抗胆固醇酯转运蛋白单克隆抗体的制备及其应用

目的：自行制备胆固醇酯转运蛋白（ＣＥＴＰ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ），建立人血清ＣＥＴＰ的酶联免疫吸附测定法（ＥＬＩＳＡ），调查中国人群ＣＥＴＰ参考值及临床意义。方法：应用杂交瘤技术制备ＣＥＴＰＭｃＡｂ。用棋盘试验确定ＥＬＩＳＡ法的反应条件；进行灵敏度、精密度、回收率、特异性试验。结果：制备出一株特异性好、反应性强的ＣＥＴＰＭｃＡｂ。筛选出ＥＬＩＳＡ法最佳反应条件，样本稀释２０００倍，可检测０．２８～４．５２ｍｇ／Ｌ的血清ＣＥＴＰ水平；平均批内ＣＶ为４．９％，平均批间ＣＶ为１０．２％；平均回收率为９２．５％～９７．２％；特异性高。检测结果同国外实验室ＥＬＩＳＡ法高度相关。１１２８例参考人群血清ＣＥＴＰ浓度为１．８４±１．５５ｍｇ／Ｌ，女性高于男性；随着年龄增高，ＣＥＴＰ浓度降低。冠心病患者ＣＥＴＰ浓度为２．６６±２．０８ｍｇ／Ｌ，较相应对照组显著升高（Ｐ＜０．０１）。结论：该法具有方便、快速、准确、特异等优点，对了解ＣＥＴＰ在动脉粥样硬化发生中的作用有着十分重要的意义。     

低密底脂蛋白亚组分氧化锡感性的检测及临床应用

建立低密度脂蛋白氧化产物共轭双烯检测法，对反应条件进行选择，并初步应用于临床。根据ＬＤＬ氧化产生的ＣＤ量随时间变化绘制氧化曲线，观察延滞时间，ＣＤ最大生成率及总ＣＤ值。     

5脂氧合酶激活蛋白介导人脐静脉内皮细胞氧化损伤

目的探讨5脂氧合酶激活蛋白在人脐静脉内皮细胞氧化损伤中的机制。方法体外分离、培养人脐静脉内皮细胞,分别用10、50、100和200mg/L氧化型低密度脂蛋白处理细胞24h,采用酶联免疫吸附法检测细胞上清液白三烯C4水平,MTT法检测细胞活力,以及实时荧光定量PCR和Western blot检测细胞5脂氧合酶激活蛋白mRNA及蛋白表达的变化。结果100mg/L和200mg/L氧化型低密度脂蛋白作用人脐静脉内皮细胞24h细胞活力显著下降(P<0.01),白三烯C4分泌显著增加(P<0.01),回归分析显示白三烯C4释放量与氧化型低密度脂蛋白浓度显著相关(r=0.953,P<0.01)。PCR和Western blot分析发现,5脂氧合酶激活蛋白mRNA表达和蛋白表达均显著增强(P<0.01和P<0.05)。结论氧化型低密度脂蛋白促进人脐静脉内皮细胞分泌白三烯C4,导致人脐静脉内皮细胞氧化损伤可能与5脂氧合酶激活蛋白异常表达有关。     

糖尿病患者血清低密度脂蛋白组成异常及氧化修饰水平升高

为探讨糖尿病患者动脉粥样硬化的高发机制，检测了44例糖尿病患者和50例健康者血脂、载脂蛋白、低密度脂蛋白中甘油三酯、总胆固醇和氧化型低密度脂蛋白水平。结果发现低密度脂蛋白中甘油三酯及甘油三酯／胆固醇比值升高为糖尿病患者脂质异常的显著特征。血清氧化型低密度脂蛋白水平及氧化程度显著升高，其氧化程度同低密度脂蛋白脂质组成相关。提示糖尿病患者动脉粥样硬化的高发生率同其低密度脂蛋白组成异常及氧化修饰水平相关联。     

单克隆多克隆抗体酶联免疫吸附法测定血清脂蛋白(a)的比较

应用淋巴细胞杂交瘤技术，建立了抗人血清脂蛋白（ａ）杂交瘤细胞株，对制备的单克隆抗体进行了特异性鉴定和抗原位点测定。建立了多克隆双抗体夹心酶联免疫吸附法、载蛋白（ａ）、载脂蛋白Ｂ双位点酶联免疫吸附法、单克隆单株、混合株双抗体夹心酶联免疫吸附法对脂蛋白（ａ）进行了检测，并对结果进行了分析。认为样本、参考品间载脂蛋白（ａ）的多态型不同可引起结果间的差异。     

低密度脂蛋白亚组分不同特性在动脉粥样硬化中的作用

低密度脂蛋白因颗粒大小、密度不同分为小颗粒致密、大颗粒疏松的亚组分，其不同特性对动脉粥样硬化的发生、发展起着重要作用。小颗粒致密的B型低密度脂蛋白是致动脉粥样硬化的强危险因素。血浆高甘油三酯在胆固醇酯转运蛋白介导下，引起脂蛋白间发生脂质转运，促进B型低密度脂蛋白形成。富含甘油三酯的B型低密度脂蛋白不易通过低密度脂蛋白受体介导的途径从循环中被清除，在血浆中停留时间长，更有机会被氧化；且其本身抗氧化能力低，导致体内氧化型低密度脂蛋白水平升高，加速动脉粥样硬化的发生、发展。刺梨汁言含多种抗氧化剂，可介导细胞内胆固醇外流而抑制泡沫细胞的形成；同时提高低密度脂蛋白抗氧化能力，利于减轻动脉粥样硬化的发生程度。     

低密度脂蛋白自身免疫在动脉粥样硬化发生中的作用

体液免疫和细胞免疫同时参与了动脉粥样硬化的发生和发展，修饰低密度脂蛋白、自身抗体及其循环免疫复合物在体内均可检测出，且同疾病的程度相关。低密度脂蛋白及自身抗体形成的免疫复合物可高效地引起细胞内胆固醇酯的堆积，并促进天然低密度脂蛋白受体表达和细胞因子合成增加，具一系列致病作用。     

心血管疾病氧化应激反应相关microRNAs的研究进展

氧化应激与心血管疾病的多种病理生理机制密切相关。近年研究显示,微小核糖核酸(microRNAs,miRNAs)在氧化应激诱导内皮功能紊乱、线粒体代谢障碍的过程中发挥重要调控作用,参与了心血管疾病的发生与发展。该文就近年来与心血管疾病氧化应激反应相关miRNAs的研究作一综述。     

人血清载脂蛋白（a）的多态性检测

应用十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺垂直板电泳及免疫印迹分析技术，以自制羊抗人载脂蛋白（ａ）［ａｐｏ（ａ）］为第一抗体，辣根过氧化物酶标记兔抗羊ＩｇＧ为第二抗体，建立了ａｐｏ（ａ）多态性检测方法，并对方法学中某些因素进行了探讨。检测了１９０名健康人血清，按Ｕｔｅｒｍａｎｎ等的分型方法，检出５种ａｐｏ（ａ）多态，共１２种表型。其中Ｂ占２．１％，Ｓ＿１占３．２％，Ｓ＿２占１８．４％，Ｓ＿３占２０．５％，Ｓ＿４占３０．５％。分子量范围在４８６０００～７４１０００之间，检出率为８３．２％。     

低密度脂蛋白亚组分在动脉粥样硬化中的作用

血中脂质异常是动脉粥样硬化发生的危险因素，近年来国外许多学者研究表明低密度脂蛋白亚组分不同特性较其他指标同冠心病的发生、发展、程度的相关性更为显著。