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目的 采用新的基因免疫方法制备小鼠抗人有机阴离子转运蛋白3(anti-human organicanion transporter 3,hOAT3)多克隆抗体,并用该抗体对hOAT3在人肾小管上皮细胞的表达进行定位研究.方法 应用Accelrys软件分析hOAT3抗原表位,选择其细胞内表位,用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法从人肾组织RNA中扩增其261 bp的cDNA序列,克隆到pBQAP-TT构建基因免疫载体,与辅助载体pCMVi-GMCSF和pCMVi-FIT3L同时免疫小鼠,5周后获得血清抗体,人肾组织Western blot和免疫组化鉴定抗体的特异性和定位表达.结果 成功构建基因免疫载体pBQAP-TT-hOAT3,序列分析鉴定正确,ELISA方法测得抗体滴度高达1∶3 000,该抗体识别人肾皮质膜蛋白62×103的hOAT3,人肾组织免疫组化提示该抗体识别定位在肾小管上皮细胞基底膜.结论 成功用基因免疫方法制备高效特异性抗hOAT3多克隆抗体,为今后的生理病理研究奠定基础. 相似文献
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人cubilin蛋白功能片段原核表达系统的建立 总被引:1,自引:1,他引:0
目的构建编码白蛋白吞饮受体人cubilin(hcubilin)蛋白配体结合域CUB7-8基因片段的原核表达载体,诱导表达并鉴定表达产物.方法重组DNA技术构建原核表达载体pGEX-hCUB7-8,IPTG诱导表达,SDS-PAGE与免疫印迹法鉴定表达产物,Pull down实验验证融合蛋白是否与白蛋白结合.结果双酶切和测序鉴定表明CUB7-8片段插入正确,诱导表达后获得分子量为52×103的融合蛋白,该融合蛋白可以被抗GST抗体识别,并且可以和白蛋白结合.结论CUB7-8基因片段编码的蛋白质能在原核细胞中正确表达,并且可以和白蛋白结合,这为进一步研究该功能域的结构与功能奠定了基础. 相似文献
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Cubilin是属于低密度脂蛋白(LDL)受体超家族成员的吞饮受体,广泛分布于体内多种组织上皮细胞。大量研究表明,Cubilin参与多种生物代谢产物的跨细胞转运,与生命的正常生存发育有着密不可分的关系。在肾脏,Cubilin主要分布在近端肾小管上皮细胞的刷状缘侧,司近端肾小管对白蛋白、球蛋白、转铁蛋白等多种尿蛋白成分的重吸收。 相似文献
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目的 研究腹膜透析患者腹膜炎发生危险因素,以此定位高危人群,为临床个体化干预治疗提供指导.方法 收集单中心维持性腹膜透析患者266例,以是否发生腹膜炎分为腹膜炎组和对照组.采用单因素和Logistic回归分析腹膜透析相关腹膜炎发生的操作及非操作危险因素,ROC曲线确定其最佳预测值.结果 腹膜炎组总体文化程度、透析龄显著低于对照组;而体质量指数、腹膜透析操作总误评分显著高于对照组.腹膜炎组在随访时血红蛋白及血浆白蛋白显著低于对照组,时间平均血浆白蛋白亦显著低于对照组.Logistic回归分析显示,随访血浆白蛋白<28.95g/L、随访前白蛋白<280.95 mg/L、时间平均血浆白蛋白<29.78 g,/L、透析龄<14.50个月,以及腹膜透析操作总误评分≥19.50分为腹膜透析相关腹膜炎发生的危险因素.结论 低白蛋白血症、较短透析龄,以及腹膜透析操作错误为腹膜透析相关腹膜炎发生的危险因素.临床可针对相关高危人群进行个体化干预,从而降低腹膜透析相关腹膜炎发生率,改善患者生活质量和预后. 相似文献
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目的探讨经肾动脉灌注腺病毒载体介导Cubilin反义RNA对肾小管超负荷重吸收白蛋白的抑制作用。方法建立大鼠阿霉素肾病模型,正义RNA组和反义RNA组分别经肾动脉缓慢灌注GFP基因标记的pAdEasy-Cub和pAdEasy-ACub,对照组和模型组灌注等量生理盐水。激光共聚焦显微镜下观察GFP的表达,并监测24h尿蛋白量及其他生化指标;光镜下观察肾小管间质病理变化;免疫组化法观察肾小管Cubilin基因的表达以及肾小管上皮细胞内白蛋白的沉积。结果转染第4天,正、反义RNA组肾脏GFP基因有较强表达,11d达到高峰,可持续至实验结束;反义RNA组与其他各组相比,24h尿蛋白量明显增高(P〈0.01),小管间质病变轻微,Cubilin阳性表达率最低,且与白蛋白的沉积呈显著正相关(r=0.896,P〈0.01)。结论经肾动脉途径灌注重组腺病毒,能器官靶向性表达外源基因;Cubilin反义RNA对肾小管超负荷重吸收白蛋白有明显的抑制作用,并可以有效地减轻蛋白尿引起的肾间质损伤。 相似文献
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谭微田恩李丽娜孙岩杨聚荣 《中国中西医结合肾病杂志》2022,(3):208-211
目的:观察环硅酸锆钠散治疗血液透析患者高钾血症的临床疗效和安全性.方法:回顾性分析2020年11月—2021年01月于重庆医科大学附属第三医院维持性血液透析慢性高钾血症并服用环硅酸锆钠散的患者临床资料,分析治疗效果.结果:共纳入20例患者,男13例,女7例,平均年龄(54.25±14.73)岁,透析龄30.19(15.... 相似文献
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目的 研究内皮素 1(Endothelin 1,ET 1)、基质金属蛋白酶 3 (Matrixmetalloprotevnase 3 ,MMP 3 )、金属蛋白酶组织抑制剂 1(Tissueinhibitorofmelalloproteinase ,TIMP 1)在人肾小球中的表达变化及意义。方法 应用免疫组化技术检测3 2例原发性系膜增生性肾炎患者及 5例对照组肾小球中ET 1、MMP 3、TIMP 1、LN蛋白的表达。结果 在中、重度系膜增生性肾炎患者的肾小球中 ,ET 1、MMP 3、TIMP 1、LN蛋白表达增强 ,MMP 3 /TIMP 1比值下降 (P <0 0 5 ,P <0 0 1) ;ET 1的表达与MMP 3 /TIMP 1比值负相关 (r =-0 70 3 ,P <0 0 1) ,与LN表达正相关 (r =0 880 ,P <0 0 1) ;MMP 3 /TIMP 1比值与LN表达负相关 (r=-0 62 3 ,P <0 0 1)。结论 ET 1可能是肾小球MMP 3 /TIMP 1下降的原因之一 ,这与肾小球细胞外基质 (Exlracellularmatrix ,ECM)降解受抑密切相关。 相似文献
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