DMD的基因治疗研究进展

Duchenne肌营养不良(DMD)为X连锁隐性遗传性肌病，目前临床无有效治疗手段，基因治疗最具前景。近几年里，基因治疗的研究取得了较大的进展，尤其表现在出现了一些新的基因治疗手段，同时病毒载体的改进也使治疗基因的表达效率有了明显提高，这些进展必将有助于基因治疗的临床实验早日开展。     

血友病的携带者与产前分子诊断

目的：建立一种简便、快速的血友病携带者检测与产前诊断体系。方法：用聚合酶链反应(PCR)方法分别检测FⅧ内含子22倒位及血友病A家系中FⅧ基因内的BclⅠ位点、内含子13和22中STR和FⅧ基因外的DXS 52(ST14)位点的多态性；对血友病B家系检测FⅨ基因外6个STR位点(DXS1192、DXS1211、DXS8094、DXSS013、DXS1227、DXS102)的多态性。结果：综合应用直接检测倒位和遗传连锁分析。21个血友病A家系的可诊断率为94．7％；联合FⅨ基因外6个STR位点对血友病B家系进行遗传连锁分析。使10个家系全部得到诊断。结论：FⅧ内含子22倒位检测阳性，可以直接诊断血友病A的携带者及患儿；检测FⅧ基因内、外及FⅨ基因外多个位点的多态性并进行遗传连锁分析，是血友病携带者检测与产前诊断的简便、快速的方法。     

EB病毒感染与系统性红斑狼疮关系的研究

系统性红斑狼疮（SLE）是一种涉及多器官的自身免疫性疾病，SLE的发病机制复杂，包括遗传和环境因素。EB病毒（EBV）感染是与SLE发病相关的环境因素之一。EBV通过以下几个途径诱发SLE：EBV感染B淋巴细胞后引起B淋巴细胞的增殖，B淋巴细胞中EBV抗原的表达在基因易感人群中诱发SLE；EBV感染的B淋巴细胞成为产生自身抗体的细胞；SLE的自身抗原与EBV的一些蛋白如EBV核抗原1（EBNA-1）、EBV核抗原2（EBNA-2）存在同源性，针对病毒抗原的抗体能与自身抗原发生交叉反应从而诱发SLE。已发现与正常人相比，SLE患者血清中抗EBV-抗体滴度及阳性率显著升高，但以往的抗体检测不能反映体内EBV的感染状态。     

内源性siRNA对RAB5A和RABEX5表达的抑制作用

目的研究内源性的siRNA对RAB5A和RABEX5表达的抑制作用。方法利用siRNA表达载体pS ilencerTM2.1U6-neo对RAB5A和RABEX5基因分别构建3个特异的siRNA表达载体,并将表达载体分别转染人卵巢癌高转移细胞HO-8910PM。应用逆转录-聚合酶链反应和蛋白印迹检测转染前后HO-8910PM细胞中RAB5A和RABEX5的表达情况,并用荧光免疫细胞化学技术对干扰效率最好的载体进行验证。结果在构建的6个siRNA表达载体中,pS ilencer/siRAB5A-1和pS ilencer/siRAB5A-2对RAB5A表达的抑制率分别为90%和70%,pS ilencer/siRAB5A-3对RAB5A表达没有抑制作用。pS ilencer/siRABEX5-1、pS ilencer/siRABEX5-2和pS ilencer/siRABEX5-3对RABEX5表达的抑制率分别为30%、50%和90%。结论成功构建了对RAB5A和RABEX5表达具有抑制作用的siRNA表达载体,为进一步研究RAB5A和RABEX5的生物学功能提供了实验工具。     

抗凋亡蛋白生存素与肿瘤的关系及其检测

凋亡是一个生理性的细胞自我毁灭的过程 ,也是遗传和进化方面高度保守的重要原因。凋亡过程的紊乱 ,可能参与许多疾病的发生发展 ,如肿瘤、自身免疫性疾病、神经退行性病变及损伤等。生存素 (Survivin)是新近发现的IAP家族新成员 ,主要在细胞周期的G2 /M期表达 ,以特异的可饱和的方式与有丝分裂纺锤体微管结合 ,并受微管反应动力学的调节[1]。Survivin在人类大多数恶性肿瘤中高表达 ,而在正常成人组织则低表达或不表达[2 ],提示其在肿瘤细胞凋亡中扮演重要角色 ,已引起人们的广泛关注。一、Survivin的结构特征(一 )Survivin的基因结构Su…     

成人型GSDⅡ致病基因突变的初步研究

糖原贮积病 (ｇｌｙｃｏｇｅｎｓｔｏｒａｇｅｄｉｓｅａｓｅ,ＧＳＤ)是一组遗传性的代谢性疾病 ,依据酶的缺陷分为 1 1型 ,糖原贮积病Ⅱ型是由酸性α 葡萄糖苷酶 (ａｃｉｄａｌｐｈａ ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ ,ＧＡＡ)缺陷所致的常染色体隐性遗传病 ,依据发病年龄和症状分为三种亚型 :婴儿型、儿童型和成人型。成人型ＧＳＤⅡ患者多为复合杂合子 ,其中ＩＶＳ1 ( 1 3Ｔ→Ｇ)的突变率高达 71 % [1 ] 。除这个热点外 ,还存在一些其他突变热点 ,如外显子 2中 52 5ｄｅｌＴ和外显子 1 3中的Ｇ61 5Ｒ ,在中国人婴儿型ＧＳＤⅡ患者中 ,外显子1 4的…     

25例自发流产与不良生育史夫妇的细胞遗传学分析

目的 探讨不良孕产史与染色体异常的关系.方法 采用常规方法培养外周血淋巴细胞制备染色体标本,经G带处理,必要时辅以C带和R带,按ISCN标准,用染色体图像分析仪进行染色体核型分析.结果 135对夫妇中有25例示核型异常,男性17例,女性8例,总异常率为18.52%.其中常染色体结构异常19例,性染色体异常6例.染色体异常主要包括平衡易位、臂间倒位、缺失、常染色体与性染色体多态性等.结论 染色体异常是导致不良生育的重要因素.因此,对有不良孕产史的夫妇进行染色体检查十分必要.     

吩嗪甲酸硫酯对葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏的人红细胞某些生化指标的影响

为探讨葡萄糖－6－磷酸脱氢酶（C6PD）缺乏的人红细胞在在作用下的变化情况。通过测定在作用前后G6PD缺乏人红细胞变形能力，高铁血红蛋白生成，过氧化氢酶活力，还原型谷胱甘肽（GSH），还原型三磷酸吡啶核苷（NADPH）的浓度，并与正常红细胞比较。结果显示G6PD缺乏红细胞在氧自由基作用下变形能力，过氧化氢酶活力，GSH及NADPH水平与正常红细胞相比显著下降（P＜0．01），而高铁血红蛋白生成显著增加（P＜0．01），从而得出G6PD缺乏红细胞氧化易感性增强导致细胞损伤，变形能力下降是其易发溶血的主要原因的结论。     

同种异体组织工程化软骨局部免疫豁免诱导的实验

背景:同种异体软骨移植存在局部免疫排斥反应,有必要进一步减少其排斥反应,以促进软骨修复的临床应用,为此进行一系列局部免疫豁免诱导的实验很有意义。目的:观察FasL基因重组逆转录病毒载体转染软骨细胞形成同种异体组织工程化软骨在体内生长情况。设计:随机对照观察。单位:上海交通大学。材料:选用36只同种异体新西兰兔为受者,45只新生1周龄青紫蓝兔为供者,雌雄均不限。购自中国科学院实验动物研究中心。双嗜性逆转录病毒包装细胞系PT67购自Clontech公司;细胞培养基DMEM、胎牛血清、G418、Polybrene购自GIBCO BRL。方法:实验于2000-01/2005-07在原上海第二医科大学完成。摸球法随机将新西兰兔分为3组:同种异体软骨细胞-FasL组、同种异体软骨细胞组及空白组。每组各12只。利用重组逆转录病毒载体转染的青紫蓝兔软骨细胞和组织工程材料pluronic F-127复合物构建兔同种异体组织工程软骨。①移植物观察其大体观察与质量变化:各组均将相应材料注入新西兰白兔的皮下,移植接种后1,2,3个月取出移植物观察其大体观察与质量变化。②染色观察:移植接种后1,2,3月取出移植物,切片,行苏木精-伊红、Safranin’O、Masson’s trichrome染色观察。③抗体检测:移植接种后1,2月抽血1mL,将青紫蓝兔的软骨细胞用裂解液冻融裂解作为混合抗原,于琼脂糖介质中电泳分离,与受者新西兰兔血清作用,观察有无相应抗体产生。④补体依赖细胞毒实验:将青紫蓝兔的软骨细胞制备成2×109L-1的细胞悬液,接种于96孔板上,贴壁生长24h,加受者新西兰兔血清进行细胞毒试验,在显微镜下计数凋亡细胞的百分率。主要观察指标:①两组移植物的大体观察与质量变化。②组织学变化。③抗体检测结果。④凋亡细胞的百分率。结果:纳入实验兔81只均进入结果分析。①移植物的大体观察与质量变化:接种2周后,同种异体软骨细胞-FasL组及同种异体软骨细胞组兔接种细胞-材料复合物处,均有明显的结节形成,对照组未形成接节。同种异体软骨细胞组新生软骨组织随时间推移有逐渐缩小的趋势,并在第4个月后完全消失。同种异体软骨细胞-FasL组虽也有缩小的趋势,但7个月后尚存。同种异体软骨细胞-FasL组移植物质量高于同种异体软骨细胞组(P<0.05)。②组织学观察:同种异体软骨细胞组软骨组织周围可见大量的淋巴细胞浸润,同种异体软骨细胞-FasL组明显减少。软骨细胞内部,未见淋巴细胞侵入。麦松染色,光镜下观察,中部小部分白色为未成熟的软骨细胞,大部分成熟软骨细胞周围有染成绿色的胶原分泌。Safranin’O染色呈强阳性反应,表明基质中富含糖胺多糖。③抗体检测:将青紫蓝兔的软骨细胞用裂解液冻融裂解作为混合抗原,与受者新西兰兔血清作用,显示相应无抗体产生。④凋亡细胞的百分率:结果同种异体软骨细胞-FasL组、同种异体软骨细胞组及空白组血清CDC凋亡细胞的百分率分别为5%,6%和1%,均为阴性。结论:FasL基因重组逆转录病毒载体转染的软骨细胞能形成组织工程软骨,且能延迟退化3个月。     

Survivin基因在结直肠癌中的表达及其对预后的判断价值

目的:研究凋亡抑制蛋白Survivin基因在结直肠癌组织和外周血清中的表达及其与临床病理参数的关系,同时评估其对结直肠肿瘤转移预后的意义.方法:应用实时定量RT-PCR方法,检测31例结直肠癌组织及其邻近正常结直肠组织和13例结直肠非肿瘤性组织及外周血清中Survivin mRNA的表达.同时回顾分析其与诸多临床、病理参数问的关系.结果:肿瘤组织中Survivin基因特异性高表达,阳性率为100%,显著高于结直肠非肿瘤性组织中Survivin的表达(P<0.01).而正常结直肠黏膜则不表达.但其与年龄、性别、肿瘤位置、大小及Dukes分期等临床、病理参数无关;有淋巴结及远处转移患者外周血清中Survivin基因高表达,与无转移者有显著差异(P<0.05).结论:Survivin基因特异表达于结直肠肿瘤组织.并通过抑制结直肠癌细胞凋亡促进癌细胞增殖及肿瘤新生血管生成而参与结直肠癌的发生发展;外周血液中Survivin基因检测对筛选结直肠癌高危转移患者和判断预后及有一定参考意义.