RNAi技术沉默Bcl-2基因对人膀胱癌细胞株T24增殖影响的研究

目的探讨RNA干扰(RNAi)技术沉默Bcl-2基因表达对人膀胱癌细胞株T24增殖的影响。方法针对Bcl-2 mRNA序列设计合成3对编码小干扰RNA(siRNA)的DNA模板,构建pGenesil-1-Bcl-2 siRNA重组质粒,转染T24细胞。采用Western blot检测重组质粒对Bcl-2蛋白表达的影响,MTT法观察重组质粒对T24细胞体外生长的抑制作用,Annexin-V-PI双染法流式细胞术(FCM)检测转染重组质粒后细胞的凋亡状况。结果成功构建了pGenesil-1-Bcl-2 siRNA重组质粒,并成功转染T24细胞。重组质粒抑制Bcl-2基因的表达接近70%;转染重组质粒后,T24细胞的活力降低为(66.9±5.6)%;重组质粒组的T24细胞凋亡率为34.55%～45.39%。结论pGenesil-1-Bcl-2 siRNA重组质粒明显下调Bcl-2在膀胱癌细胞中的表达,并抑制肿瘤细胞生长,促进其凋亡。     

改良IME-FICC方法对乳腺癌外周血微转移的检测

【目的】探讨一种改良IME-FICC（免疫磁珠富集-免疫荧光细胞化学）法检测乳腺癌外周血微转移癌细胞及其意义。【方法】通过与磁珠共价结合的表皮细胞黏附分子（EpCAM）抗体富集外周血中表达EpCAM的癌细胞，结合免疫荧光化学法检测细胞角蛋白（CK）8／18阳性的癌细胞（呈绿荧光）。放置MCF-7乳腺癌细胞于正常人外周血标本中以检验本方法癌细胞回收率及敏感度，检测20例正常女性志愿者及12例Ⅳ期乳腺癌患者治疗前的外周血标本，探索其特异性及临床应用可行性。【结果】免疫磁珠富集后癌细胞回收率达86％～93％．可在10^7外周血单个核细胞中检测到1个癌细胞，特异性为100％。Ⅳ期乳腺癌患者外周血中CK8／18阳性细胞检出率75％。【结论】改良IME-FICC法是一种简便、省时、敏感性及特异性高的检测方法，有较大的临床应用前景。     

肠道储尿囊粘膜远期形态学改变的研究

目的初步探讨术后肠道储尿囊粘膜远期形态学的变化与临床并发症的关系.方法肠道储尿囊代膀胱术后随访25例患者,其中结肠储尿囊15例,回肠储尿囊10例.取得活检组织后行光镜和电镜检查.结果结肠储尿囊术后远期病例肠粘膜腺体深度为(0.17±0.04)mm,明显浅于对照组腺体深度[(0.42±0.04)mm],微绒毛高度为(0.35±0.05)μm,明显短于对照组微绒毛高度(0.69±0.08)μm,出现粘膜明显萎缩;回肠储尿囊术后肠粘膜绒毛高度,近期组为(0.61±0.22)mm,远期组为(0.37±0.16)mm,与对照组(0.41±0.14)mm比较,远期、近期都有明显的粘膜萎缩.在远期病例,2种储尿囊粘膜上皮细胞的紧密连接都保持良好.没有发现明显恶变的形态学征象.发生了代谢性酸中毒或储尿囊结石的病例在粘膜形态结构上无特殊改变.结论术后肠道储尿囊粘膜出现了结构上的萎缩,是"适应性”的变化,认为肠管是一种良好的膀胱替代物.     

p65基因序列shRNA慢病毒载体构建及其作用功能的初步研究

Objective To obtain shRNA sequences that can stably block the expression of Nuclear Factor kappa- B (p65) in the prostate cancer cell line LNCaP and construct the lentivirus vector.And validate the gene function of p65 in the cell line. Methods According to p65 genetic information, we design siRNA1, siRNA2, siRNA3 those three siRNA sequences targeting the ods area of p65 gene and then form the corresponding four pairs of complementary single strand DNA of shRNA, including the sense strand and the antisense strand. The synthetic shRNA sequence was inserted into the empty pSIH1-H1-copGFP shRNA Vector, and after transfecting the prostate cancer cells , the inhibitory effect of p65 mRNA by different sequences was detected through real-time PCR, and the inhibitory effect of p65 protein expression was detected by Western-blotting. Thus we can obtain highly effective shRNA sequences in the inhibition of p65 in prostate cancer cells. MTT, flow cytometry, transwell were chosen to test the cell growth, migration and invasive power in vitro to compare the difference of the experimental group, control group and negative group. Results The third shRNA sequence had the best inhibitory effect and the inhibitory effect of p65 mRNA in prostate cancer cell line was 59 % and the protein was 81%. It's position locates in p65 (NM_021975 ) 1096-1113 and it's stemloop sequence is 5'-GATCCGCCCTATCCCTTTACGTCATTCAAGAGATGACGTAAAGGGATAGGGCTTTTTG-3'. After transfecting, the prostate cancer cell line had the low expression of p65 stably. Through MTT, we got the growth curve, which showed that the growth ability of experimental group was significantly decreased compared with the control group and the Logarithmic growth didn't appear in the first 96 hours. Flow cytometry test displayed that the percentage of G0-G1-phase cells in experimental group was 61.49%, and the control group was 44.89%, idle group was 41.52%, which was increasing oberviously. The S-phase cells in the experimental group was 28.58%, compared with the 47.36% and 46. 10% diminished. The results of transwell showed that the experimental group had 16. 5000±6. 62076 cells and the other two groups had 45. 6333 13. 54159 and 36. 8333±5. 68412 cells, which showed the invasive power of experimental group was significantly declined(P＜0.05).Conclusions It's successful to obtain shRNA sequences that can stably block the expression of p65 in the prostate cancer cell line LNCaP and construct the lentivirus vector. p65 can positively regulates the biological behavior of prostate cancer LNCaP cell line in the cell growth, migration and invasive power.     

肾动静脉畸形的数字减影血管造影术诊断 及栓塞治疗的临床分析

 【目的】 探讨肾动静脉畸形(rAVM)的数字减影血管造影术(DSA)诊断价值及经动脉栓塞治疗(TAE)的方法及其疗效｡【方法】 回顾性分析2004年10月至2009年1月期间我院5例以肉眼血尿为主要表现的rAVM患者的诊断经过以及TAE治疗的效果,术后随访10 ~ 60个月(平均38个月)｡【结果】 患者经DSA检查后均诊断为静脉曲张型rAVM,自发性､无痛性､全程肉眼血尿是此型rAVM的惟一临床表现｡肾动脉DSA能清晰显示rAVM的畸形血管和动静脉瘘,其中1例副肾动脉供血,1例第2次DSA时出现自然消退｡DSA后5例均顺利以PVA和(或)微钢圈行超选择TAE,术后栓塞肾与全肾的体积平均比为(8.51 ± 4.84)%(范围4.52% ~ 18.31%)｡术后肉眼血尿于1 h明显改善,15 ~ 48 h(平均28 h)内消失,随访期间未见血尿复发,无并发症｡【结论】 临床诊断rAVM困难,在所有影像学检查中,肾动脉DSA是诊断rAVM的金标准｡PVA和(或)微钢圈TAE治疗rAVM安全､简单､微创,中远期临床疗效明确｡     

13-MTD通过激活MAPK途径和抑制Akt存活途径诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡

目的： 探讨侧链饱和脂肪酸13-甲基十四烷酸(13-MTD)诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的作用机制。方法：140 mg/L 13-MTD处理体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞和人乳腺正常细胞,采用流式细胞仪检测技术观察13-MTD对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响,免疫印迹法检测13-MTD处理后细胞内c-Jun氨基末端激酶(JNK）,p38, Fas 相关死亡结构域蛋白(FADD)和丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt)等蛋白磷酸化变化。结果：流式细胞仪实验结果显示13-MTD能有效地诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡,但不引起正常人乳腺上皮细胞凋亡。免疫印迹检测显示经13-MTD处理后的人乳腺癌MCF-7细胞JNK和p38磷酸化蛋白明显增加,Akt磷酸化蛋白明显减少。结论：13-MTD是一个新的安全高效抗肿瘤药物,其作用机制可能是通过激活MAPK途径和抑制Akt存活途径来诱导肿瘤细胞凋亡。     

腹腔镜下脐尿管癌根治切除一例报告

患者,男,56岁.因肉眼血尿4 d于2007年3月入院.B超检查见膀胱内多发实质性占位.膀胱镜检输尿管口清楚,膀胱顶部可见2个广基菜花样肿物,大小分别为3 cm×3 cm、2 cm×2 cm,活检病理报告为中分化腺癌.     

PC-3悬浮成球细胞中ABCG2表达及其对化学治疗耐药性的实验研究

目的：探讨人雄激素非依赖性前列腺癌PC-3悬浮成球细胞中ATP结合盒膜转运蛋白G超家族成员2（ABCG2）的表达及其对化学治疗的耐药性。方法：体外无血清悬浮培养PC-3细胞,逆转录定量-PCR检测PC-3悬浮成球细胞中ABCG2 mRNA的表达,采用MTT法检测PC-3悬浮成球细胞对顺铂的耐药性,计算半数抑制浓度（IC50）,并与PC-3贴壁细胞作对比。结果：PC-3悬浮成球细胞可以在无血清培养条件下生存并形成悬浮细胞球,PC-3悬浮成球细胞中ABCG2 mRNA的相对表达水平是PC-3贴壁细胞的33．98倍（P〈0．05）,其IC50是PC-3贴壁细胞的4．26倍（P〈0．05）。结论：人PC-3悬浮成球细胞中ABCG2表达水平较高,该类细胞对化学治疗具有较强耐药性。     

骨髓间充质干细胞在膀胱脱细胞基质上的生长及分化***★

背景：传统方法多采用平滑肌细胞和移行上皮细胞构建组织工程膀胱，并进行支架材料的双面种植，但由于平滑肌细胞取材培养困难，且体外传代有限，双面种植较为困难。 目的：实验拟验证以骨髓间充质干细胞及膀胱脱细胞基质构建组织工程膀胱的可行性。 设计：基础实验研究。 单位：中山大学附属第二医院林百欣医学研究中心。 材料：实验于2006-03/2007-05在中山大学附属第二医院林百欣医学研究中心完成。实验室级别为卫生部部属医院开放实验室。1月龄SD大鼠，雌雄不限，体质量80~ 100g，由中山大学实验动物中心提供。新鲜猪膀胱取自南方医科大学动物实验中心。 方法：采用全骨髓培养连续贴壁法体外培养大鼠骨髓间充质干细胞，并应用流式细胞仪检测其表面抗原。采用去污剂洗涤法制备猪膀胱脱细胞基质，并测定其纯度及特性。将第3代骨髓间充质干细胞接种到膀胱脱细胞基质上，以添加25 ng/L血管内皮生长因子（VEGF165）的培养液进行体外、体内复合培养，检测其相容性。体内实验以细胞单独培养为对照，体外实验以未植入细胞的材料为对照，并模拟合适的微环境诱导骨髓间充质干细胞生长分化，分别在4，8周后取出动物体内的复合材料行组织切片检查，并进行免疫组织化学角蛋白染色，检测上皮细胞再生情况。 主要观察指标：骨髓间充质干细胞与膀胱脱细胞基质的生物相容性。 结果：①采用全骨髓法成功培养出骨髓间充质干细胞，行流式细胞仪检测细胞表面抗原显示，传代第3代细胞CD29阳性细胞为99.43%。②制备的膀胱脱细胞基质具有良好的生物特性，镜下见均质状态的基质和细丝状的胶原纤维。体内外相容性实验表明骨髓间充质干细胞与膀胱脱细胞基质具有良好的相容性，细胞生长状态良好。③4周后组织切片检查可见组织中较多炎症细胞浸润，胶原及弹性纤维排列紧密，免疫组织化学角蛋白染色见有薄层、不连续的单层上皮生长，8周后可见组织中已无明显炎症细胞浸润反应，胶原及弹性纤维排列紧密，免疫组织化学角蛋白染色见有薄层、连续的多层上皮生长。 结论：骨髓间充质干细胞与膀胱脱细胞基质具有良好的生物相容性，并且在体内与周围组织有良好的生物相容性，可以作为构建组织工程膀胱的材料。     

尿路结石成分分析及临床应用研究

目的探讨本地区尿路结石成分构成情况,并根据尿路结石成分构成指导尿路结石的治疗和预防。方法收集江门市中心医院住院和门诊上、下尿路结石标本120例,采用化学显色法对尿路结石中磷酸盐、尿酸盐、草酸盐、碳酸盐、钙、铵、胱氨酸等化学成分进行定性分析。结果本组尿路结石样本中含钙结石最多,占80.8%,含磷酸盐结石次之,占67.5%。单纯性结石占35%,其中草酸钙结石为最多,占69%。感染性结石中以磷酸盐结石最多,占68.7%,含铵结石占61.2%。复发结石含磷酸盐占88.2%,其比例显著高于初发结石。上尿路结石中含钙和磷酸盐结石显著高于下尿路结石,下尿路结石中含尿酸盐结石显著高于上尿路。结论根据结石分析得到的结石化学成分特点,可有针对性地指导临床治疗,并可指导患者从饮食、生活习惯等方面预防尿路结石的发生和复发。