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目的构建高效表达菌株,以大量表达大肠杆菌T蛋白的预苯酸脱氢酶(PDH),为研究T蛋白双功能结构域CM和PDH的相互协同作用以及T蛋白抑制剂对其影响提供活性蛋白材料。方法利用pGEX高效融合表达系统将PDH与谷光甘肽疏基转移酶(GST)编码序列在表达宿主BL21实现高效表达,并利用对GST具有亲和作用的GlutathioneSepharose4B琼脂糖珠进行亲和层析以对其分离纯化。结果表达产物达菌体总蛋白的40%,可溶性目的产物得量为240mg·L-1,利用亲和层析法纯化后纯度达92.5%,GSTPDH融合蛋白的PDH的比活为38U·mg-1。结论本法成功构建高效表达PDH菌株,表达量高,纯化度高,GST-PDH酶活性正常,为进一步研究奠定基础。 相似文献
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全人源肝癌噬菌体单链抗体的筛选及特异性鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
目的对全人源肝癌噬菌体单链抗体库进行鉴定,筛选肝癌抗体,同时对抗体的活性及特异性进行鉴定。方法PCR鉴定阳性重组菌TG1中人肝癌ScFv的插入率。先以人成纤维细胞吸附后再以体外培养的肝癌细胞SMMC7721为抗原对所建抗体库进行3轮“吸附洗脱扩增”的亲和筛选。将筛选后的ScFv进行PCR鉴定及双酶切鉴定;通过ELISA法及FCM鉴定其与人肝癌细胞及正常细胞的结合活性。结果ScFv基因插入率为70%。在亲和筛选过程中,肝癌噬菌体单链抗体得到富集,收获率逐轮得到提高,第3轮为第1轮的214倍。筛选后的ScFv进行PCR鉴定及双酶切鉴定,均可检测到目的基因。ELISA分析结果显示18个克隆与SMMC7721呈阳性反应,阳性率为90%,15个克隆与成纤维细胞有交叉反应。得到3株肝癌单链抗体。ScFv的FCM鉴定表明,以正常胎肝细胞L02为对照,ScFv与肝癌结合比率为41.3%。特异性鉴定表明,其与肝癌细胞结合活性明显高于正常细胞。结论利用噬菌体抗体库技术结合减数筛选得到了肝癌噬菌体单链抗体及其基因,且筛选后的抗体片段与人肝癌细胞有特异性的结合活性。 相似文献
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随着卫生体制改革的不断深入,在卫生立法不断完善的新形势下,黄冈市卫生局为强化行政执法进一步理顺卫生监督体系,于2004年2月8日由原市卫生防疫站正式组建成黄冈市卫生监督局。一年来,市卫生监督局依据法律、法规所赋予的职责,以党的“十六大”精神为指导,认真实践“三个代表,’的重要思想,坚持以“解放思想、更新观念、深化改革、内强素质、外村形象”的要求, 相似文献
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鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤(NIP)属上皮源性良性肿瘤,其特点是上皮向基质内呈乳头状增生,高复发性、破坏性生长方式及易恶性变为其临床特性,手术切除是治疗NIP的最佳选择。以往所采取的手术方式为鼻侧切开术、Caldwell-luc手术及鼻内径路肿瘤切除术,国内许庚、韩德民最早将鼻内镜手术技术应用于鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤。我科1999~2001年应用鼻内镜技术治疗NIP 15例,取得了较为满意的效果,现总结如下。 相似文献
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外周血干细胞移植(APBSCT)是经大剂量放、化疗或其他免疫抑制剂预处理,清除受体内的肿瘤细胞、异常克隆细胞,阻断发病机制,然后把造血干细胞移植给受体,使受体重建正常造血及免疫功能。,而达到治疗目的的一种手段。与骨髓移植相比,APBSCT有如下优点①外周血中造血干细胞收集比较方便,无需麻醉,也无需多部位骨髓穿刺之痛 相似文献
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预防为主是我国卫生工作的方针。精神疾病的预防是指在尽可能的范围内,采取有效措施,创造条件,防止或减少精神疾病的发生、发展和复发,以及对患者本身、家庭、周围人员及社会的不利影响,病因未明者,在现阶段只能开展一般性预防工作。 相似文献