3种头孢丙烯制剂在健康人体的药代动力学及生物等效性

目的 比较3种国产头孢丙烯制剂(第2代头孢类抗生素)在健康人体内的药代动力学,并评价3种制剂的生物等效性.方法 21名健康志愿者三交叉单剂量口服头孢丙烯片、干混悬剂和对照头孢丙烯片500 mg后,用HPLC-UV法测定血药浓度,计算其药代力学参数及评价3者生物等效性.结果 头孢丙烯片、干混悬剂和头孢丙烯片对照品的主要药代动力学参数AUC0-9分别为(21.12±2.33)、(21.38±2.60)和(21.68±2.34)μg·h·mL-1;AUC0-∞分别为(21.41±2.36)、(21.63±2.66)和(21.94±2.36)μg·h·mL-1;Cmax分别为(6.82±1.01)、(7.06±0.95)和(7.11±1.14)μg·mL-1;tmax分别为(1.71±0.46)、(1.45±0.38)和(1.64±0.36)h;t1/2分别为(1.23±0.12)、(1.25±0.16)和(1.21±0.13)h;MRT分别为(2.82±0.35)、(2.55±0.15)和(2.77±0.32)h;CL/F分别为(11.82±0.32)、(11.72±1.40)和(11.52±1.20)L·h-1.由AUC0-9、AUC0-∞估算的受试制剂的相对生物利用度分别为(98.2±13.3)%、(98.4±13.5)%及(99.2±12.4)%、(99.1±12.2)%.结论 头孢丙烯片、于混悬剂和头孢丙烯片对照品3种制剂生物等效.     

两质粒系统重配甲型H1N1流感病毒株的研究

目的构建两质粒冷适应流感病毒拯救系统,提高流感病毒的重配效率。方法本研究通过构建克隆载体pfastbac△plh HTB,将流感病毒A/Ann Arbor/6/60(H2N2)6个内部基因(PB2、PB1、PA、NP、M、NS)的双向转录表达元件定向克隆入此载体,获得pfastbac△plh HTBP6。同时将流感病毒A/California/7/2009(H1N1)表面基因(HA、NA)双向转录表达元件定向克隆入p ENTR-1A质粒,获得p ENTR-1AP2。将2个重组质粒共转染MDCK/COSI细胞,细胞上清接种10日龄SPF鸡胚,收取尿囊液,血凝实验筛选阳性株,并进行全面鉴定。结果本研究利用两质粒系统成功重配甲型H1N1流感病毒株,命名为TRG A/California/07/2009(H1N1)Vca,重配病毒株传代后HA效价为2~8,形态符合流感病毒典型特征,大小80~120 nm,具有冷适应、温度敏感表型。结论两质粒流感病毒拯救系统为高效重配流感疫苗株提供了新策略。     

lncRNA XLOC006926抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的研究

目的探讨lnc RNA XLOC006926调控肝癌细胞增殖和转移机制,结合肝癌患者临床病理特征,分析其临床意义。方法利用实时荧光定量PCR方法检测lnc RNA XLOC006926在肝癌细胞系及肝癌患者配对(癌、癌旁)组织(n=88)中的表达水平。进一步通过CCK-8、克隆形成、划痕及transwell实验检测过表达或抑制lnc RNA XLOC006926对细胞增殖、迁移和侵袭的影响,同时结合临床信息统计分析其与临床病理特征及患者预后的相关性。结果 lnc RNA XLOC006926在肝癌细胞及肝癌组织中的表达显著降低,过表达lnc RNA XLOC006926后肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力降低,相反抑制lnc RNA XLOC006926后肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力增强。结合患者临床信息分析,lnc RNA XLOC006926的表达量与肿瘤大小(P=0.007)、PVTT(P=0.024)具有显著相关性,其低表达预示着预后较差。结论 lnc RNA XLOC006926在肝癌发生发展中发挥了重要作用,参与调节肝癌细胞的增殖及迁移,有望成为肝癌发生发展的生物标志物和肝癌预防治疗的新靶点。     

嵌合人源CTLA4抗体的重组流感病毒选择性杀伤肝癌细胞的研究

目的 拯救嵌合人源免疫检查点细胞毒性T淋巴细胞（huCTLA4）抗体的重组流感病毒株,对其选择性杀伤肝癌细胞的效果进行全面鉴定并评价。方法 通过反向遗传学（reverse genetics,RG）技术,以A/PuertoRico/8/34(PR8)为载体,将编码人源CTLA4(huCTLA4)抗体重链和轻链的基因分别插入到PR8病毒的PB1和PA基因片段,构建重组质粒pFlu-huCTLA4-PB1、p Flu-huCTLA4-PA,与PR8病毒的剩余6个骨架质粒p HW191-PB2、pHW194-HA、pHW195-NP、pHW196-NA、pHW197-M、pHW198-NS共转染COSⅠ和MDCK细胞,经病毒拯救、筛选、鉴定获得重组溶瘤病毒,命名为r Flu-huCTLA4。进一步通过血凝、TCID50测定重组流感病毒滴度;电镜观察病毒形态及大小分布;ELISA法测定huCTLA4抗体含量;结晶紫、MTS方法测定重组病毒对肝癌细胞的选择性杀伤效果;流式细胞术检测重组病毒诱导肝癌细胞死亡方式。利用人源肿瘤异种移植模型肝癌小鼠模型,评价rFlu-huCTLA4在动物体内抗肿瘤作用。...     

甲型H1N1流感病毒样颗粒疫苗的初步研究

目的对甲型H1N1病毒样颗粒的免疫原性和保护效果进行初步研究,为研发不依赖鸡胚生产工艺的流感疫苗提供新的思路。方法使用昆虫-杆状病毒表达系统表达并纯化甲型H1N1流感病毒A/California/07/2009(H1N1)的病毒样颗粒;通过Western blot、血凝、单向免疫扩散,透射电镜等方法鉴定病毒样颗粒;使用A/California/07/2009(H1N1)裂解疫苗作为对照,腹腔注射免疫Balb/c小鼠,并使用A/Beijing/501/2009(H1N1)进行攻毒,评价病毒样颗粒疫苗的免疫原性及保护效果。结果经鉴定,纯化后的病毒样颗粒血凝滴度为1:512,HA含量为92.9μg/ml,颗粒大小在100 nm左右,二免10 d后IgG抗体效价7.9×103,血凝抑制实验测得血抑(Hemagglutination Inhibition,HI)效价384,对50LD50的A/Beijing/501/2009(H1N1)病毒的保护率达到100%。结论甲型H1N1流感病毒样颗粒的免疫原性显著高于裂解疫苗,为发展不依赖鸡胚生产的流感亚单位疫苗提供了技术保证。     

胶体金免疫层析试纸条快速检测乙型流感病毒

目的建立有效、简便的胶体金免疫层析试纸条快速检测乙型流感病毒感染的方法。方法通过对乙型流感病毒核蛋白单克隆抗体进行胶体金标记,成功研制了乙型流感病毒免疫层析检测试纸条。结果该试纸条操作简单,肉眼于10～15 min内判定结果,对乙型流感病毒具有高度特异性,与甲型H1N1、H3N2亚型流感病毒等其他重要呼吸道病毒无交叉反应。试纸条在室温保存12个月、2～8℃保存18个月,其特异性和灵敏度无明显变化。对从内蒙自治区医院收集的流感样症状病人的702份鼻咽部分泌物进行检测,与美国Quidel公司同类产品的符合率为95%。结论建立的乙型流感病毒免疫层析检测方法具有简便、快速、特异、敏感和稳定等特点,对乙型流感病毒感染疾病的临床检测与早期诊断具有重要意义。     

用反向遗传技术产生冷适应致弱的重组A型人流感病毒的研究

目的 以鸡胚高度适应株A/PR/8/34株为重组流感病毒骨架,利用反向遗传技术拯救冷适应致弱的重组A型人流感病毒.方法 对冷适应、温度敏感、减毒的A/Ann Arbor/6/60(H2N2)流感病毒株的PB2基因片段,进行了全基因序列合成,同时人工引入PB2265(N265S)氨基酸的突变.PB2基因片段通过与改造后的转录/表达载体pAD3000连接,构建PB2基因的拯救载体.该重组质粒与PR8进行"7 1"组合的病毒拯救,共转染COS-1细胞.结果 经测序获得序列准确的拯救质粒pMDV-A-PB2,利用反向遗传技术成功拯救出了具有血凝性(1×25)的冷适应的重组A型流感病毒.结论 利用反向遗传技术成功拯救冷适应致弱的重组A型人流感病毒,该系统为深入研究甲型人流感病毒的基因功能和新型疫苗研发奠定了基础.     

肝脏肿瘤标本资源库的建立、维护及管理

目的 探讨建立以肝癌组织样本为主的肝脏外科生物样本库及相关数据信息化管理的方法和标准化操作规程,为临床与基础研究提供高质量的临床标本资源平台。方法 收集肝脏肿瘤手术患者的血液标本（血清、血浆、白细胞）、组织标本(癌、癌旁、远端正常组织),将处理好的血液标本于-80℃冰箱保存,新鲜组织置液氮保存,定期随机抽取液氮保存的肿瘤组织样本进行RNA、DNA的提取及鉴定。结果 现收集并保存有完整临床信息及随访资料的肝脏肿瘤患者血液标本22103份,组织标本3319例,其中肝脏肿瘤组织标本807例,包括肝脏恶性肿瘤762例,良性肿瘤23例,肝硬化组织22例。随机抽取组织RNA、DNA鉴定均符合标本质量标准,能够满足后续实验要求。结论 初步建立标准化、规范化的肝脏肿瘤标本库,制定了标准化的标本库维护和管理规程,为肝脏肿瘤基础和临床研究提供了宝贵的实验材料。     

从cDNA感染性克隆产生冷适应重配A型人流感病毒及免疫原性的初步研究

目的 从cDNA感染性克隆产生冷适应重配A型人流感病毒株,并对其生物学特性和免疫原性进行初步测定.方法 采用RT-PCR技术,分别扩增2006至2007年疫苗株A/New Caledonia/20/99的HA、NA全长基因片段,构建转录表达双向载体pNDV-A-HA、pMDV-A-NA,将这2个质粒与冷适应拯救系统的6个质粒共转染COS-1细胞,并对拯救的重配病毒的生物学特性和免疫原性进行初步鉴定.结果 拯救出具有冷适应表型和温度敏感型的A型人流感弱毒株,初步测定了重配病毒的生物学特性和免疫原性.结论 成功拯救具有冷适应和温度敏感表型的A型人流感弱毒株,并初步测定其免疫原性,为我国弱毒疫苗株的拯救和弱毒疫苗的发展奠定了基础.     

呼吸道合胞病毒的分离鉴定及其致病力的初步评价

目的分离鉴定临床呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV),评价其致病力,为疫苗评价及致病机制的研究提供实验材料。方法收集临床呼吸道感染重症患儿的鼻咽分泌物样本进行RT-PCR初步鉴定,通过病毒培养,空斑纯化,电镜观察及病毒滴度测定,筛选出1株呼吸道合胞病毒候选株,经全基因组测序后命名为BJ016。选用14日龄C57乳鼠,每组26只,采用BJ016为实验组,PBS为对照组,分别对小鼠滴鼻感染,30μl/只。连续14日监测2组小鼠体质量变化及死亡率,肺组织的病毒载量、湿干比,HE染色观察肺病理变化并计数炎性细胞总量,同时采用CBA测定血清中细胞因子的变化。结果 100份临床呼吸道感染重症患儿鼻咽分泌物样本中,RT-PCR鉴定为RSV A亚型阳性共21例,经病毒分离培养、空斑纯化、电镜观察及RT-PCR鉴定后得到16株RSV临床分离株,通过TCID50测定病毒滴度筛选出1株滴度为106.5TCID50/ml的候选株,基因组序列分析显示其为NA1基因型,命名为BJ016。BJ016感染14日龄C57乳鼠后造成肺损伤,在第5日达到发病高峰时测定病载、湿干比、病理检测并计数炎性细胞,实验组较对照组具有明显统计学差异,血清中MCP-1、IL-6、G-CSF及MIP-1α均显著性升高。结论成功分离出1株能致死14日龄C57乳鼠的RSV病毒株并初步评价了其致病力,为疫苗评价及RSV致病机制的研究提供了良好的实验材料。