用于国产一步法HBsAg ELISA试剂及确认试验试剂的改进方法

目的延长酶反应时间以提高国产一步法酶联免疫吸附试验(ELISA)乙型肝炎表面抗原(HBsAg)试剂的敏感性和精密度。方法将酶反应时间自30 min延长至120 min,观察检测结果的敏感性和特异性的变化,及其对相关确认试剂确认试验的影响,并与Murex确认试剂检测结果进行比对。结果酶反应时间延长至120 min,HBsAg ELISA试验检测的Cut-off值不变,在检测Murex HBsAg检测结果呈阴性反应的样本时,其结果均为阴性。延长酶反应时间至120 min可以提高检测结果的吸光度(A)值,位于灰区的弱阳性样本的A值可提高1倍左右。常规ELISA结果S/CO值在0.5~1.0区段的22例阴性灰区样本中,在酶反应时间延长至120 min的国产确认试剂检测中有4例样本确认为阳性,该4例样本在Murex确认试验中亦为阳性;S/CO值在1.0~2.0区段的79例阳性灰区样本中,120 min的国产确认试验与Murex确认试验均为50例阳性,2种确认试验结果一致(χ2=0.078,P>0.05)。结论延长国产一步法HBsAg ELISA试剂的酶反应时间可以提高检测的敏感性并适用于相关的确认试验。     

甲型(H1N1)流感患者外周血细胞免疫水平的相关性研究

目的探讨甲型(H1N1)流感患者外周血细胞免疫水平。方法应用流式细胞仪检测30例确诊甲型(H1N1)流感抗体阳性患者外周血T淋巴亚群及自然杀伤(NK)细胞,并以45例普通感冒患者的检测结果作为对照,比较2组之间的差异。结果甲型(H1N1)流感患者外周血CD3+细胞百分比与对照组比较差异无统计学意义(P0.05),CD4+细胞、NK细胞百分比及CD4/CD8低于对照组(P0.05),CD8+细胞百分比高于对照组(P0.05)。结论甲型(H1N1)流感患者存在细胞免疫功能异常,可能为甲型(H1N1)流感病毒变异株造成患者体内免疫功能改变的原因之一。     

临床化学审核规则的制定及计算机自动确认的应用

目的 制定合理的临床化学检验结果 自动审核规则,运用计算机系统实现检测结果 的自动审核确认.方法 按照美国临床实验室标准化协会(CLSI)AUTO-10A文件的流程框架,依据布林逻辑设计临床生化自动审核的运算法则,结合运用医嘱溯源性校验、各检测项目的 医学决定水平、检验结果 间的逻辑关系以及患者结果 的回顾性校验,制定...     

应用高效毛细管电泳筛检和鉴定血清中M蛋白

目的:应用毛细管区带电泳法(CZE)和毛细管区带电泳-免疫削减法(IS-CZE)对M蛋白进行筛检和鉴定。方法:运用CZE和琼脂糖凝胶电泳(AGE)分别对532例血清进行M蛋白的筛检;用IS-CZE和免疫固定电泳(IFE)对M蛋白阳性的64例标本进行免疫分型。结果:与AGE相比较,CZE筛检M蛋白的阳性率为96.9%;与IFE相比较,IS-CZE分型的符合率为89.1%;自包被固相抗体能满足试验要求。结论:毛细管区带电泳可高效、快速完成M蛋白的筛检和鉴定,适合临床推广。     

量子点标记荧光原位杂交法在快速检测金黄色葡萄球菌中的应用

目的:应用量子点标记的荧光原位杂交方法以快速检测金黄色葡萄球菌。方法:采用两种量子点-亲和素-生物素-DNA探针,即A型肠毒素(SEA)基因与FemB基因探针与金黄色葡萄球菌临床分离株或感染金黄色葡萄球菌的粪便标本进行荧光原位杂交,同时与SEA基因聚合酶链反应(PCR)的检测结果比较。结果:10株临床金黄色葡萄球菌分离株中,2株SEA基因探针杂交和SEA基因PCR检测结果均为阳性,其余8株SEA基因探针杂交和SEA基因PCR检测结果均为阴性,10株FemB基因探针杂交结果均为阳性。3例分离培养为金黄色葡萄球菌的临床粪便标本直接进行荧光原位杂交,FemB及SEA基因探针杂交结果均为阳性,SEA基因PCR检测结果均为阳性。SEA、FemB基因探针与其他相关菌种未见非特异性反应。结论:量子点标记荧光原位杂交法检测金黄色葡萄球菌具有快速、简便、特异的特点,且可用于临床粪便标本的直接检测。     

免疫细胞化学标记在积液细胞学鉴别诊断中的应用

目的探讨免疫细胞化学特异性标记非肿瘤性增生的间皮细胞、转移性腺癌及恶性间皮瘤细胞在积液细胞学鉴别诊断中的意义。方法浆膜腔积液标本170例,苏木素-伊红(HE)染色,镜检细胞学形态,免疫细胞化学标记一系列单克隆抗体:癌胚抗原(CEA)、上皮细胞膜抗原(EMA)、细胞角蛋白(CK)、上皮相关抗原(MOC-31)、上皮细胞钙粘蛋白E、波形蛋白(VIM)和结蛋白。酶染色采用生物素化酶二步法。采用双盲法阅读免疫细胞化学染色结果。结果上述几种抗体在反应性增生的间皮细胞、癌和恶性间皮瘤3组标本中表达差异有统计学意义(P<0.01)。其中癌症组的CEA、EMA、MOC-31、钙粘蛋白E和CK阳性表达率分别为88%、97%、89%、92%和94%,而VIM和结蛋白呈现低表达,阳性表达率分别为6%和11%。良性间皮细胞标本组中,VIM和结蛋白阳性表达率分别为84%和91%,而CEA、EMA、MOC-31、钙粘蛋白E显示低表达,阳性表达率分别为13%、16%、9%和6%。恶性间皮瘤标本组中,CK、VIM、结蛋白呈现强阳性表达,阳性率为100%,而CEA、EMA、MOC-31、钙粘蛋白E表达呈阴性。结论选择一组特异性免疫细胞化学标记,可帮助传统的细胞形态学检查,对良、恶性浆膜腔积液的鉴别诊断起重要作用。     

肝脂酶基因启动子多态性与连锁不平衡分析

目的:探讨肝脂酶(hepatic lipase,HL)基因启动子-250G/A、-514C/T、-710T/C和-763A/G4个位点单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)的分布特征及连锁不平衡关系。方法:应用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性技术,对112名三酰甘油(triglyceride,TG)正常者、103例高三酰甘油血症(hypertriglyceri-demics,HTG)患者的HL基因型和等位基因的分布频率进行分析,运用群体数理遗传学方法分析HL启动子4个基因位点SNP的遗传平衡吻合度及相互间连锁不平衡关系。结果:在HTG组中,-250A和-514T的等位基因频率及基因型频率均显著大于TG正常组(P0.05);-763A/G位点的基因型频率及等位基因频率在两组中则均无差异(P>0.05)。4个SNP相互间均呈强连锁不平衡。对启动子区3个SNP位点两两组合的单倍体型频率分析表明,在HTG和TG正常者中也存在显著差异(P     

免疫磁性微球富集检测结核分枝杆菌方法的建立

目的:建立一种基于免疫磁性微球富集的检测结核分枝杆菌的新方法 ,以提高其临床阳性检出率。方法:提取结核分枝杆菌H37Rv抗原,并免疫新西兰白兔,制备兔抗结核分枝杆菌H37Rv血清。分离纯化抗血清,采用酶联免疫吸附试验和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术鉴定抗体的效价和纯度。将抗结核分枝杆菌抗体与生物素标记,并与结合有链霉亲和素的磁性微球进行连接获得免疫磁性微球,优化反应条件,建立免疫磁性微球富集检测结核分枝杆菌的方法。以培养结果作为判断金标准,比较免疫磁性微球富集方法与常规涂片镜检方法的检出率。结果:制备的抗结核分枝杆菌抗体浓度为14 mg/mL,最终效价为1∶20 000。检测158例临床标本,免疫磁性微球富集方法可使涂片镜检阳性率从5.1%提高到13.9%。22例免疫磁性微球富集后涂片镜检阳性的标本培养均为阳性,其特异度为100%。结论:建立的免疫磁性微球富集方法简便、有效,能显著提高结核分枝杆菌镜检的灵敏度和特异度。     

遗传性疾病基因诊断的基本原理

用分子生物学技术通过检测基因而达到诊断疾病的目的是生物学者在分子生物学技术发展的最初阶段就有的设想。１９７６年人们开始在实验室进行研究，１９８４年以来，基因检测在许多国家已成为常规诊断项目，主要用于遗传性疾病的诊断。１基因突变的种类遗传性疾病的产生是由于１个基因或数个基因发生异常导致这些基因所载有的遗传信息改变，继而使蛋白质合成受影响；或是合成有缺陷的蛋白质（功能和结构的改变），或是无蛋白质合成。基因异常有多种多样，它们都被称为突变。突变范围大小不一，最小仅涉及１个碱基，称为点突变。而大范围的突…