组织中 ,COX -2蛋白异常表达检出率分别为 8.3 % ( 3 / 3 6)、4.5 % ( 1/ 2 2 )、5 .0 % ( 1/ 2 0 )、0 ( 0 / 3 )和 45 .8% ( 2 7/ 5 9)。COX -2蛋白在癌旁正常组织的表达 ,与舌鳞癌组织的表达差异有显著性 (P <0 .0 0 1) ,与不典型增生总体表达差异无显著性 (P >0 .0 5 )。等级相关分析结果显示 ,COX -2表达异常与组织学分级均显著正相关 (相关系数r =0 .418,P值 <0 .0 0 1)。COX -2蛋白表达上调与舌鳞癌年龄、性别、淋巴结转移、组织分化程度和临床分期无关 (P >0 .0 5 ) ;也和微血管密度的表达无统计学差异 (P >0 .0 5 )。结论 :COX -2可能在舌鳞癌的发生发展中起着重要促进作用 ,可能是舌鳞癌化学预防的一个分子靶点。     

颌骨中心性粘液表皮样癌的临床表现及治疗

目的 :探讨颌骨中心性粘液表皮样癌 (centralmucoepidermoidcarcinomaofthejaws ,CMCJ)的临床特点及诊治原则。方法 :回顾 5例CMCJ临床资料并进行随访。结果 :CMCJ常见临床表现为局部肿胀和疼痛 ,X线表现为单房或多房透光阴影 ,光镜下所见同涎腺粘液表皮样癌。所有病例均行根治术 ,1例术后 6个月死于并发症 ,4例经 0 .5 -14年随访 ,未见复发及转移。结论 :CMCJ的确诊有赖于详尽的临床检查 ,治疗应首选根治术     

放射诱导调控序列的合成及其辐射诱导特性的研究

目的　合成放射诱导调控序列并鉴定其辐射诱导特性。方法　利用人工寡核苷酸片段合成含有 6个重复CArG元件的放射诱导调控序列 ,以绿色荧光蛋白 (GFP)作为报告基因转染Tca8113细胞检测其辐射诱导特性。结果　低剂量放射线照射可诱导这种人工调控序列增强GFP在Tca8113细胞中的表达 ,且 3Gy剂量最为明显 ,提高到放射前的 16 1%。结论　人工合成放射诱导调控序列在低剂量放射线照射下能明显增强其下游外源性基因的表达 ,为进一步研究放射 -基因治疗奠定了基础。     

带血管蒂游离组织瓣同期修复舌癌术后缺损及临床评价

目的 评价带血管蒂游离组织瓣修复舌嶙癌术后缺损的外形及功能恢复效果。方法32例舌癌患者进行根治术的同期．分别采用带血管蒂的前臂游离皮瓣、足背游离皮瓣进行修复，术后观察组织瓣成活状况．舌功能和外形，并评价表评价患者的语言和（或）吞咽的功能恢复情况.结果 32例中,31例成活,成活率93.9%,术后观察见舌形态良好,语言,咀嚼,吞咽,证食等功能恢复至正常或接近正常,未发现复发及死亡病倒.结论 舌癌根治术同期选择带血管蒂游离组织瓣修复,可以较好地恢复舌的功能,并可能提高生存率.     

ICU在老年口腔癌患者术后监护和治疗中的作用

目的:探讨ICU在老年口腔癌患者术后的监护和治疗作用及必要性。方法:62例老年患者术前完善各项辅助检查排除手术禁忌,均接受根治性手术。术后转入ICU监护和治疗1至3天,其中28例行气管切开术,其余34例患者保留气管插管。结果:3例患者术后心电图提示心肌供血不足,4例出现心律失常,2例拔除气管插管后发生呼吸道梗阻。经相关处理,患者得到及时抢救,62例患者无1例死亡。结论:ICU能够对老年口腔癌患者术后进行及时、连续和系统的严密监护和治疗,有利于降低术后死亡率。