转化生长因子β1基因-509C/T多态性与原发性肾病综合征肾小管间质损伤的关系

目的 研究转化生长因子β1（TGF-β1）基因启动子－509C/T多态性与原发性肾病综合征（PNS）患者的易感性和肾小管间质损伤（TID）程度的相关性。 方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）技术, 检测98例PNS患者和128名健康对照者TGF-β1基因启动子-509C/T位点的基因型, 并根据肾活检病理TID程度分级分组比较。采用双抗体夹心ELISA法,测定所有受试对象的血清TGF-β1水平。同时测尿蛋白量（24 h）、Scr、BUN、血压等。 结果 （1）PNS患者及健康对照人群均能检测出T、C两种TGF-β1等位基因,存在TT型、TC型、CC型3种基因型。（2）TGF-β1基因-509C/T位点多态性在PNS患者和健康人群中的分布差异无统计学意义;等位基因频率在两组间差异也无统计学意义。（3） TID轻度组、重度组TGF-β1基因-509C/T位点的基因型频率和健康对照组比较,差异有统计学意义（均P < 0.01）。TID重度组患者的T等位基因频率和TT基因型频率明显高于TID轻度组和健康对照组（均P < 0.01）,而TID轻度组和健康对照组间差异无统计学意义。（4）TID重度、轻度组及健康对照组TGF-β1血清水平两两比较,差异均有统计学意义（均P < 0.05）。PNS组TT基因型患者血清TGF-β1水平高于CC和CT基因型患者,且与CC基因型间差异有统计学意义（P < 0.05）。 结论 TGF-β1基因－509C/T多态性与PNS的发病无关,但其T等位基因可能是PNS患者TID的重要遗传因素。血清TGF-β1水平升高和TID程度与TT基因型有关。     

黄芪注射液对多脏器功能障碍综合征模型大鼠血管内皮细胞损伤的影响

目的 通过建立两次打击大鼠致多器官功能障碍综合征( MODS)的动物模型,探讨黄芪注射液对MODS致血管内皮细胞损伤的影响.方法 将86只SD大鼠随机分为对照组、MODS组和治疗组.MODS组和治疗组复制大鼠MODS的动物模型,治疗组腹腔注入黄芪注射液,对照组和MODS组注入0.9％氯化钠溶液.分别在注射黄芪注射液和0.9％氯化钠溶液后24和48 h采集血液标本,测定大鼠血清中循环内皮细胞(CEC)数量、血栓调节蛋白(TM)、血管性血友病因子(VWF)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、超氧化物歧化酶( SOD)、丙二醇(MDA)的含量.结果 治疗组大鼠腹腔注射黄芪注射液后24和48 h CEC数量、TM、VWF含量明显低于相同时间点MODS组(P＜0.05);治疗组大鼠腹腔注射黄芪注射液后24和48 h ICAM-1、MDA含量明显低于MODS组相同时间点含量(P＜0.01),而24和48 h SOD含量治疗组明显高于MODS组(P＜0.01).结论 黄芪注射液对两次打击致多脏器功能衰竭模型大鼠的血管内皮细胞损伤有明显的保护作用.     

无顶冠状静脉窦综合征1例

无顶冠状静脉窦综合征(unroofed coronary sinus syndrome,UCSS)也称冠状静脉窦间隔缺损,是房间隔 缺损中的一种少见类型,发病率不到房间隔缺损的1%,因胚胎发育过程中左心房静脉皱褶形成不完全造成。为提高 临床医生对这一罕见病的认识,现报道中南大学湘雅二医院收治的1 例UCSS患者。该患者年龄50 岁,主要临床表 现为反复活动后乏力、气促。心脏彩超示冠状静脉窦扩张(17 mm×14 mm),提示永存左上腔静脉可能。肺动脉造影 可见左心房显影后,左心室、冠状静脉窦同时显影,房间隔完整,随后右心房、右心室相继显影,提示部分肺静脉 异位引流(心内型)。心脏CT血管造影示4 条肺静脉入左心房,永存左上腔静脉向下汇入冠状静脉窦,冠状静脉窦间 隔缺如且与左心房相通,确诊为UCSS。后于我院心血管外科行UCSS矫治术。     

CAPD患者蛋白质丢失与腹透时间、PET及KT/Vurea的关系

对 16例新透析患者 (透析时间在 30d)和透析时间 >1年的 19例患者蛋白质丢失与透析时间、腹膜平衡试验 (PET)及尿素清除指数 (KT/Vurea)关系进行了分析。结果发现 :两组患者腹透液中 ,蛋白质丢失量比较差异无显著性 (P >0 .0 5 )。在PETD/Pcr值≥ 0 6 5患者腹透液中 ,蛋白质丢失量与PETD/Pcr值 <0 .6 5患者比较差异无显著性(P >0 .0 5 )。尿素清除指数 (KT/Vurea)≥ 2 0与KT/Vurea<2 0患者腹透液中蛋白质丢失量比较亦无统计学意义 (P >0 .0 5 )。提示 ,常规CAPD无腹膜炎患者腹透液中蛋白质丢失量与透析时间 ,小分子溶质转运 ,透析是否充分无相关性 ;进一步支持大分子蛋白质转运与小分子溶质转运可能为不同途径     

WNK4基因在M1细胞中瞬时和稳定表达的位置和作用

目的探讨WNK4（With No K=lysine）基因在鼠肾皮质集合管细胞（M1）中的表达位置和生理作用。方法构建PCSPT-mWNK4-kxx质粒,瞬时转染M1细胞株,采用免疫荧光法检测Myc抗原标记的WNK4基因在M1细胞中表达位置。构建PTrepWNK4质粒,转染M1Tet-Off细胞株,采用免疫荧光法检测Myc抗原标记的WNK4基因在稳定转染M1Tet-Off细胞中表达位置,采用免疫沉淀和Western blot检测WNK4蛋白质表达,采用电压计检测WNK4基因过表达对M1单层细胞跨上皮电阻（TER）的作用。结果瞬时转染野生型WNK4基因,其蛋白质主要在M1细胞的胞膜表达,部分在胞浆。在稳定转染的M1Tet-Off细胞株,野生型WNK4基因表达于细胞的胞膜,免疫沉淀和Western blot结果显示Myc抗原标记的野生型WNK4蛋白在M1Tet-Off细胞中表达。电生理研究显示野生型WNK4基因过表达显著降低M1单层细胞TER。结论野生型鼠WNK4基因主要在M1细胞的胞膜表达,部分表达在胞浆。WNK4基因过表达降低单层细胞跨上皮电阻,增加相邻细胞的通透性,为进一步研究WNK4基因在高血压中的分子机制及其在肾脏的生理功能打下基础。     

原发性肾病综合征抗凝治疗的评价

肾病综合征（ＮＳ）患者存在高凝状态，血栓栓塞并发症发生率高达８５％～３８％［１］，严重影响该病的治疗及预后。临床上多采用普通肝素（ＳＨ）和潘生丁治疗，但易引起严重出血和头痛等副作用，须监测凝血酶原时间，使用不便。低分子肝素（ＬＭＷＨ，速避凝）来自肝...     

中西医结合治疗脾损伤20例

我院自1996—2002年共收治脾损伤20例，疗效满意，报告如下。     

蛋白磷酸酶2A 在肾间质纤维化中的作用

目的：探讨蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)在大鼠单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)及TGF-β1刺激的人近端肾小管上皮细胞-2(human kidney proximal tubular epithelial-2,HK-2)的肾纤维 化模型中的作用。方法：1)15只雄性SD大鼠随机分成假手术组( sham组)、模型组(UUO组)和UUO+冈田酸(okadaic acid,OA)干预组(OA组),每组各5只。术后OA组每日给予1.8%酒精稀释的OA 30 μg/kg,胃管饲喂72 h,对照组和模型 组给予相等体积的1.8%酒精胃管饲喂,72 h后处死大鼠,收集血和肾组织,检测肾功能并采用免疫组织化学、Western 印迹和RT-PCR法检测肾组织PP2A的c亚基(PP2Ac)、纤维连接蛋白(fi bronectin,FN)、胶原-I(collagen-I,Col-I)、E-钙黏 蛋白(E-cadherin,E-cad)和α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的蛋白及mRNA的表达。2)采用台盼蓝排斥 实验及MTT 法找出适宜的OA浓度。常规培养HK-2细胞,随机分为对照组、TGF-β1组(TGF-β1 5 ng/mL干预24 h)、TGF- β1+OA组(TGF-β1 5 ng/mL+OA 40 nmol/L,同时干预24 h),Western印迹检测肾小管上皮细胞PP2Ac,FN,Col-I,E-cad 和α-SMA 蛋白的表达。结果：1)肾功能表明UUO组尿素氮和肌酐较sham组升高,OA组尿素氮、肌酐均比UUO组下 降(均P<0.05)。免疫组织化学、Western印迹和RT-PCR均显示：与sham组比较,UUO组PP2Ac,FN,Col-I和α-SMA表 达升高,而E-cad表达下降(均P<0.05);与UUO组比较,OA组PP2Ac,FN,Col-I和α-SMA表达下降,E-cad表达升高(均 P<0.05);2) OA 40 nmol/L为最适宜的实验质量浓度;Western印迹显示：与对照组比较,TGF-β1组PP2Ac,FN,Col-I 和α-SMA表达升高,E-cad表达下降(均P<0.05);与TGF-β1组比较,TGF-β1+OA组PP2Ac,FN,Col-I和α-SMA表达下 降,E-cad表达升高(均P<0.05)。结论：PP2A能促进肾间质纤维化。     

Smad锚着蛋白在高糖诱导人肾小管上皮细胞细胞外基质沉积中的作用

目的:阐明Smad锚着蛋白(Smad anchor for receptor activation,SARA)在高葡萄糖诱导的人近端肾小管上皮细胞系(HK-2细胞)细胞外基质(ECM)沉积中的作用及分子机制,探讨以SARA为靶点抑制高葡萄糖诱导的HK-2细胞ECM沉积的策略.方法:用高浓度葡萄糖(30 mmol/L D-葡萄糖)刺激HK-2细胞,通过Western Blot及实时定量PCR( Real-time PCR)检测纤维连接蛋白(FN)和I型胶原(Col I),进而检测转化生长因子β1( TGF-β1)、Smad2、Smad3、p-Smad2、p-Smad3的表达变化,通过细胞免疫荧光、Western Blot、Real-time PCR检测SARA的表达变化;分别转染全长SARA质粒[SARA(WT)]及敲除SBD结构域的SARA质粒[SARA(dSRD)],检测转染后高糖诱导HK-2细胞FN及Col I表达的变化.结果:Western Blot及Real-time PCR结果显示,30mmol/L D-葡萄糖刺激后,HK-2细胞Col I蛋白及mRNA表达呈时间依赖性升高.高糖可诱导TGF-β1、Smad3蛋白及其mRNA表达呈时间依赖性上调;Smad2 mRNA表达呈时间依赖性上调,而其蛋白表达呈时间依赖性下调;高糖可促进Smad2和Smad3磷酸化,但Smad3的活化时间更长.而SARA的蛋白及mRNA表达呈时间依赖性降低,细胞免疫荧光结果亦证实高糖刺激后SARA表达下降.与高糖组相比,转染SARA(WT)可使HK-2细胞FN和 Col I表达下调;转染SARA (dSBD)对高糖诱导的HK-2细胞FN和ColI表达无明显影响.结论:高糖诱导的HK-2细胞ECM沉积过程中,TGF-β1信号通路活化,SARA的表达下调;过表达SARA可能通过上调Smad2的蛋白表达,抑制TGF-β31信号传导,从而减少高糖诱导的HK-2细胞ECM分泌.