β干扰素基因修饰人骨髓间充质干细胞对前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察人β干扰素(IFN-β)基因转染的人骨髓间充质干细胞(hMSCs)对前列腺癌细胞株PC-3增殖及凋亡的影响.方法 脂质体介导入IFN-β基因转染的hMSCs( IFN-β-h MSCs)与PC-3体外共培养,共培养后第1、3、5天对PC-3进行锥虫蓝染色,计数存活细胞数目.流式细胞仪分析PC-3细胞凋亡.结果 IFN-β-hMSCs可成功分泌表达IFN-β.hMSCs、空质粒转染hMSCs、IFN-β-hMSCs组与PC-3在共培养后第5天,PC-3存活细胞计数分别为(10.81±0.33)×105、(9.90±0.41) ×105、(4.63±0.32)× 105个,PC-3存活细胞差异有统计学意义(P＜0.01);流式细胞仪检测示实验组PC-3凋亡率为(22.79±2.71)％,较各对照组增加.结论 IFN-β-hMSCs能成功分泌表达IFN-β,体外共培养可有效抑制PC-3增殖,促进其凋亡.     

皮肌炎继发间质性肺疾病临床特征及预后分析

目的 总结分析皮肌炎(dermatomyositis,DM)并发间质性肺疾病(interstitial lung disease,ILD)的临床特征,探讨患者预后不良的预测指标.方法 选取在苏州大学附属第一医院住院治疗的268例DM患者作为研究对象,收集包括症状、体征、实验室检查、心电图、肺功能检查等资料及预后进行回顾性研究.结果 相较于单纯DM患者,伴发ILD的患者出现发热、关节痛、呼吸道症状、抗核抗体(ANA)阳性、抗Jo-1抗体阳性,以及血沉(ESR)、乳酸脱氢酶(LDH)、IgG升高的概率明显升高.而当后者出现以下一种或几种表现,如:发热、Gottron皮疹、心脏损害、关节痛、合并感染,血清ESR、LDH指标升高、肌酸激酶(CK)低水平时,患者的病死率升高.结论 对于DM患者,应尽早常规行肺功能及高分辨率CT(HRCT)检查.当DM伴ILD患者出现发热、关节痛、心脏损害、合并感染、CK低水平等表现时,需及早干预.     

丝裂霉素C联合光致亚胺交联水凝胶在犬声带损伤模型中的防粘连作用

目的 探讨比格犬声带前联合粘连模型建立的可行性及光致亚胺交联水凝胶(HA-NB)与丝裂霉素C(MMC)联合应用的防粘连作用。 方法 16条比格犬随机分为4个组:空白对照组、MMC组、HA-NB组、丝裂霉素C-水凝胶联用组(HN-MMC),每组4只。支撑喉镜下行声带前中段及前联合切除手术,术后观察大体形态并评估粘连程度,术后8周取组织活检进行切片染色,比较镜下形态变化。 结果 术后8周犬声带前联合粘连模型建立,可进行精确的粘连程度测量。HA-NB组与MMC组的粘连比例与对照组比较无统计学意义;HN-MMC 组的粘连比例小于对照组;析因设计的方差分析显示HA-NB与MMC的联合应用有协同作用; 镜下染色切片显示HN-MMC组瘢痕增生指数低于其余各组,瘢痕形成率低。 结论 丝裂霉素C联合光致亚胺交联水凝胶在犬声带前联合手术中达到了良好的防粘连效果,为预防声带术后粘连提供了较理想的材料。     

骨髓间充质干细胞移植对脑缺血区微血管增生及Notch1表达的影响

目的观察骨髓间充质干细胞（MSC）移植对脑缺洫皮质区血管形成的影响及微血管Noteh1表达的变化。方法用线栓法复制大鼠脑缺血再灌注损伤动物模型,随机分为假手术对照组、单纯脑缺血损伤组和脑缺血后BMSC移植组。采用免疫组织荧光染色法检测各组缺血皮质区Ⅷ因子及Notch1的表达。结果（1）植入的BMSC可以趋向性迁移到脑缺血损伤区域。（2）BNSC移植组脑缺血皮质区新生徽血管密度较单纯脑缺血损伤组和假手术对照组明显增高。（3）BMSC移植组缺血皮质区多数微血管内皮细胞阳性表达Notch1,且明显多于单纯缺血组和假手术对照组。结论BMSC移植可促进脑缺血区血管新生,且可能与促进Notch1表达有关。     

人诱导性多能干细胞的培养及鉴定

目的建立稳定的人诱导性多能干细胞（iPS细胞）培养体系。方法取第3．5代的小鼠胚胎成纤维细胞．丝裂霉素C处理后用作饲养层。人iPS细胞接种于饲养层上生长,胶原酶消化或机械法传代。倒置显微镜下观察iPS细胞生长状态：观察拟胚体形成能力;RT—PCR检测iPS细胞多能性基因的表达情况。结果（1）小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）为贴壁生长细胞,呈梭形或多角形。细胞增殖旺盛。（2）生长在饲养层上的人iPS细胞呈典型的克隆状生长。克隆呈圆形或椭圆形．边界清晰。克隆内细胞排列紧密,细胞体积小,核大,细胞核／质比高。RT—PCR结果显示人iPS细胞强表达多能性基因Oct4,Nanog,Sox2;去除饲养层后悬浮培养能形成拟胚体（EB）。结论本实验的培养体系适合人iPS细胞的培养,人iPS细胞能稳定增殖,保持自我更新及分化潜能。     

miRNA－92a在缺血再灌注肾损伤中的表达变化

目的观察miRNA-92a在缺血再灌注（I／R）损伤4h、24h后小鼠肾组织的表达变化,探讨肾脏缺血损伤后血管生成的可能机制。方法采用双侧夹闭小鼠肾蒂的方法制备急性缺血再灌注肾损伤模型,术后灌注24h后收集血清和。肾脏标本,分别检测肾功能及观察肾组织病理学改变。实时定量逆转录聚合酶链反应（real—time RT-PCR）的方法检测小鼠I／R损伤4h和24h组中miRNA-92a的表达水平。结果（1）采用血清肌酐（Scr）和尿素氮（UN）评估肾功能,肾脏I／R 24h组与假手术组（sham）比较有显著性差异（P〈0．05）;HE染色观察肾组织病理改变明显,肾缺血再灌注模型成功。（2）而I／R4h和24h后,miRNA-92a的表达上调,其上调倍数分别为3．23±0．74．1．53±0．33（P〈0．05）。结论小鼠I／R损伤中miRNA-92a表达显著上调,miRNA-92a可能参与缺血再灌注肾组织损伤的血管再生的调控过程。     

脑外伤后小鼠海马区notch信号的表达变化

目的观察脑外伤后小鼠海马区notch信号基因的表达变化。方法采用Feeney自由落体法复制闭合性脑外伤小鼠模型,分为假手术对照组和脑外伤组,于伤后4h、1d、3d分别处死。采用实时荧光定量PCR法检测伤后各时间点notch1、hes1mRNA的表达。结果 （1）notch1 mRNA表达水平在伤后4h开始升高,1d时达到高峰,较对照组升高约6倍,3d时有所回落,但仍维持在高水平,较对照组升高2倍。（2）hes1 mRNA在伤后4h无明显变化,1d时达到高峰,较对照组升高3倍,3d时回落到正常水平。结论脑外伤后notch1和hes1 mRNA明显增高,提示notch信号被激活,可能与伤后NSCs增殖分化相关。     

基因治疗进展与展望-磁性转染

基因输送是基因治疗中非常关键的技术,作为运载工具,非病毒载体可避免病毒载体的安全性等问题。近年来非病毒基因载体的开发颇受关注,许多新的物理化学技术应运     

缺血预处理后Fas蛋白表达与迟发性神经元凋亡的关系初步探讨

目的动态观察缺血预处理后大鼠大脑皮层和海马CA1区神经元凋亡与Fas蛋白表达变化情况,初步探讨缺血预处理后Fas蛋白表达与迟发性神经元凋亡的关系。方法四血管阻断法复制全脑缺血模型,动物随机分为非缺血对照组、预处理对照组、缺血预处理组和缺血组。采用尼氏和TUNEL染色法观察皮层及海马CA1区神经元存活数和凋亡细胞数,免疫组化方法检测Fas蛋白在缺血预处理后表达变化情况。结果缺血组缺血6h在皮质及海马CA1区Fas阳性表达细胞计数升高,12h达高峰;缺血预处理组缺血12h阳性细胞计数升高,24h达高峰。缺血组缺血6h出现凋亡细胞,48h凋亡细胞数达到高峰;缺血预处理组凋亡细胞数较缺血组明显减少。缺血组缺血7d神经元数明显减少,12周时神经元大量减少;缺血预处理组缺血7d时神经元数无明显变化,但12周时神经元同样大量减少。结论全脑缺血可能通过诱导Fas蛋白的表达增多,启动细胞凋亡,导致缺血后神经元凋亡的发生;缺血预处理虽可延缓缺血后神经元的凋亡,但无法提供真正的长时期的神经元保护作用,其有限的保护作用可能是通过延缓Fas蛋白的表达而减缓了神经元凋亡的进程。     

β-巯基乙醇诱导成年鼠骨髓基质细胞向神经细胞分化的研究

目的：探讨β—巯基乙醇诱导成年大鼠骨髓基质细胞成神经细胞的可能性。为神经再生和诱导剂的筛选提供一种新的参考方法。方法：从大鼠骨髓中分离出骨髓基质细胞并培养传至3—5代，诱导前24h用含lmmo1／1的β—巯基乙醇及含20％的DMEM培养液培养，再以含5mmo1／1 β—巯基乙醇的无血清DMEM培养液作诱导，用免疫细胞化学方法鉴定神经细胞特异性标志物NF、NSE及GFAP的表达。结果：诱导后lh，部分细胞发生形态学上的改变，6h后大部分细胞不仅在形态上表现为神经元样特征，而且NF、NSE等特异性抗体呈阳性表达，而GFAP抗体表达呈阴性。结论：β—巯基乙醇能将骨髓基质细胞诱导成神经元样细胞。