Ki-67基因siRNA表达质粒的构建、鉴定及功能研究

目的构建肿瘤增殖基因Ki-67小干扰RNA(siRNA)表达质粒，研究其对人肾癌细胞Ki-67基因表达的阻抑作用，探索肾癌基因治疗新的途径。方法设计有小发夹机构的2条Ki-67 siRNA对应模板DNA序列，煺火处理后克隆至pSliencer 3．1质粒，构建重组质粒pSliencer-Ki-67。将pSliencer-Ki-67转染人肾癌786—0细胞，采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot检测Ki-67表达。结果酶切及测序证实质粒pSliencer-Ki-67构建成功。其可显著抑制786-0细胞Ki-67 mRNA、Ki-67蛋白表达。结论成功构建的Ki-67 siRNA表达质粒pSliencer-Ki-67能抑制人肾癌786-0细胞Ki-67基因表达。     

Ki67基因干扰对裸鼠人肾癌细胞移植瘤的抑制作用

目的:探讨靶向Ki67基因干扰腺病毒(Ad-Ki67)对裸鼠人肾癌移植瘤Ki-67基因表达和肿瘤生长的影响.方法:建立人肾癌移植瘤模型,瘤体内注射Ad-Ki67,定期测量肿瘤体积,激光共聚焦显微镜观察移植瘤组织Ki-67抗原表达,原位末端标记法(TUNEL)检测肿瘤细胞凋亡.结果:Ad-Ki67能将Ki67基因有效沉默.Ad-Ki67组和Ad-EGFP组Ketr-3细胞Ki-67抗原表达水平分别为对照组的(78.7±6.5)%、(95.4±8.6)%:与对照组细胞凋亡阳性率(10.7±2.4)%比较,Ad-Ki67、Ad-EGFP组分别为(43.7±3.6)%和(21.8±2.5)%,表明Ad-Ki67能有效诱导肿瘤细胞凋亡;Ad-Ki67能显著抑制肿瘤的生长,接种5周后Ad-Ki67组肿瘤体积为(469.5±41.6)mm,.Ad-EGFP组为(664.3.5±47.8)mm3,PBS组为(884.9±52.5)mm3.结论:靶向Ki67基因的干扰腺病毒Ad-Ki67对裸鼠肾癌移植瘤有显著的治疗效果,为治疗肾癌提供新的平台.     

溶瘤腺病毒介导RNA干扰人端粒酶逆转录酶抑制HeLa细胞生长

目的观察表达人端粒酶逆转录酶siRNA（hTERT-siRNA）的溶瘤腺病毒ZD55-TERT-siRNA对体外培养人宫颈癌HeLa细胞生长及hTERT基因表达的影响。方法以溶瘤腺病毒ZD55-EGFP、表达hTERT-siRNA 的增殖缺陷腺病毒AD-TERT-siRNA和增殖缺陷腺病毒AD-EGFP作为对照组。不同滴度四种病毒分别感染HeLa细胞,结晶紫法检测细胞毒作用,MTT法测定细胞生长抑制率; RT-PCR、Western blot、免疫细胞化学（ICC）法分别检测hTERT 的mRNA、蛋白质及抗原表达,Western blot和ICC法分别测定腺病毒E1A蛋白及抗原表达。结果对HeLa细胞的生长抑制作用和细胞毒作用ZD55-TERT-siRNA＞AD-TERT-siRNA和ZD55-EGFP＞AD-EGFP;ZD55-TERT-siRNA和ZD55-EGFP感染的HeLa细胞表达E1A;抑制hTERT表达作用依次为ZD55-TERT-siRNA＞AD-TERT-siRNA＞ZD55-EGFP、AD-EGFP。结论溶瘤腺病毒介导RNA干扰hTERT能有效抑制HeLa细胞生长及hTERT基因表达。     

反义Ki-67肽核酸对裸鼠人肾癌细胞移植瘤的治疗作用

目的:探讨Ki-67基因反义肽核酸(AS-PNAs)在体内对小鼠人肾癌移植瘤Ki-67表达和肿瘤生长的影响.方法:建立人肾癌移植瘤裸鼠模型,瘤体内注射反义肽核酸(AS-PNAs),定期测量肿瘤体积,处死小鼠后采用免疫组化、Western blot检测肿瘤Ki-67抗原表达,原位末端标记法(TUNEL)检测肿瘤细胞凋亡,并与反义寡核苷酸(AS-ODN)处理组对照.结果:AS-PNAs处理组肿瘤生长受押(513.2±64.2)mm3,Ki-67表达下降(23.0±2.4)%、(59.7±2.3)%,细胞凋亡增加(31.1±2.0)%,与AS-ODN处理组(868.9±128.2)mm3、(33.6±2.6)%、(85.7±4.4)%、(18.3±2.3)%比较差异有显著性(P＜0.01).结论:反义Ki-67肽核酸能抑制小鼠人肾癌移植瘤Ki-67基因的表达,诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤生长,且优于反义寡核苷酸.     

血清中期因子在肾癌患者外周血中的表达及其临床意义

【摘要】 目的 检测肾癌（renal carcinoma,RCC）患者血清中期因子(midkine, MK)水平,探讨血清MK的测定在肾癌疾病诊断和预后判断方面的价值。方法 以2016年6月至12月就诊于徐州医科大学附属医院的63例原发肾癌患者为研究组,45例肾良性病变（肾结石、肾囊肿）和30例健康体检者为对照组,收集临床资料,分别抽取肾癌患者术前、术后（第7天）静脉血和对照组静脉血,用ELISA方法检测各组外周血中MK水平。并进行统计学分析,比较研究不同组中MK的表达差异。结果 ①外周血 MK值在健康体检组、肾良性病变组、肾癌组（术前）分别为(27.33±3.19) ng/L、(34.63±2.28) ng/L、(60.25±1.88) ng/L,肾癌组（术前）高于肾良性病变组高于健康体检组,差异具有统计学意义(P<0.01);②外周血 MK值在肾癌组（术前）和肾癌组（术后）分别为(60.32±2.01)ng/L和(50.36±3.12)ng/L,肾癌组（术前）高于肾癌组（术后）,差异具有统计学意义(P<0.01);③肾癌分期与外周血MK值正相关,差异具有统计学意义( P<0.01)。结论 ①血清MK在肾癌中表达较肾良性病变和健康体检者增高;②血清MK在肾癌（术前）高于肾癌（术后）;③肾癌分期与血清MK值正相关,MK的升高也预示着肾癌患者较差的预后,表明血清中MK可能成为诊治肾癌的有效生物学标记物。     

SHA.LIN、S.T.O.N.E.评分系统和Guy's分级法在预测输尿管软镜术后结石清除率的临床应用及降低清除率的风险因素分析

目的:分析SHA.LIN、S.T.O.N.E.评分系统和Guy's分级法在预测输尿管软镜术后结石清除率的临床应用及降低清除率的风险因素。方法:回顾性分析2016年2月～2018年12月我院收治的105例行输尿管软镜术患者的临床资料,根据术后结石清除状态分为结石清除组(n=76)、残留组(n=29),比较两组SHA.LIN评分、S.T.O.N.E.评分、Guy's分级、最大累计截面积、肾积水情况、结石数量、结石CT值、结石解剖位置、受累肾盏数目分布情况,统计SHA.LIN评分(6～9分、10～13分、14～17分)、S.T.O.N.E.评分(5～6分、7～8分、9～13分)及Guy's分级(GⅣ、Ⅲ、Ⅱ、Ⅰ级)患者分布及结石清除率情况,比较3种评分ROC曲线下与坐标轴围成的面积(AUC),并统计各评分预测结石清除率敏感度、特异度,并以Spearman对降低结石清除率风险因素进行相关性分析。结果:残留组SHA.LIN评分、S.T.O.N.E.评分高于清除组,且两组Guy's分级比较差异有统计学意义(P0.05);SHA.LIN评分6～9分、10～13分、14～17分患者结石清除率分别为95.77%(68/71)、30.00%(9/30)、0(0/4);S.T.O.N.E.评分5～6分、7～8分、9～13分患者结石清除率分别为95.00%(19/20)、86.44%(51/59)、34.62%(9/26);Guy's分级Ⅳ、Ⅲ、Ⅱ、Ⅰ级患者结石清除率分别为22.22%(2/9)、72.34%(34/47)、85.71%(36/42)、100.00%(7/7);SHA.LIN评分AUC高于S.T.O.N.E.评分、Guy's分级,S.T.O.N.E.评分AUC高于Guy's分级(P0.05);SHA.LIN评分ADC为10分时,敏感度、特异度分别为79.6%、87.82%;S.T.O.N.E.评分ADC为8分时敏感度、特异度分别为71.62%、66.33%;Guy's分级ADC为Ⅲ级时,敏感度、特异度分别为57.91%、83.86%;清除组与残留组肾积水情况、结石数量比较差异无统计学意义(P0.05);残留组最大累计截面积、结石CT值大于清除组,结石解剖位置、受累肾盏数目分布情况组间比较差异有统计学意义(P0.05);最大累计截面积较大、结石CT值较高、结石解剖位置隐蔽、受累肾盏数目较多与低结石清除率呈正相关(P0.05)。结论:输尿管软镜术结石清除率随Guy's分级、S.T.O.N.E.评分、SHA.LIN评分升高而降低,三者预测结石清除率价值依次升高,其中SHA.LIN评分评定时各参数均可量化,客观性高,最大累计截面积较大、结石CT值较高、结石解剖位置隐蔽、受累肾盏数目较多是降低清除率独立危险因素。     

后腹腔镜下重复肾病肾和输尿管切除术的策略

目的:探讨腹腔镜下重复肾病肾切除术的手术技巧及其疗效。方法:对19例重复肾患者进行了后腹腔镜下重复肾病肾和输尿管切除术。19例均为上位重复肾伴完全型重复输尿管畸形,其中左侧8例,右侧11例。结果:19例患者手术均顺利在后腹腔镜下完成,术中、术后均未出现明显并发症。手术时间平均110(80~180)min,出血量平均80(50~200)ml,术后住院时间平均6.6(5~9)d。术后随访3~48个月,下位健肾功能良好。结论:后腹腔镜下重复肾病肾和输尿管切除术具有创伤小、术后恢复快等优点,可作为治疗重复肾、输尿管畸形的可靠方法之一。但操作难度较大,对于初学者来说应慎重。     

中国商环包皮环切术两种术式临床比较

目的对比内环置于包皮外板法与内环置于包皮腔内法中国商环包皮环切术的临床疗效及手术并发症.方法按单双号分组,将患者分为内环置于包皮外板法组(内环外板法组)与内环置于包皮腔内法组(内环腔内法组),每组25例.对比分析2组在手术时间、术时及术后24 h疼痛评分、失血量、创口愈合时间、术后并发症、术后外观满意率等方面的差别.结果2组手术时间、术时及术后24 h疼痛评分、失血量比较差异无统计学意义.但内环外板法组较内环腔内法组术后感染率(4%vs.32%,χ2=4.88,P<0.05)及水肿发生率(0 vs.24%,χ2=4.73,P<0.05)明显降低、创口愈合时间明显缩短﹝(12.60±1.58)d vs.(14.28±2.84)d,t=2.59,P<0.05﹞、外观满意率明显增高(100%vs.76%,χ2=4.73,P<0.05).结论内环置于包皮外板法比内环置于包皮腔内法具有操作简单、并发症发生率低、术后愈合时间短、外观满意率高等优点.     

后腹腔镜在肾上腺手术中的应用(附13例报告)

目的 探讨后腹腔镜在肾上腺手术中的应用和临床效果。方法 采用后腹腔镜完成13例肾上腺占位性病变切除术，观察手术时间、术中出血量和术中术后并发症。结果 13例手术全部成功，术后病理检查证实：肾上腺皮质腺瘤12例(原发性醛固酮增多症lO例、皮质醇腺瘤2例)，肾上腺囊肿1例。手术平均时间60min,平均出血量10ml，无严重并发症。术后住院时间4～6天，平均5．2天。结论 该术式具有微创、出血量少、恢复快等特点，可望成为治疗肾上腺占位性病变的首选方法。