学龄前儿童红细胞免疫功能初探

目前对学龄前儿童红细胞免疫功能的研究尚少。我们检测了济南地区部分学龄前儿童的红细胞免疫功能,现报告如下。 1.资料和方法:本组152例,年龄3～7岁,其中3岁18例,4岁30例,5岁42例,6岁35例,7岁27例。同时取30例正常献血员为对照组。致敏酵母菌及未致敏酵母菌冻干试剂由上海长海医院(免疫室)提供。 方法:C_2b受体花环试验及免疫复合物花环试验均参照郭峰法。 2.结果:见附表。结果显示儿童C_3b受     

肿瘤浸润淋巴细胞及其临床应用

恶性肿瘤的生物治疗是近几年肿瘤免疫学的研究热点之一,其中抗癌免疫效应细胞的研究尤其引人注目。1982年;美国的Rosenbery首先提出淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)的概念,时隔3年,作者又证实了恶性肿瘤组织中浸润淋巴细胞的存在。肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)作为一种新型、高效的肿瘤杀伤细胞,在恶性肿瘤免疫过继性治疗中的潜力愈来愈受到重视。 一、TIL的生物学特征 TIL不同于其他肿瘤细胞杀伤细胞的特征主要     

血管内皮生长因子促进小鼠胚胎干细胞生成CD34+细胞的研究

目的：研究血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)体外促进小鼠胚胎干细胞系ESD3生成CD34+细胞的能力。方法将ESD3形成拟胚体，将拟胚体细胞转入含不同浓度的VEGF和VEGF+干细胞因子（stem cell factor, SCF)的培养基中。实验分6组，分别为VEGF 5 μg/L组、VEGF 10 μg/L 组、VEGF 20 μg/L组、VEGF 5 μg/L＋SCF组、VEGF 10 μg/L＋SCF组、VEGF 20 μg/L＋SCF组，同时设不加因子的自发分化对照组。RTPCR检测CD34 mRNA的表达，流式细胞仪检测CD34+细胞的比例，甲基纤维素半固体培养法检测生成造血集落的能力。结果：经过1周的诱导培养，实验组生成的细胞可以表达CD34 mRNA，CD34＋细胞的比例也升高，并可形成造血祖细胞的集落。从CD34 mRNA的表达水平、诱导生成CD34＋细胞的比例和生成的集落数量看，VEGF 20 μg/L＋SCF组和VEGF 10 μg/L＋SCF组的诱导效率最高。结论：VEGF能够促进ESC生成CD34＋细胞，尤以与SCF合用时，其诱导效率更高。     

混合脐血移植的实验研究

为探讨混合脐血移植重建免疫造血系统的可行性,扩大脐血移植（CBT）的应用范围,将孕20日的C57BL／6（H-2b）小鼠和615（H-2k）小鼠经剖腹产取出胎盘和胎鼠,剪碎后分离出脐血单个核细胞（MNC）,将二者各1×10     

新生儿免疫性血小板减少症

新生儿免疫性血小板减少症是由于母亲体内的抗血小板自身抗体或同族异体抗体通过胎盘作用于胎儿血小板引起 ,严重者可致颅内出血。据抗体的形成机制可分三类 :胎母同族异体免疫性血小板减少症、妊娠相关的自体免疫性新生儿血小板减少症和新生儿药物性免疫性血小板减少症 ,各类的治疗不同 ,预后不同 ,在随后的妊娠中 ,其同胞受累机率亦不同。正确认识本病可使产科和儿科医师能及时正确处理患儿 ,减少并发症的发生     

不同细胞浓度及细胞因子对骨髓基质成纤维细胞集落形成的影响

目的：研究植入不同细胞浓度与不同细胞因子对小鼠骨髓基质成纤维细胞集落生成单位(CFU-F)形成的影响。方法：采用体外骨髓基质细胞贴壁培养的方法，分别植入不同的细胞浓度及加入不同的细胞因子后，培养2周时计数CFU-F的数量，培养3～4周时观察贴壁细胞的形态。结果：在一定的范围内，随接种骨髓有核细胞数量的增加，CFU-F的数量略有增加，但增加数量有限，各组间差异不显著。干细胞因子(SCF)和白细胞介素-3(IL-3)对骨髓基质细胞的增殖有促进作用，其中SCF和SCF、IL-3联用能明显增加CFU-F的数量，而对贴壁细胞的形态无明显影响。结论：在一定的条件下，骨髓基质细胞可以扩增，提示细胞因子作用下的基质细胞扩增有可能用于造血损伤修复。     

骨髓间充质干细胞向胰岛素分泌细胞诱导分化的动态观察

目的:探讨体外诱导骨髓间充质干细胞向胰岛素分泌细胞分化的可能性,并观察其动态变化。方法:实验于2005-09/2007-03在山东大学齐鲁医院完成。①标本来源:骨髓标本15例来自山东大学齐鲁医院成人骨髓检查结果正常者,均签署捐献同意书。②实验方法:无菌条件下取骨髓2.0～5.0mL,采用percoll分离液和贴壁法获得纯化的成人骨髓间充质干细胞。③实验评估:流式细胞仪行细胞表面抗原检测,在适当的条件下诱导其分化为成骨细胞和脂肪细胞。采用两步法向胰岛素分泌细胞诱导,观察其在碱性成纤维细胞生长因子、活化素A、胰岛素样生长因子、尼克酰胺等因子刺激下向胰岛素分泌细胞分化的动态变化。双硫踪染色鉴定胰岛样细胞团,酶联免疫吸附试验检测细胞分泌胰岛素的情况,RT-PCR检测胰岛细胞特异基因的表达。结果:①骨髓间充质干细胞的生长特性及免疫表型:分离培养获得的贴壁细胞,呈形态均一的梭形,流式细胞仪检测CD34、CD45表达阴性,CD29、CD44表达阳性。②向成骨细胞和脂肪细胞的诱导分化:此类细胞经茜素红染色、油红O染色均呈阳性,可诱导分化为成骨细胞和脂肪细胞。③向胰岛素分泌细胞的诱导分化:第1步诱导后出现细胞簇,双硫腙染色不着色,胰岛素分泌量少,仅检测到PDX-1基因的表达,证实其为胰岛前体细胞。第2步诱导后细胞簇数目逐渐上升,至诱导14d大部分细胞簇经双硫腙染色都呈红色。④诱导后培养上清中胰岛素含量:诱导第3,7,14,21天的胰岛素分泌量分别为(15.3±4.9),(34.1±5.6),(40.4±5.3),(39.8±5.1)mU/L。⑤胰岛细胞特异基因的表达:诱导7d仅检测到PDX-1基因的表达,insulin1、insulin2和Glut2基因均不表达。诱导14,21d检测到insulin2、PDX-1基因表达,insulin1基因弱表达,Glut2基因不表达。结论:体外分离、纯化得到的骨髓间充质干细胞诱导7d可分化出胰岛前体细胞,不具功能性;诱导14d后可成功地分化出成熟的具有功能性的胰岛素分泌细胞。     

单细胞PCR用于HLA配型的研究

目的研究用筑巢式多重PCR技术对单细胞进行HLA配型，分析影响单细胞PCR扩增的因素。方法首先分别采用不同的细胞裂解方法制备单细胞DNA模板，然后采用多重PCR分别扩增HLA—A，B基因的第2、3外显子和第2内含子区域，HLA—DRB1基因的第2外显子区域，最后根据大量DNA的常规HLA分型结果对单细胞第1轮扩增产物进行第2轮筑巢式序列特异性引物PCR（PCR-SSP）分型。结果酶解法制备单细胞DNA模板效率最高，第1轮扩增成功率为93．3％，而碱裂法和冻融法分别为83．3％和73．3％；采用酶解法制备单细胞DNA模板进行第2轮PCR—SSP分型验证，20份标本扩增成功率为95％，有3份标本只扩增出一条染色体，等位基因脱扣发生率为15％，全部操作可在6h内完成。结论筑巢式多重PCR技术对单细胞HLA分型具有较高的扩增效率，操作时间短，可望应用于妊娠前诊断。     

脐动、静脉造血干细胞/祖细胞的比较

目的探讨胎盘绒毛膜在胎儿期造血中的作用,寻找造血干/祖细胞的新来源,供临床移植应用。方法分别测定并比较脐动、静脉血中CD+34细胞含量及粒-单细胞集落形成单位（CFU-GM）、混合集落形成单位（CFU-MIX）、高增殖潜能集落形成单位（HPP-CFU）集落的产率。结果脐静脉中CD+34及CD+34/CD-38细胞含量分别为（1.25±0.94）％和（0.61±0.50）％,较脐动脉血中的含量（0.77±0.50）％、（0.33±0.27）％显著增高（P均<0.05）;脐动、静脉血单个核细胞（MNC）大多处于静止期（>95%）,二者差异无显著性（P＞0.05）,但合成期细胞的比率在脐静脉血中为（2.2±1.8）％,明显高于脐动脉血的比率（0.9±1.0）％;脐静脉血中CFU-GM、CFU-MIX和HPP-CFU的产率分别为（49.7±28）/2×105MNC、（8.7±4.6）/1×105MNC和（1.6±1.2）/1×105MNC,明显高于脐动脉血的产率（18±9）/2×105MNC、（5.2±2.7）/1×105MNC和（0.4±0.4）/1×105MNC,差异有显著性（P均<0.05）。结论脐静脉血中造血干/祖细胞的含量高于脐动脉,提示胎盘绒毛膜在胎儿期造血中具有一定的作用,并有可能成为造血干/祖细胞的又一来源。     

低温保存同种心脏瓣膜活性及临床应用的研究

取正常成人心脏瓣膜３６个，置于低浓度广谱抗生素的营养液（ＲＰ－ＭＩ１６４０细胞培养液）中灭菌４８ｈ，－８０℃冰箱初冻，置于液氮中长期保存。灭菌前后瓣膜细菌培养阴性率分别为９４．３％和１００％，解冻后经光镜、电镜检查证实瓣组织细胞结构正常，组织培养葡萄糖消耗率测定示瓣组织存活良好。临床同种心脏瓣膜原位移植３例，随访６～３０个月，瓣功能良好