低氧性肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞中Kv2．1基因表达的变化

目的：探讨肺动脉平滑肌细胞门控钾离子通道Kv2.1基因在缺氧性肺动脉高压发病中的作用.方法：①实验于2003-04/2004-06在武汉大学人民医院胸心血管外科实验室完成.选用健康成年雄性普通级Wistar大鼠48只.随机将大鼠分为6组,分别为对照组、缺氧8 h组及缺氧3,7,14和28 d组,每组8只.将动物置于常压低氧仓,仓内注入流通氮氧混合气,调节仓内氧浓度保持在（10&;#177;5）%,将大鼠造成常压缺氧性肺动脉高压模型.对照组：不造成缺氧性肺动脉高压大鼠模型.缺氧8 h组及缺氧3,7,14和28 d组：分别将大鼠置于缺氧环境中8 h,3,7,14和28 d.②记录肺动脉压力波,计算肺动脉平均压.测定血浆中游离钾、钙离子浓度.应用全自动图像心肺血管分析软件测定肺细小动脉中膜平滑肌细胞核密度及肺细小动脉中膜厚度.③对肺动脉平滑肌细胞进行染色及显色后,镜下观察肺动脉平滑肌细胞表面核抗原以及bcl-2抑凋亡因子表达.bcl-2抑凋亡因子表达：0为不表达,＋为微弱表达,（）为中等阳性,（）为强阳性.④以图像分析系统（IBAS）对杂交点进行密度扫描,以经同样处理的β-actin基因mRNA表达量作为内参照,肺动脉平滑肌细胞Kv2.1基因mRNA表达以两者的积分吸光度（A值）的比值表示.⑤对数据进行方差分析处理,组间比较采用t检验.结果：大鼠48只均进入结果分析.①随着缺氧时间延长,大鼠平均肺动脉压、肺细小动脉中膜平滑肌细胞核密度及肺细小动脉中膜厚度逐渐升高.各缺氧组大鼠平均肺动脉压明显高于对照组（P＜0.01）,缺氧3,7,14,28d组大鼠肺细小动脉中膜平滑肌细胞核密度及肺细小动脉中膜厚度明显高于对照组（P＜0.05～0.01）.②随着缺氧时间延长,大鼠血浆中游离K＋浓度逐渐降低、Ca2＋浓度逐渐升高.缺氧3,7,14,28 d组大鼠血浆中游离K＋浓度明显低于对照组（P＜0.05～0.01）,缺氧7,14,28 d组大鼠血浆中游离Ca2＋浓度明显高于对照组（P＜0.05～0.01）.③随着缺氧时间延长,大鼠平滑肌细胞中增殖细胞核抗原阳性表达及bcl-2表达逐渐上升和增强.缺氧3,7,28 d组大鼠平滑肌细胞中增殖细胞核抗原阳性表达明显高于对照组（P＜0.05～0.01）.④随缺氧时间的延长,Kv2.1基因mRNA转录水平呈下降趋势,与内参照β-action基因mRNA的A值比值分别为0.94,0.90,0.64,0.36,0.26.结论：①Kv2.1基因在正常大鼠肺动脉平滑肌细胞上表达正常,而在低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞上的表达则降低.②钾离子通道活性降低抑制细胞凋亡,并增加细胞中的钙离子浓度,从而导致血管重建,产生肺动脉高压.     

多西他赛与顺铂单药及联合治疗晚期非小细胞肺癌疗效观察

目的 比较多西他赛单药、顺铂单药以及两药联合三种方案治疗晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的疗效.方法 104例经病理确诊无手术指征的晚期NSCLC患者.多西他赛组给予艾素75 mg/m2,顺铂组给予顺铂100 mg/m2,联合组给予艾素75 mg/m2加顺铂80 mg/m2.比较三个化疗方案反应率、中位生存期、1 a生存率.结果 联合组的反应率和中位生存期明显高于其他两组.结论 多西他赛联合顺铂有较好疗效,单用顺铂不能延长患者的生存期.     

ICAM-1和NF-κB在产生胸膜固定术中的作用

目的探讨硝酸银和滑石粉浆在大鼠产生胸膜固定术中ICAM-1和NF-κB的作用,研究胸膜固定术产生的机制.方法健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠60只,随机分为T组(滑石粉组)和A组(硝酸银组),在造成大鼠气胸模型后,A组注入硝酸银(0.1%硝酸银1ml),B组注入200mg/kg滑石粉 1.0ml 0.9%生理盐水.两组分别在注射药物后第1、4、7天、2、4周时进行剖胸探查收集标本,观察大鼠胸膜粘连积分、组织病理学改变及检测肺组织或胸膜组织中NF-κB及ICAM活性,大鼠24h胸液量.结果滑石粉浆组产生胸膜粘连在初期较硝酸银组快,到第4周,滑石粉浆组粘连积分显著高于滑石粉浆组;硝酸银组24h胸液量多于滑石粉浆组;两组肺组织内ICAM-1和NF-κB活性表达随着注入硬化剂的时间延长而逐渐增加,其活性均在注入硬化剂后开始增高,第2周时达到高峰值,到第4周时降至正常水平,且肺组织内ICAM-1和NF-κB活性有明显的相关性.结论0.1%硝酸银1ml产生胸膜固定术的效果好于200mg/kg滑石粉,胸膜固定术的主要机制是无菌性炎症反应以及炎性细胞的粘附过程,NF-κB和ICAM-1在胸膜粘连过程中发挥重要的作用.     

落新妇甙对肺移植大鼠外周血T细胞活化的影响

背景：目前,对于排斥反应的研究主要是通过阻断T细胞活化来达到抑制排斥反应。而在众多体外试验中,落新妇甙及其类似物显示了典型的选择性免疫抑制特色。 目的：观察落新妇甙对大鼠移植肺活化T细胞的影响及动态变化,探讨落新妇甙对大鼠移植肺活化T细胞的作用。 方法：50只大鼠随机分为3组。其中10只不做移植,抽取外周血设为空白组。剩余40只大鼠随机均分供、受体,左侧单肺原位移植建模后再随机均分为2组：对照组肺移植后,用生理盐水灌胃;落新妇甙组移植后用落新妇甙灌胃。移植前、移植后第2,5天,分别用荧光标记抗体双染色结合流式细胞技术检测各阶段大鼠T细胞表达的活化抗原CD69、CD25和CD71的表达。 结果与结论：移植后第2天,落新妇甙组检测的CD69、CD25和CD71抗原均显著高于空白组(P < 0.01),但低于对照组,差异有显著性意义(P < 0.05)。移植后第5天,落新妇甙组CD69、CD25和CD71抗原基本降至正常水平,显著低于对照组(P < 0.01)。结果提示落新妇甙能显著抑制急性排斥反应诱导的T细胞活化,对肺移植排斥反应有较强的抑制作用。     

落新妇甙对肺移植大鼠外周血T细胞活化的影响

背景:目前,对于排斥反应的研究主要是通过阻断T细胞活化来达到抑制排斥反应.而在众多体外试验中,落新妇甙及其类似物显示了典型的选择性免疫抑制特色.目的:观察落新妇甙对大鼠移植肺活化T细胞的影响及动态变化.探讨落新妇甙对大鼠移植肺活化T细胞的作用.方法:50只人鼠随机分为3组.其中10只不做移植,抽取外周血没为空白组.剩余40只大鼠随机均分供,受体,左侧单肺原位移植建模后再随机均分为2组:对照组肺移植后,用生理盐水灌胃;落新妇甙组移植后用落新妇甙灌胃.移植前、移植后第2,5天,分别用荧光标记抗体双染色结合流式细胞技术检测各阶段大鼠T细胞表达的活化抗原CD69、CD25和CD71的表达.结果与结论:移植后第2天,落新妇甙组检测的CD69、CD25和CD71抗原均显著高于空折组(P<0.01),但低于对照组,差异有显著性意义(P<0.05).移植后第5天,落新妇甙组CD69、CD25和CD71抗原基本降至正常水平,显著低于对照组(P<0.01).结果提示落新妇甙能显著抑制急性排斥反应诱导的T细胞活化,对肺移植排斥反应有较强的抑制作用.     

胸廓上口大血管损伤的分类和救治

目的 探讨胸廓上口大血管损伤病因分类和救治经验。方法 分析经手术治疗的64例胸廓上口大血管损伤的临床资料，其中男44例，女20例；年龄18～68岁。致伤原因分别为创伤性（锐器伤、钝性或减速伤）、病理性及医源性损伤。损伤部位归为颈根部和胸顶部两类，损伤血管为颈总动脉、无名动脉、锁骨下动脉及伴行的静脉。手术方式：（1）按损伤原因及部位的分类选择切口；（2）依血管具体损伤选用不同修复方法（或体外循环下）。结果 治愈56例（88％），死亡7例（11％），致残1例（2％）。结论 对颈根部血管损伤宜间断压迫止血并扩创施术；胸顶部血管损伤需开胸控制血管近端后施术，特殊病例需在体外循环支持下实施血管分流和重建。     

喉结肠吻合术重建消化道治疗食管化学灼伤并咽喉部瘢痕狭窄

食管化学性灼伤常易形成食管瘢痕狭窄,结肠代食管术为一种常被采用的手术方法[1].但食管化学灼伤又常常涉及咽喉部损伤导致气管瘢痕狭窄,对这种高位损伤临床常难以进行手术治疗.我们对2例食管化学灼伤后,合并有咽部闭锁和喉部瘢痕狭窄的病人进行了喉后移术,将其与结肠代食管术的结肠上端吻合,临床效果良好,现总结报道如下.     

癌基因c-fos和c-jun与非小细胞肺癌临床病理特征的相关性研究

 引言肺癌是常见的恶性肿瘤,其发病机制和早期诊断一直困扰着临床医师。c fos和c jun蛋白是核内癌基因产物,参与多个基因的转录调节,控制着细胞的增殖和分化。本文旨在通过研究c fos和c jun与非小细胞肺癌临床病理特征的相关性来探讨它们在非小细胞肺癌发生、发展中的意义。1　资料与方法1.1　临床资料　收集武汉大学人民医院2 0 0 3年1月～2 0 0 3年4月肺癌根治术切除的标本5 2例,其中男性2 9例,女性2 3例,中位年龄5 2岁(36～70岁)。采取1997年国际抗癌联盟肺癌病理分期标准,Ⅰ期14例,Ⅱ期7例,Ⅲ期2 8例,Ⅳ期3例;鳞癌2 7例,腺癌2 3例,大细胞癌2例。每例标本取癌组织及癌旁正常组织(距肿瘤边缘>5cm) ,所有标本均经病理证实。1.2　研究方法1.2 .1　固定化蛋白质印迹法　应用RIPA组织裂解液分别裂解肺癌与正常肺组织,提取组织总蛋白;蛋白定量试剂盒测定组织提取液的蛋白浓度。每例标本取蛋白5 0微克电泳,经10 %聚丙烯凝胶电泳分离后电转移至PVDF膜上,封闭后,加一抗(兔抗人c fos及c jun多克隆抗体) ,二抗(辣根过氧化物酶结合羊抗兔多克隆抗体)进行杂交...     

低氧性肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞中Kv2.1基因表达的变化

目的:探讨肺动脉平滑肌细胞门控钾离子通道Kv2.1基因在缺氧性肺动脉高压发病中的作用。方法:①实验于2003-04/2004-06在武汉大学人民医院胸心血管外科实验室完成。选用健康成年雄性普通级Wistar大鼠48只。随机将大鼠分为6组,分别为对照组、缺氧8h组及缺氧3,7,14和28d组,每组8只。将动物置于常压低氧仓,仓内注入流通氮氧混合气,调节仓内氧浓度保持在(10±5)%,将大鼠造成常压缺氧性肺动脉高压模型。对照组:不造成缺氧性肺动脉高压大鼠模型。缺氧8h组及缺氧3,7,14和28d组:分别将大鼠置于缺氧环境中8h,3,7,14和28d。②记录肺动脉压力波,计算肺动脉平均压。测定血浆中游离钾、钙离子浓度。应用全自动图像心肺血管分析软件测定肺细小动脉中膜平滑肌细胞核密度及肺细小动脉中膜厚度。③对肺动脉平滑肌细胞进行染色及显色后,镜下观察肺动脉平滑肌细胞表面核抗原以及bcl-2抑凋亡因子表达。bcl-2抑凋亡因子表达:0为不表达,+为微弱表达,为中等阳性,为强阳性。④以图像分析系统(IBAS)对杂交点进行密度扫描,以经同样处理的β-actin基因mRNA表达量作为内参照,肺动脉平滑肌细胞Kv2.1基因mRNA表达以两者的积分吸光度(A值)的比值表示。⑤对数据进行方差分析处理,组间比较采用t检验。结果:大鼠48只均进入结果分析。①随着缺氧时间延长,大鼠平均肺动脉压、肺细小动脉中膜平滑肌细胞核密度及肺细小动脉中膜厚度逐渐升高。各缺氧组大鼠平均肺动脉压明显高于对照组(P<0.01),缺氧3,7,14,28d组大鼠肺细小动脉中膜平滑肌细胞核密度及肺细小动脉中膜厚度明显高于对照组(P<0.05～0.01)。②随着缺氧时间延长,大鼠血浆中游离K+浓度逐渐降低、Ca2+浓度逐渐升高。缺氧3,7,14,28d组大鼠血浆中游离K+浓度明显低于对照组(P<0.05～0.01),缺氧7,14,28d组大鼠血浆中游离Ca2+浓度明显高于对照组(P<0.05～0.01)。③随着缺氧时间延长,大鼠平滑肌细胞中增殖细胞核抗原阳性表达及bcl-2表达逐渐上升和增强。缺氧3,7,28d组大鼠平滑肌细胞中增殖细胞核抗原阳性表达明显高于对照组(P<0.05～0.01)。④随缺氧时间的延长,Kv2.1基因mRNA转录水平呈下降趋势,与内参照β-action基因mRNA的A值比值分别为0.94,0.90,0.64,0.36,0.26。结论:①Kv2.1基因在正常大鼠肺动脉平滑肌细胞上表达正常,而在低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞上的表达则降低。②钾离子通道活性降低抑制细胞凋亡,并增加细胞中的钙离子浓度,从而导致血管重建,产生肺动脉高压。     

硝酸银和滑石粉产生胸膜固定术的效果比较

目的 比较硝酸银和滑石粉浆在大鼠中产生胸膜固定术的效果。方法 健康成年雄性Sprague—Dawley大鼠60只,随机分为两组：T组（滑石粉组）和A组（硝酸银组）,在造成大鼠气胸模型后,A组注入硝酸银（0．1％硝酸银1ml）,B组注入200mg／kg滑石粉＋1．0ml 0．9％生理盐水。A组和T组分别在注射药物后第1、4,7d,2、4w时,进行剖胸探查收集标本,观察大鼠胸膜黏连积分、胸膜及肺组织炎性积分、胸膜纤维化积分及检测肺组织或胸膜组织中髓过氧化物酶（MPO）的活性。结果：滑石粉浆组产生胸膜黏连在初期较硝酸银组快,但从第二周开始,硝酸银组产生胸膜黏连效果好于滑石粉浆组,到第四周,滑石粉浆组黏连积分为1．8±0．1,而硝酸银组积分为3．3±0．2,显著高于滑石粉浆组;炎性积分和纤维化积分均为硝酸银组高于滑石粉浆组,两组肺组织内MPO活性随着注入硬化剂的时间延长而逐渐增加,其活性均在注入硬化剂后开始增高,第2周时达到高峰值,到第四周时降至正常水平。结论 0．1％硝酸银1ml产生胸膜固定术的效果好于200mg／kg滑石粉,具有临床使用价值。