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HCBP12融合蛋白的表达、纯化及多抗制备 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:构建丙型肝炎病毒核心抗原结合蛋白12(HCVCore binding protein,HCBP12)原核表达载体,在大肠埃希菌中进行表达、纯化HCBP12融合蛋白并制备兔抗HCBP12多克隆抗体。方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),以提取的HepG2细胞mRNA为模板,扩增获得HCBP12基因片段,插入至原核表达载体pET-32a(+)中,构建原核表达载体pET-32a(+)-HCBP12,转化大肠埃希菌BL21,以异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导,获得HCBP12融合蛋白的可诱导性表达,并通过SDS-PAGE电泳、Western Blot免疫印迹分析和证实融合蛋白表达的特异性。利用Ni+亲和柱对表达蛋白进行纯化及柱上复性。纯化蛋白免疫新西兰兔,获得抗HCBP12多克隆抗体。以纯化HCBP12为抗原,利用Western blot和ELISA法对多克隆抗体进行特异性和效价检测。结果:HCBP12融合蛋白表达成功。SDS-PAGE分析表明其为包涵体表达。成功获得了融合蛋白纯品及兔抗HCBP12多克隆抗体。ELISA法表明多克隆抗体效价〉1512000,Western blot检测证明多克隆抗体的特异性良好。结论:成功表达、纯化HCBP12融合蛋白,并获得高特异性、高效价兔抗HCBP12多克隆抗体,为研究HCBP12蛋白的生物学功能及丙肝的临床治疗提供了重要的实验工具。 相似文献
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茶色素体外抗氧化作用研究 总被引:3,自引:0,他引:3
目的研究茶色素(TP)体外抗氧化作用。方法通过邻苯三酚自氧化和抗体外氢氧根法分别测定TP与阳性对照药维生素C的抗氧化作用,比较两者作用程度。结果0.1%,0.2%,0.3%TP对邻苯三酚自氧化平均抑制率分别为每分钟7.022%,13.427%,16.910%;0.1%,0.2%维生素C分别为16.340%,32.850%。TP与维生素C对邻苯三酚自氧化平均抑制率呈剂量依赖式增加。0.1%,0.3%,0.5%,0.7%,1.0%TP对体外羟自由基(8226;OH)生成的平均抑制率分别为(11.00±0.70)%,(20.68±0.60)%,(27.04±0.07)%,(32.70±0.30)%,(42.90±0.70)%;0.1%,0.3%,0.5%,0.7%,1.0%维生素C对体外8226;OH生成的平均抑制率分别为(4.50±0.30)%,(7.40±1.00)%,(11.42±0.23)%,(14.80±0.40)%,(16.80±0.60)%。TP和维生素C对体外8226;OH生成抑制率均呈剂量依赖性增加。TP和维生素C对体外8226;OH生成均有一定抑制作用,TP抑制作用较维生素C显著。相同剂量维生素C 和TP抑制作用差异有统计学意义(P<0.01);不同剂量TP对体外8226;OH生成的抑制作用差异有统计学意义(P<0.05)。结论TP体外具有抗氧化作用,尤其是在体外抗氢氧根作用方面。 相似文献
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目的探讨中药莪术(Curcumna Rhizoma)水提液对大鼠离体十二指肠平滑肌收缩运动的影响,并初步探索其作用机制。方法制作大鼠离体十二指肠标本,用恒温灌流的方法,使用BL-420生物机能实验系统观察不同浓度莪术对大鼠离体十二指肠平滑肌的收缩效应。选适当终浓度莪术分别与阿托品、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素、维拉帕米共同孵育,观察莪术对它们引起平滑肌收缩作用的影响;制作不同浓度新斯的明肠管收缩作用的量效曲线,与莪术组进行对比,初步探讨其可能的作用机制,并作胆碱酯酶活性测定辅助证明是否与新斯的明作用机制相似。结果莪术可以对大鼠离体十二指肠的收缩有兴奋作用,呈剂量依赖性;莪术可以部分被M受体阻断药阿托品阻断、β受体激动药异丙肾上腺素和钙通道阻滞剂维拉帕米对肠管收缩的抑制作用;对α受体激动药去甲肾上腺素无影响;与乙酰胆碱酯酶抑制剂新斯的明的作用相似。结论莪术明显促进大鼠离体十二指肠平滑肌收缩作用,呈剂量依赖性。其作用机制可能是通过抑制胆碱酯酶,与M受体介导有关,同时还可能与抑制α和β受体有关。 相似文献
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目的克隆乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白反式调节的靶基因11(XTP11),获得未知功能的新基因-XTP11剪切体,对其进行生物信息学分析,探讨其结构和功能。方法从肝母细胞瘤细胞系HepG2中提取总RNA,逆转录为cDNA后,设计特异性引物克隆XTP11剪切体,生物信息学技术获得编码序列、物理化学性质、蛋白质结构和功能等基本信息。结果成功扩增出XTP11剪切体基因,生物信息学分析推定ORF为1 314个核苷酸,编码产物为437个氨基酸残基。结论此文发现并鉴定了HBV XTP11剪切体,为阐明其在HBV X蛋白致病机制中的作用提供新的研究线索。 相似文献
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林原 《广西中医学院学报》2011,14(2):104-105
针灸学在整个中医高职护理专业的教学计划中,课时短,考试比重低,但针灸学的知识点是中医理论的重要组成部分,尤其是针刺、艾灸、火罐等基本技能更是中医的特色。如何让学生在有限的课时内较好地掌握针灸学的基本知识理论和技能是中医高职护理专业针灸学教学改革的目标。笔者多年来进行了一些教学改革探索,现谈以下几点体会。 相似文献
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目的:探讨肝脏上皮样血管平滑肌脂肪瘤(hepatic epitheliod angiomyolipoma,HEAML)的临床病理学特点、免疫表型、诊断和鉴别诊断.方法:对5例 HEAML 进行组织学观察及免疫组织化学检测.结果:5例HEAML均为女性,中位年龄44.2岁,3例位于肝左叶,2例位于肝右叶,肿瘤大小2~12 cm.患者无明显临床症状.镜下见肿瘤主要由上皮样细胞构成,弥漫、梁索状或器官样排列,细胞形态呈不同程度的异型性,胞质丰富,嗜酸或透明状,并可见多核或奇异形核细胞.免疫组化示HMB45、Melan-A、Actin和s-100均有阳性表达.结论:肝脏的上皮样平滑肌脂肪瘤是一种恶性潜能未定的肿瘤,其形态学表现较为多样,应与肝脏的其他肿瘤相鉴别,免疫组化对鉴别具有重要意义. 相似文献