术前精液分析作为精索内静脉结扎术后生育功能恢复指标的探讨

目的:探讨精索静脉曲张的男性不育患者术前的精液分析结果,作为预测精索内静脉结扎术后精子活动及生育功能恢复指标的可行性。方法:诊断为男性不育的107例精索静脉曲张患者,以精液自动分析仪进行精液分析,据其活动精子总数(TMSC)≥20×106、(5~20)×106、<5×106分为A(n=32)、B(n=36)、C(n=39)3组。行左侧或双侧精索内静脉高位结扎术,术后3个月开始随访,进行精液分析,并了解其妻怀孕情况。结果:107例患者术后TMSC较术前有明显增加,但A、B组TMSC的绝对增加值明显高于C组(P<0.05);术前A、B两组68例中,术后有56例(82.4%)TMSC≥20×106,而C组39例中,术后仅8例(20.5%)TMSC≥20×106;患者妻子怀孕情况随访到98例,其中有36例自然妊娠,A、B两组怀孕率(56.3%和42.4%)与C组(12.1%)比较均有明显差异(P<0.05)。结论:精索内静脉高位结扎术对于术前TMSC≥5×106的精索静脉曲张所致男性不育患者是极为有效的治疗方法,而对于重度少弱精子症(TMSC<5×106)患者精子质量改善情况不佳。     

肾移植中供受者动脉血管变异的处理

目的 提高肾移植中动脉血管变异的外科处理能力。方法 根据具体情况，将供受者变异的血管进行修整、合并、重建等，使供肾安全、有效地移植给受者。结果 46例供受者血管变异经处理后，肾功能正常。1年后随访无并发症。结论 正确处理供受者变异血管，移植后可获得良好的效果。     

Ⅰ期膀胱粘膜瓣尿道成型术在治疗真两性畸形中的应用

真两性畸形临床上较为少见,据国内不完全统计至今仅66例报道。我院1983年1月～1987年1月共收治4例,其中3例采用阴茎下曲矫正,膀胱粘膜辦Ⅰ期尿道成型配合女性性腺切除术治疗,取得较满意疗效,介绍如下: 临床资料一、病例介绍:见附表二、手术步骤: 1.下腹正中切口,探查,切除女性性腺,送病理检查。 2.龟头牵引,阴茎背伸位,T形切口,尿道外口处保留0.5×0.8cm~2矩形皮瓣。切断阴茎腹侧纤维束带和尿道口旁挛缩的阴茎筋膜及妨碍阴茎伸直的纤维组织,游离尿道     

免疫毒素BDI—1—PEA的构建及其活性测定

目的 构建新型免疫毒素BDI-1-PEA,并进行抗入膀胱肿瘤活性的初步研究测定。方法 应用异型双功能连接剂N-琥珀酰胺酯3-（2-吡啶基二硫）丙酸（SPDP）将抗人膀胱肿瘤单克隆抗体（BDI-1）与铜绿假单胞菌外毒素（PEA）交联,制备出新型免疫毒素BDI-1-PEA。应用四甲基偶氮唑盐（MTT）法初步检测其对人膀胱肿瘤细胞系E-J的选择性杀伤活性。结果 BDI-1-PEA结合物具有高效靶向杀伤膀胱肿瘤细胞的能力,优于游离PEA或BDI-1的混合物。结论 新型免疫毒素BDI-1-PEA有较高的选择性抗人膀胱肿瘤细胞的活性,有较高的研究的应用价值。     

反义Ki-67肽核酸对裸鼠人肾癌细胞移植瘤的治疗作用

目的:探讨Ki-67基因反义肽核酸(AS-PNAs)在体内对小鼠人肾癌移植瘤Ki-67表达和肿瘤生长的影响.方法:建立人肾癌移植瘤裸鼠模型,瘤体内注射反义肽核酸(AS-PNAs),定期测量肿瘤体积,处死小鼠后采用免疫组化、Western blot检测肿瘤Ki-67抗原表达,原位末端标记法(TUNEL)检测肿瘤细胞凋亡,并与反义寡核苷酸(AS-ODN)处理组对照.结果:AS-PNAs处理组肿瘤生长受押(513.2±64.2)mm3,Ki-67表达下降(23.0±2.4)%、(59.7±2.3)%,细胞凋亡增加(31.1±2.0)%,与AS-ODN处理组(868.9±128.2)mm3、(33.6±2.6)%、(85.7±4.4)%、(18.3±2.3)%比较差异有显著性(P＜0.01).结论:反义Ki-67肽核酸能抑制小鼠人肾癌移植瘤Ki-67基因的表达,诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤生长,且优于反义寡核苷酸.     

Ki67基因干扰对裸鼠人肾癌细胞移植瘤的抑制作用

目的:探讨靶向Ki67基因干扰腺病毒(Ad-Ki67)对裸鼠人肾癌移植瘤Ki-67基因表达和肿瘤生长的影响.方法:建立人肾癌移植瘤模型,瘤体内注射Ad-Ki67,定期测量肿瘤体积,激光共聚焦显微镜观察移植瘤组织Ki-67抗原表达,原位末端标记法(TUNEL)检测肿瘤细胞凋亡.结果:Ad-Ki67能将Ki67基因有效沉默.Ad-Ki67组和Ad-EGFP组Ketr-3细胞Ki-67抗原表达水平分别为对照组的(78.7±6.5)%、(95.4±8.6)%:与对照组细胞凋亡阳性率(10.7±2.4)%比较,Ad-Ki67、Ad-EGFP组分别为(43.7±3.6)%和(21.8±2.5)%,表明Ad-Ki67能有效诱导肿瘤细胞凋亡;Ad-Ki67能显著抑制肿瘤的生长,接种5周后Ad-Ki67组肿瘤体积为(469.5±41.6)mm,.Ad-EGFP组为(664.3.5±47.8)mm3,PBS组为(884.9±52.5)mm3.结论:靶向Ki67基因的干扰腺病毒Ad-Ki67对裸鼠肾癌移植瘤有显著的治疗效果,为治疗肾癌提供新的平台.     

溶瘤腺病毒介导RNA干扰人端粒酶逆转录酶抑制HeLa细胞生长

目的观察表达人端粒酶逆转录酶siRNA（hTERT-siRNA）的溶瘤腺病毒ZD55-TERT-siRNA对体外培养人宫颈癌HeLa细胞生长及hTERT基因表达的影响。方法以溶瘤腺病毒ZD55-EGFP、表达hTERT-siRNA 的增殖缺陷腺病毒AD-TERT-siRNA和增殖缺陷腺病毒AD-EGFP作为对照组。不同滴度四种病毒分别感染HeLa细胞,结晶紫法检测细胞毒作用,MTT法测定细胞生长抑制率; RT-PCR、Western blot、免疫细胞化学（ICC）法分别检测hTERT 的mRNA、蛋白质及抗原表达,Western blot和ICC法分别测定腺病毒E1A蛋白及抗原表达。结果对HeLa细胞的生长抑制作用和细胞毒作用ZD55-TERT-siRNA＞AD-TERT-siRNA和ZD55-EGFP＞AD-EGFP;ZD55-TERT-siRNA和ZD55-EGFP感染的HeLa细胞表达E1A;抑制hTERT表达作用依次为ZD55-TERT-siRNA＞AD-TERT-siRNA＞ZD55-EGFP、AD-EGFP。结论溶瘤腺病毒介导RNA干扰hTERT能有效抑制HeLa细胞生长及hTERT基因表达。     

增殖及非增殖腺病毒载体介导的RNA干扰对肾癌细胞杀伤作用

目的比较荷载Ki67基因小干扰RNA（Ki67-siRNA）的增殖腺病毒ZD55-Ki67及非增殖腺病毒Ad-Ki67对肾癌细胞的杀伤作用。方法MOI=10的ZD55-Ki67、Ad-Ki67感染肾癌786-0细胞，2d后收集细胞，蛋白印迹法检测E1A表达；逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、蛋白印迹法、免疫细胞化学法检测Ki67表达；原位末端标记法（TUNEL）检测凋亡。4d后噻唑蓝（MTT）法检测细胞存活率，7d后结晶紫染色法检测细胞毒性作用。结果感染ZD55-Ki67的786-0细胞表达E1A，感染Ad-Ki67的细胞不表达E1A。ZD55-Ki67、Ad-Ki67感染的786-0细胞Ki67mRNA表达率分别为（37．9±2．3）％、（64．1±1．9）％；Ki67蛋白表达率分别为（42．5±2．4）％、（60．1±2．2）％；Ki67染色阳性率分别为（20．8±2．8）％、（32．3±2．5）％；786-0细胞存活率分别为（22．2±3．0）％、（60．4±3．4）％；凋亡率分别为（53．0±3．7）％、（35．3±2．5）％，两种病毒处理之间差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论ZD55．Ki67抑制786-0细胞Ki67表达及增殖、诱导凋亡及细胞毒性作用均显著优于Ad-Ki67。增殖腺病毒介导的RNA干扰杀伤肾癌细胞作用优于非增殖腺病毒。     

Ki-67基因siRNA表达质粒的构建、鉴定及功能研究

目的构建肿瘤增殖基因Ki-67小干扰RNA(siRNA)表达质粒，研究其对人肾癌细胞Ki-67基因表达的阻抑作用，探索肾癌基因治疗新的途径。方法设计有小发夹机构的2条Ki-67 siRNA对应模板DNA序列，煺火处理后克隆至pSliencer 3．1质粒，构建重组质粒pSliencer-Ki-67。将pSliencer-Ki-67转染人肾癌786—0细胞，采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot检测Ki-67表达。结果酶切及测序证实质粒pSliencer-Ki-67构建成功。其可显著抑制786-0细胞Ki-67 mRNA、Ki-67蛋白表达。结论成功构建的Ki-67 siRNA表达质粒pSliencer-Ki-67能抑制人肾癌786-0细胞Ki-67基因表达。     

G250启动子的克隆及其在人肾癌细胞中的特异生物活性

目的 克隆G250启动子并插入pG3-Basic真核表达载体,探讨G250启动子在肾癌细胞中的特异生物活性.方法 提取宫颈癌Hela细胞总DNA作为模板,设计两对引物进行PCR,获取两段不同长度的G250启动子片段.测序后分别将获取的551 bp和218 bp启动子片段克隆到pGL3-Basic载体中,构建双荧光素酶检测质粒pGLB-G551和pGLB-G218.将pGL3-Basic、pGLB-G551、pGLB-G218各1μg转染G250阳性宫颈癌Hela细胞、肾癌Ketr-3细胞.运用双荧光素酶检测技术,确定G250启动子的转录活性.结果 电泳与测序结果 显示,两段G250启动子片段与报道序列一致.酶切与测序结果 显示,质粒pGLB-G551、pGLB-G218构建成功.转染pGLB-G551、pGLB-G218的Hela细胞相对荧光素酶活性分别为pGL3-Basic的11.07倍、10.36倍.Ketr-3细胞分别为pGL3-Basic的5.17倍、4.13倍.与空载体pGL3-Basic比较,pGLB-G551和pGLB-G218的相对荧光素酶活性均明显增强(P<0.05).pGLB-G551和pGLB-G218比较,相对荧光素酶活性差异无统计学意义(P>0.05).结论 成功克隆出肾癌特异性G250启动子,并证明具有良好转录活性,218bp的启动子片段已具有G250启动子的所有启动效果.