肺癌单克隆抗体制备及研究

以纯化肺癌肿瘤相关抗原免疫BALB/c系小鼠,应用杂交瘤技术,建立了抗人肺癌(腺癌及鳞癌)单克隆抗体CL2B细胞株。用间接免疫荧光技术检测36例肺癌肿瘤组织的冰冻切片,其中32例找到带有强荧光的肿瘤细胞,而另4例经HE染色证明末初到肿瘤细胞。CL2B单克隆抗体除对某些肿瘤(宫颈癌、乳腺癌)有弱阳性反应以外,对正常人的肺及其它脏器和血细胞都没有交叉反应,有很好的选择性。以CL2B单抗作用于肺癌细胞表面相应的抗原后,癌细胞生长受到抑制,且对抗肿瘤药物的敏感性发生变化。     

2008年南京医科大学第一附属医院细菌及真菌耐药性监测

目的 了解2008年我院临床分离病原菌分布及其对常用抗菌药物的耐药性.方法 细菌及真菌鉴定采用API系统;细菌药物敏感试验测定采用纸片扩散法(K-B法),根据CLSI 2008版判断结果;真菌药物敏感试验测定采用Rosco纸片法,判断标准由Rosco公司提供:WHONET 5.4软件进行统计分析.结果 2008年我院共分离出病原菌4972株,其中,革兰阳性菌1106株,占22.2%,革兰阴性菌2475株,占49.8%,真菌1386株,占27.9%.耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)的菌株分别占59.2%和52.7%.葡萄球菌属中甲氧西林耐药株对大多数常用抗菌药物的耐药率显著高于甲氧西林敏感株,未发现对万古霉素、替考拉宁和利奈唑胺的耐药株.肠球菌属中,屎肠球菌和鸟肠球菌对多数抗菌药物的敏感率低于粪肠球菌,3种肠球菌均已出现少数对万古霉素或替考拉宁耐药的菌株.肠杆菌科细菌中大肠埃希菌和克雷伯菌属的ESBLs分离率为59.4%和45.3%,产ESBLs菌株对常用抗菌药物的耐药率高于非产ESBLs菌株.非发酵革兰阴性杆菌对抗菌药物的耐药率均显著高于肠杆菌科细菌.结论 细菌耐药性呈增长趋势,白假丝酵母菌的分离率升至第1位,需加强耐药性监测,并采取有效控制措施.     

中性粒细胞和淋巴细胞VCS参数在MDS和AA患者中的变化及意义

目的研究骨髓增生异常综合征(MDS)和再生障碍性贫血(AA)患者外周血中性粒细胞和淋巴细胞VCS参数的改变及其诊断价值。方法通过LH750血液分析仪(Beckman Coulter)进行血常规检测,分析85例存在全血细胞减少的患者中性粒细胞和淋巴细胞VCS参数。其中MDS 45例,AA 40例,并以120例健康体检者为对照组。结果与对照组相比,AA患者中性粒细胞平均体积(MNV)和淋巴细胞平均散射率(MLS)增高,而MDS患者MNV、中性粒细胞平均电导率(MNC)、淋巴细胞平均体积(MLV)、淋巴细胞平均电导率(MLC)和MLS均增高,中性粒细胞平均散射率(MNS)降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。MDS和AA患者的MNS、MLV和MLC比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论外周血中性粒细胞和淋巴细胞VCS参数对MDS和AA患者的诊断及鉴别诊断具有一定价值。     

泌尿系感染假丝酵母菌属的分布及耐药性分析

目的 了解医院感染泌尿系统假丝酵母菌属的分布及其耐药性,为临床治疗及预防假丝酵母菌属的感染提供依据.方法 收集医院2009年所有中段尿培养假丝酵母菌属阳性株,分析其科室分布及耐药性.结果 3500份中段尿培养标本中,有1055份阳性,阳性率为30.1％,其中171份标本检出假丝酵母菌属,检出率为16.2％;主要发生在老年医学科、老年ICU、急诊科及ICU,分别占46.2％、28.1％、6.4％、6.4％;171株假丝酵母菌属对氟康唑、伏立康唑、卡泊芬净、伊曲康唑、5-氟胞嘧啶和克霉素的耐药率分别为62.6％、50.3％、26.9％、11.7％、4.1％和3.5％;两性霉素B和制霉菌素的耐药率均为0.结论 假丝酵母菌属感染在医院感染性疾病中的比例有上升趋势,引发泌尿系感染的假丝酵母菌属多为抵抗力弱的老年患者和ICU患者;对氟康唑耐药率最高;临床应重视对怀疑泌尿系感染的患者进行真菌培养鉴定及药敏试验,以合理使用抗菌药物.     

大蒜素对MRSA和白念珠菌后效应的研究

目的 测定大蒜素对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和白念珠菌(C.alb)的最低抑菌浓度(MIC)、抗菌药后效应(PAE)和抗菌后亚抑菌浓度效应(PASME).方法 取临床分离的MRSA和C.alb各1株,以肉汤稀释法测定大蒜素MIC;以菌落计数法测定菌落形成单位(CFU),根据CFU做生长曲线,计算PAE和PAS...     

定量检测血浆RASSF1A甲基化在晚期肺癌患者个体化治疗中的应用

摘要:目的：定量检测晚期肺癌患者化疗过程中血浆RAS相关区域家族1A基因(RASSF1A)甲基化水平,探讨其在个体化治疗中的应用价值。 方法：采集24例晚期肺癌患者化疗前后静脉血共135份,用荧光定量甲基化特异性PCR (MSP)检测RASSF1A基因的甲基化水平,观察化疗前后的变化情况。 结果：13例部分缓解组(partial remission,PR)患者化疗后甲基化定量水平明显升高(P＜0.05),而11例未缓解组(stable disease,SD或progressive disease,PD)的患者化疗前后甲基化水平无明显变化;生存时间≥12个月的13例患者化疗后甲基化定量水平也明显升高(P＜0.01),而生存时间<12个月的11例患者化疗前后甲基化水平无明显变化。生存曲线分析显示,化疗后有甲基化水平升高改变的患者总体生存时间更长(P＜0.01）。 结论：晚期肺癌患者化疗前后血浆RASSF1A甲基化定量水平的检测,对评估化疗的疗效及预后有一定的价值,对个体化化疗的药物选择有一定的指导意义。     

慢性HBV感染者血浆循环DNA水平相关因素的研究

目的探讨影响慢性HBV感染者血浆循环DNA水平变化的相关因素。方法选择145例慢性HBV感染者作为研究对象,其中慢性乙型肝炎轻度30例、中度30例、重度25例;乙肝后肝硬化30例;肝癌30例。选择30例健康体检者作为对照组。采用双重荧光定量PCR法检测血浆中循环DNA的含量。结果随着慢性乙型肝炎病情加重,外周循环DNA水平逐渐升高,但在肝硬化组循环DNA水平反而降低,肝癌组又显著升高,组间差异具有统计学意义(P<0.05)。在115例慢性HBV感染者中HBeAg阳性79例,HBeAg阴性36例,HBeAg阳性患者外周循环DNA水平(68.79±14.23ng/mL)显著高于HBeAg阴性患者(23.68±12.56ng/mL)(t=2.162,P=0.032);慢性HBV感染者外周循环DNA水平与ALT和AST水平呈显著正相关,r值分别为0.612和0.632,P值分别为0.014和0.021,但与血清HBVDNA无相关性(P>0.05)。结论慢性HBV感染者外周循环DNA水平与病毒复制无关,但可反映肝细胞的炎症坏死程度。     

卵巢癌细胞通过P38 MAPK通路促进CD8~+调节T细胞的生成

目的探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在卵巢癌细胞(SKOV3)诱导CD8+Treg分化过程中的作用。方法建立SKOV3与健康人CD8+T细胞体外共培养体系,设置CD8+T细胞单独培养组为对照组。共培养5 d后,收集各组CD8+T细胞,荧光定量PCR和流式细胞术检测CD8+T细胞中Treg相关标志物(CD25、Foxp3、CD28)的表达率;功能抑制试验检测两组CD8+T细胞对nave CD4+T细胞增殖能力的影响;Western blot检测MAPK通路相关蛋白(ERK/p-ERK、JNK/p-JNK、P38 MAPK/p-P38 MAPK)的表达水平;P38 MAPK特异性抑制剂SB203580预处理CD8+T细胞后,评价CD8+T细胞中Treg相关标志物(CD25、Foxp3、CD28)的表达变化。结果共培养组CD8+T细胞中CD25及Foxp3表达率均显著高于对照组(P0.05),CD28表达率显著低于对照组(P0.05);共培养组CD8+T细胞相比对照组,抑制nave CD4+T细胞的增殖力增强;Western blot结果显示,共培养组p-P38 MAPK的表达水平显著高于对照组(P0.05),SB203580预处理后CD8+T细胞中Treg相关标志物表达率均下调。结论卵巢癌细胞通过活化CD8+T细胞的P38 MAPK信号通路诱导具有抑制作用的CD8+Treg的生成,促进肿瘤进展。     

我国2009至2010年MOHNARIN项目临床分离常见病原菌的耐药监测

目的 监测我国主要城市三级甲等医院住院患者的细菌耐药状况,了解临床分离病原菌分布及耐药趋势.方法 定点收集来自全国17座城市19家医院的6507株临床分离细菌,4691株分离白研究病房,1816株分离自研究病房以外.由中心实验室采用美国临床和实验室标准协会(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)推荐的琼脂二倍稀释法测定抗菌药物最低抑菌浓度值.采用统计软件SPSS 17.0计算MIC50、MIC90和MIC范围,并根据CLSI 2010颁布抗菌药物临界浓度标准进行耐药分析.结果 来自研究病房的4691株细菌中,革兰阳性菌1156株,占24.6％,革兰阴性菌3535株,占75.4％.最低抑菌浓度检测结果显示,甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌和甲氧西林耐药表皮葡萄球菌检出率分别为51.6％(325/630)和87.0％ (228/262),未发现对万古霉素中介或耐药的葡萄球菌.凝固酶阴性葡萄球菌对替考拉宁有2.5％( 16/642)的中介率和1.6％( 10/642)的耐药率,对利奈唑胺耐药率为0.5％ (3/642).粪肠球菌对氨苄西林耐药率为17.1％(19/111),屎肠球菌则高达85.0％ (164/193);发现3株对糖肽类耐药的屎肠球菌,耐药率1.5％(3/193).青霉素耐药肺炎链球菌和青霉素中介肺炎链球菌的检出率按口服青霉素标准判定分别为41.2％( 145/352)和37.2％(131/352);按静脉对非脑膜炎标准判定分别为0.0％( 0/352)和6.0％(21/352).肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗生素仍保持很高的敏感性,耐药率基本小于2.0％,此外,替加环素、拉氧头孢、磷霉素、阿米卡星也具有很好的抗菌活性,耐药率均在10.0％以下.非发酵革兰阴性菌中铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌对亚胺培南的耐药率分别为23.1％(139/601)和53.5％(419/784),其中鲍曼不动杆菌耐药率较2007至2008年的监测结果有明显增加.多黏菌素、替加环素、米诺环素和磷霉素对鲍曼不动杆菌表现出较好的体外抗菌作用.结论 与以往的监测结果比较,除鲍曼不动杆菌耐药率增长较明显外,其他菌种(属)耐药状况稳定.利奈唑胺、替加环素等新抗菌药物中,也已发现耐药菌株.细菌耐药不容忽视,合理用药不容疏忽.     

T淋巴细胞亚群结合遗传学检测在初发急性白血病中的相关研究

目的 通过检测急性白血病(Acute Leukemia,AL)患者外周血中T细胞亚群来了解初发患者的免疫功能,同时结合细胞遗传学的变化进一步探讨白血病发生、发展及转归与细胞免疲的关系.方法 采用多参数流式细胞术分析172例初发急性白血病患者T细胞亚群,以CD4/CD8＜1为比例倒置;常规染色体核型结合荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)检测分析有元核型异常.结果 所有患者中共有118例(68.6%)出现CD4/CD8比例倒置,CD4/CD8平均表达率在患者组为0.99±0.6,在对照组为1.9±0.5,两者差异有明显统计学意义(P=0.005);根据遗传学特征将急非淋(ANLL)和急淋(ALL)分成3组:预后良好组、预后中等组、预后较差组,CD4/CD8在预后良好组和预后中等组差异无明显统计学意义(P=0.629),预后良好组和预后较差组,以及预后中等组和预后较差组差异均有明显统计学意义(P=0.000,P=0.005);CD4/cD8比值在不同年龄组差异无明显统计学意义(P=0.591).结论 CD4/cD8比例倒置直接导致免疫功能的紊乱,影响机体的肿瘤免疫效应.细胞遗传学检查被认为是AL重要的预后相关指标,伴染色体核型高度异质性的患者免疫监视功能更为低下,该类患者肿瘤细胞更易适脱免疫监视而加速肿瘤的发生与发展,如能充分了解患者淋巴细胞亚群和功能,以进一步了解患者免疫状态,对临床个体化治疗有积极地指导作用.