食管癌细胞核仁抗原单克隆抗体的制备及其特性的初步鉴定

【目的】制备抗食管癌细胞核仁抗原单克隆抗体 ,用于寻找肿瘤的标志物和癌的病理诊断。【方法】以食管癌组织核基质为抗原 ,采用足垫法免疫Balb/c小鼠 ,运用杂交瘤技术建立分泌特异性单抗的杂交瘤细胞株 ,制备食管癌细胞抗原片和食管癌冰冻切片 ,采用免疫组化检测并采用蛋白印迹法 (Westernblotting)分析 ,鉴定是否为特异性单克隆抗体。【结果】获得一细胞株 (1 7/E)能稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株 ,1 7/E能与食管癌细胞和其他 10种癌细胞的核仁反应 ,不与正常食管上皮细胞核仁反应。Westernblotting分析表明 ,1 7/E与食管癌组织核基质 41ku处有一反应带 ,与正常食管组织核基质无反应。【结论】 1 7/E可能是对食管癌等多种肿瘤细胞核仁抗原的特异性单克隆抗体 ,为深入研究肿瘤细胞核仁抗原的生物学特性及肿瘤病理诊断提供了有效的制剂 ,并具开发的潜在价值。     

骨肉瘤中HIF-1α、VEGF、P53表达与血管生成和预后的关系

目的检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及VEGF、p53、CD34在骨肉瘤的表达，探讨其与缺氧情况下骨肉瘤血管生成和预后的关系。方法采用免疫组织化学S-P法检测46例有完整随访资料的骨肉瘤病例中HIF-1α、VEGF、p53、CD34的表达。用Spearman分析各指标间的相关性．并结合临床资料进行生存曲线分析。结果46例骨肉瘤标本中有14例(30．4％)表达HIF-1α；HIF-1α表达组VEGF、p53表达强度及术后转移率均高于HIF-1α不表达组；HIF-1α表达组患者术后1年生存率及总生存率均显著低于HIF-1α不表达组。HIF-1α表达与VEGF、p53表达之间存在显著相关性；HIF-1α表达与微血管密度(MVD)之间无相关性。结论骨肉瘤组织中存在HIF-1α的过表达，HIF-1部分地参与了骨肉瘤的演进，HIF-1通过调节VEGF的表达在骨肉瘤血管生成中发挥着重要作用；HIF-1和p53缺失或突变可能协同参与了缺氧对骨肉瘤肿瘤细胞的调节，HIF-1α表达与骨肉瘤的不良预后密切相关，是评估骨肉瘤患者预后的重要指标。     

鼻咽癌组织中MIF、c-Fos、NF-κB和MMP9的表达及意义

目的研究巨噬细胞移动抑制因子(macrophage igration nhibitory actor,MIF)、核蛋白c-Fos、核因子κB F-κB)以及金属基质蛋白酶9(MMP9)在鼻咽癌组织中的表达水平及相互关系,探讨MIF在鼻咽癌细胞早期侵袭转移过程中的作用及相关机制.方法收集1999～2003年期间45例确诊未治的鼻咽原发癌活检组织标本,采用免疫组化法检测鼻咽癌组织中MIF、c-Fos、NF-κB 65亚单位以及MMP9的表达,并分析与患者的病理及临床资料的关系.结果在45例鼻咽原发癌组织中,MIF、c-Fos、NF-κB 65和MMP9的阳性表达率分别为77.8%(35/45)、51.1% 3/45)、62.2％(28/45)和71.1％(32/45).其中,癌细胞MIF和MMP9的表达水平均与淋巴结转移有关,伴有淋巴结转移的癌组织中两者表达水平均高于无淋巴结转移的癌组织(P值均＜0.05).MIF阳性组的癌细胞c-Fos和MMP9的表达也均显著高于MIF阴性病例.且MIF、c-Fos和MMP9的表达互为正相关.但癌细胞NF-κB 65的表达与患者性别、年龄、病理组织学分型、有无淋巴结转移以及临床分期均未显示相关性,且与其它3种蛋白的表达亦无相关性.结论 MIF在鼻咽癌细胞的早期淋巴结转移过程中可能具有重要的促进作用,其机制可能是非NF-κB依赖性的,而与增强癌细胞c-Fos表达、活化AP-1转录因子间接地调控癌细胞MMP9表达上调有关.     

病理实验室职业危害因素与控制对策探讨

随着医疗卫生事业改革的深入与预防保健事业的发展 ,职业卫生监督、监测、健康监护工作逐步走向科学化、法制化与预防保健事业的发展 ,越来越多医务人员认识到只有改善实验室的工作环境 ,才能减少职业危害因素。本文就病理实验室存在的危险因素及现状 ,提出相应的病理实验室控制对策。1　病理实验室的结构和工作环境　　一个完整的病理实验室包括有 :标本收集、取材室、脱落细胞涂片室、脱水、包埋室、切片室、染色室、冰冻切片室、组织化学室、免疫组织化学室、分子生物学室等。虽然病理实验室是医学实验室的一部分 ,但它是医学上接触人体…     

转染survivin对HLF细胞增殖及凋亡的影响

【目的】 探讨survivin基因表达对人肺纤维母细胞（humanlungfibroblast，HLF）增殖、凋亡的影响。【方法】 构建survivin基因真核表达质粒peDNA3．1／SVN；利用脂质体转染法将其转入不表达survivin mRNA的HLF细胞系。连续培养10周。筛选出稳定表达的阳性克隆（HLF／SVN）及转空质粒对照（HLF／K）。用RT-PCR、免疫组化、Western blot检测细胞中survivin、bel-2和caspase3mRNA表达：通过观察细胞生长曲线、细胞凋亡指数。探讨转染survivin基因对HLF细胞生长、凋亡的影响。【结果】转染peDNA3．1／SVN后。在4、6、8和10周HLF／SVN细胞查见survivinmRNA表达；免疫组化和Westernblot见HLF／SVN细胞survivin阳性表达；转染后caspase3mRNA受到抑制，表达减弱或消失。HLF／SVN细胞凋亡指数（0．3％、1．0％、1．5％）皆低于HLF（0．9％、4．3％、2．1％）及HLF／K（0．8％、1．4％、2．8％）。细胞生长曲线示HLF／SVN细胞生长快于HLF和HLF／K，差异有统计学意义（P〈0．05）。【结论】survivin基因能促进HLF细胞生长。可能通过抑制凋亡和促进细胞分裂而发挥作用。     

N-双(2-氯乙基)-N′-N″-二乙撑基磷酰胺对动物肿瘤的疗效及毒性

本文研究了17种磷酰胺氮芥类化合物,发現N-双(2-氯乙基)-N'-N"-二乙撐基磷酰胺(以下均簡称AT-222)具有較强的抗癌作用。主要結果如下:(1)腹腔注射AT-2221—2.5毫克/公斤对小白鼠肉瘤180,网織細胞肉瘤,AK肉瘤,梭形細胞肉瘤,大白鼠Jensen肉瘤和Walker癌肉瘤都有明显的抑制作用,口服給药时对Jensen肉瘤也有一定的疗效。但对Ehrlish癌固体型和腹水型則无明显的影响。(2)AT-222对小白鼠的急性和亚急性LD_(50)分別为19和4.7毫克/公斤,大白鼠的亚急性LD_(50)为2.7毫克/公斤(停药后观察3天)和1.9毫克/公斤(停药后观察10天)。(3)給狗靜脉注射AT-222 0.1毫克/公斤,其血象、大小便和体重均无明显改变。在0.3毫克/公斤組,給药第5天时白血球稍有下降,停药后逐渐恢复,解剖发現腸粘膜有出血点,脾淋巴細胞核和卵巢顆粒細胞核有固縮現象。0.9毫克/公斤組,于給药后第5天时白血球卽明显下降,停药后2—4天动物相继死亡,解剖检查发现各脏器均有弥蔓性出血,腸、胃腺体、腎上腺和睾丸均有明显萎縮。     

抗肿瘤药物的研究——ⅩⅧ.5-[双-(2-氯乙基)-氨基]-吲■-2羧酸(AT-346)的抗肿瘤作用及毒性

作者发現两个吲(口朶)氮芥化合物AT-267和AT-346均有明显的抗肿瘤作用,其中尤以AT-346的疗效較佳,因此进行了它的疗效与毒性研究并与溶肉瘤素进行了比較。主要結果如下:(1)AT-267,AT-346和溶肉瘤素分别口服1/6的急性LD₅₀剂量对小鼠肉瘤180,棱形細胞肉瘤,网织細胞肉瘤,AK肉瘤,Ehrlich癌实体型和乳腺癌均有显著的抑制作用。前两个药对小鼠黑色素瘤,脑瘤22和大鼠Jensen肉瘤也均有一定的抑制作用。(2)AT-267,AT-346和溶肉瘤素口服对小白鼠的急性LD₅₀分别为120,16和33毫克/公斤,亚急性LD₅₀分别为33,6.8,10毫克/公斤。AT-267和AT-346对肉瘤180的治疗指数(MTD/MED)分别为6.7和13.4。它們对大白鼠的亚急性LD₅₀分别为21和7毫克/公斤。(3)給狗每天口服AT-346 0.9和2.7毫克/公斤,共10天,可見造血系統的抑制及食量的降低,組織学检查除发現腸粘膜下出血及肝脏輕度的脂肪性变外,未見有其他的异常。給0.3毫克/公斤組,除白血球略有降低外,也未見有其他的异常发現。猴2只在10天内分别用AT-346总量56和122毫克,均見造血器官的輕度抑制,用总量5毫克的另1只猴則未見明显的异常改变。     

化疗药物对淋巴瘤survivin mRNA表达的影响

目的 探讨抗肿瘤药物环磷酰胺(CTX)、甲氨蝶呤(MTX)、氟尿嘧啶(5-Fu)的作用及耐药机制.方法 将化疗药物作用于HL-60、Raji和Jurkat细胞株,RT-PCR检测抗凋亡基因survivin、bcl-2和凋亡基因caspase-3 mRNA水平的变化,对结果进行半定量分析.用MTT法检测转染survivin反义mRNA的Jurkat细胞对抗肿瘤药物的敏感性.结果 HL-60、Raji和Jurkat细胞高表达survivin和bcl-2 mRNA,survivin和bcl-2 mRNA表达随着化疗药物作用时间延长和剂量升高逐渐减弱;但Raji细胞经低剂量MTX作用24 h survivin mRNA表达升高,HL-60细胞经CTX作用24 h bcl-2 mRNA表达升高;不表达caspase-3的Raji和Jurkat细胞,经CTX作用24 h表达caspase-3 mRNA.转染survivin反义mRNA后Jurkat细胞对抗肿瘤药物的敏感性增加,细胞生长抑制率明显大于未转染组.结论 survivin和bcl-2 mRNA表达降低和caspase-3表达升高与CTX、MTX、5-Fu抗肿瘤作用有关,抑制survivin表达可以增加化疗药物的敏感性.     

α_1(Ⅰ)型前胶原基因反义重组质粒对成纤维细胞的影响

目的　研究反义RNA对成纤维细胞胶原蛋白的调控作用 ,探讨基因治疗增生性瘢痕的可能性。方法　将α1 (Ⅰ )型前胶原基因片段反向克隆至非整合型哺乳动物表达载体pREP9的多克隆位点中 ,以构建α1 (Ⅰ )型前胶原基因反义RNA表达载体pREP9 AScoll,并籍脂质体 lipofectamine将其导入人胚肺HLF细胞中 ,运用MTT试验、电镜、3H 脯氨酸掺入法检测反义RNA表达载体对HLF细胞的影响。结果　外源重组体pREP9 AScoll对胶原蛋白的合成有明显抑制作用 ,但对细胞增殖无任何影响。结论　α1 (Ⅰ )型前胶原基因反义重组质粒能有效调控胶原蛋白的合成 ,从而有在基因水平防治瘢痕的前景。