Gasdermin家族蛋白在缺血再灌注损伤大鼠肾组织中的表达变化

目的研究gasdermin家族蛋白在缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤大鼠肾组织中的表达变化,并探讨该家族各蛋白与急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)的关系。方法 20只Sprague Dawley(SD)雄性成年大鼠随机分为假手术组与I/R组(n=10),分别给予假手术或肾脏缺血再灌注处理后,采集血液及肾组织标本;自动分析仪检测各大鼠血清肌酐、血清尿素氮水平,肾组织PAS染色评估损伤程度;蛋白印迹法检测肾组织中炎症因子interleukin(IL)-1β和interleukin(IL)-18、炎性半胱氨酸蛋白酶caspase-1和caspase-11的前体及活性体、gasdermin家族蛋白(GSDMA、GSDMB、GSDMC、GSDMD、DFNA5、DFNB59)前体及N端的表达水平。结果与假手术组比较,I/R组大鼠血清肌酐、血清尿素氮水平及肾小管损伤评分均显著增加(P0.000 1);肾组织中IL-1β、IL-18,caspase-1前体及活性体、caspase-11前体及活性体、GSDMD前体及N端表达水平均显著增加(P0.000 1、P0.001或P0.05),且GSDMD表达变化与肾功能损害程度、炎症因子表达变化呈显著正相关(P0.01),而GSDMA、GSDMB、GSDMC、DFNA5、DFNB59各蛋白前体及N端表达水平均无明显变化(P0.05)。结论 GSDMD蛋白前体及N端在缺血再灌注损伤大鼠肾组织中表达上调,而GSDMA、GSDMB、GSDMC、DFNA5、DFNB59前体及N端表达无明显差异,提示GSDMD蛋白可能是gasdermin家族中唯一介导AKI肾脏焦亡的成员,其他成员可能并不参与该病理生理过程。     

hNaDC1基因5''''侧翼区转录调控序列系列载体构建与鉴定

目的构建hNaDC1基因5’侧翼区转录调控序列系列萤火虫荧光素酶报告基因表达载体。方法PCR扩增获得hNaDC1基因5’侧翼转录调控区不同长度片段:hNaDC1A(-2232/ 136,2368bp)、hNaDC1B(-1640/ 136,1776bp)、hNaDC1C(-1084/ 136,1221bp)、hNaDC1D(-253/ 136,389bp)、hNaDC1E(-2232/-12,2244bp),以pGL3-Basic为载体构建hNaDC1基因5’侧翼序列系列缺失质粒。重组体通过特异限制性内切酶酶切鉴定,并送样测序鉴定。结果成功构建hNaDC1基因5’侧翼区转录调控元件萤火虫荧光素酶报告基因表达载体5个:pGL3-hNaDC1A～E。结论为进一步研究NaDC1基因5’侧翼区转录调控元件的分布特点及转录调控元件与转录因子间的相互作用提供了基本实验条件。     

马兜铃酸和缺血再灌注所致急性肾损伤后慢性肾脏病小鼠模型的比较

目的 观察马兜铃酸和缺血再灌注所致急性肾损伤(AKI)后慢性肾脏病(CKD)动物模型的差异.方法 BALB/c小鼠分为马兜铃酸损伤(AAI)组、AAI对照组、缺血再灌注损伤(IRI)组、IRI对照组,AAI组以5 mg/kg剂量腹腔内注射马兜铃酸,AAI对照组腹腔注射等量生理盐水;IRI组予37℃双侧肾动脉夹闭缺血32 min,IRI对照组予假手术;于给药或再灌注后1、3、7、14、28、42 d收集标本.观察不同时间点各组小鼠的死亡情况及体重,自动分析法检测各小鼠血清肌酐、血清尿素氮水平,肾组织PA S染色评估肾损伤程度,Masson染色评估肾脏纤维化情况.结果 IRI组死亡率显著高于AAI组(P<0.05);AAI组小鼠体重下降更显著(P<0.05);IRI和AAI组小鼠血肌酐、尿素水平均高于对照组(P<0.05);IRI组术后第1天肾损伤最重,AAI组第7天肾损伤最重,至造模后42 d部分肾小管仍无完整结构;与对照组比较,造模后14 d IRI和AAI组均开始出现纤维化,AAI组纤维化阳性面积多于IRI组(P<0.05).结论 AAI和IRI均可成功构建小鼠AKI-CKD模型,但AAI模型更简单、稳定.     

连续性静脉-静脉血液滤过治疗尿毒症脑病30例疗效分析

目的 观察连续性静脉-静脉血液滤过(CVVH)治疗尿毒症脑病的作用.方法 30例尿毒症脑病患者采用CVVH进行1～4次(每次12h)治疗.在CVVH治疗初始及治疗后6、12h收集血及滤液标本测定血常规、肾功能、血生化、电解质等.用ELISA法测定血浆及滤液中β2-微球蛋白(β2-MG)浓度.结果 治愈26例(87%),好转3例(10%),无效1例(3%).治疗前平均血浆β2-MG浓度为(42.8±6.2)mg/L,治疗12 h后平均血浆β2-MG浓度为(26.7±3.7)mg/L,较治疗前差异有统计学意义(P＜0.05);在治疗后各观察点滤液中均能测及β2-MG,滤液中β2-MG水平与血浆β2-MG浓度呈负相关(r=-0.671,P＜0.01).CVVH治疗前后患者平均动脉压、心率、血浆渗透压无明显变化(P＞0.05),血钾和肾功能较治疗前好转(P＜0.05).结论 CVVH治疗可改善尿毒症脑病.     

肠道微生态与终末期肾病患者腹膜透析相关性腹膜炎发生的关系

目的 探讨肠道微生态与终末期肾病患者腹膜透析相关性腹膜炎发生的关系。方法 选取重庆三峡医药高等专科学校附属中医院2017年5月-2020年5月102例接受腹膜透析的终末期肾病患者作为研究组,另选取同期本院60名健康体检者作为对照组,研究组根据是否发生腹膜透析相关性腹膜炎分为腹膜炎组（n=35）和非腹膜炎组（n=67）,根据肠道菌群紊乱情况分为Ⅰ度肠道菌群紊乱组（n=12）、Ⅱ度肠道菌群紊乱组（n=38）、Ⅲ度肠道菌群紊乱组（n=52）。比较研究组和对照组肠道菌群分布情况,比较不同肠道菌群紊乱组腹膜透析相关性腹膜炎发生情况,比较腹膜炎组和非腹膜炎组肠道菌群分布情况,采用受试者工作特征（ROC）曲线分析肠道微生态对终末期肾病患者发生腹膜透析相关性腹膜炎的预测价值。结果 研究组肠道幽门螺杆菌、大肠埃希菌、链球菌数量均高于对照组[（9.93±1.69）vs.(6.15±0.76)、（8.85±2.06）vs.(5.34±1.01)、（8.07±1.58）vs.(3.52±0.84)],乳杆菌、双歧杆菌数量均低于对照组[（1.81±0.46）vs.(5.75±1.54)、（3.01±0.85）v...     

纤维样肾小球病合并慢性淋巴细胞白血病一例

<正>纤维样肾小球病(fibrillary glomerulopathy,FGP)是肾小球内存在类似淀粉样纤维物质或呈丝状结构的纤维样物质,对淀粉样蛋白质的特殊染色阴性,FGP是一种较为少见的肾小球疾病,占肾活检病例的0.6~1%[1-2],一般不伴有系统性疾病的一类肾小球疾病。近年发现少数纤维样肾小球病例     

不同钙浓度腹膜透析液对长期CAPD患者矿物质和骨代谢影响的分析

目的观察腹膜透析液钙离子浓度对持续性不卧床腹膜透析(CAPD)患者矿物质和骨代谢的影响。 方法回顾性分析我院腹膜透析中心行CAPD治疗2年以上的123例患者,根据腹膜透析液钙离子浓度分为低钙腹膜透析液组(LCD组,钙离子浓度为1.25 mmol/L)和标准钙腹膜透析液组(SCD组,钙离子浓度为1.75 mmol/L),观察不同钙浓度腹膜透析液对患者血清钙、磷、全段甲状旁腺激素(iPTH)、颈动脉厚度、心脏瓣膜钙化及骨痛、皮肤瘙痒等情况的影响。使用SPSS 18.0统计软件包进行数据处理。 结果2组患者治疗前人口学特征、腹膜转运特性、钙磷代谢等指标的基线水平差异无统计学意义(P>0.05)。治疗2年后,2组患者血钙浓度及达标率较治疗前均显著增高(P<0.05),SCD组血钙浓度增幅高于LCD组,但差异无统计学意义(0.26±0.31 mmol/L与0.17±0.29 mmol/L, t＝1.621,P＝0.108);2组间治疗后血清钙、磷、iPTH平均水平及其达标率、颈动脉厚度、心脏瓣膜钙化比例、骨痛及皮肤瘙痒累计发生率差异均无统计学意义(P>0.05);LCD组活性维生素D使用比例显著高于SCD组(χ² ＝6.373,P<0.05)。 结论采用低钙与标准钙腹透液治疗2年,对CAPD患者矿物质和骨代谢的影响无显著性差异。     

miR-34a调控HEK293细胞自噬作用的初步研究

目的探讨miR-34a对HEK293细胞自噬作用的影响。方法采用miR-34a模拟物(模拟物组)和miR-34a抑制剂(抑制剂组)分别转染HEK293细胞,并设空白对照(对照组)。采用定量PCR检测miR-34a、p53基因表达的变化,Western blotting检测自噬相关蛋白LC3Ⅱ及p53表达的变化,并采用生物信息学方法分析miR-34a对自噬相关基因(Atg6/beclin1、sestrin2、FoxO3等)的可能作用。结果定量PCR结果显示,模拟物组miR-34a表达显著上调(P<0.05),抑制剂组miR-34a表达显著下调(P<0.05)。与对照组相比,miR-34a模拟物可显著抑制HEK293细胞LC3Ⅱ蛋白的表达(P<0.05),而miR-34a抑制剂则显著上调HEK293细胞LC3Ⅱ蛋白的表达(P<0.05)。定量PCR和Western blotting结果显示,各组p53mRNA及蛋白表达无统计学差异。生物信息学分析显示,Atg6/beclin1、sestrin2、FoxO3等自噬相关基因是miR-34a潜在的靶基因。结论miR-34a能抑制HEK293的自噬作用,可能是通过直接抑制...     

钠离子依赖性二羧酸转运蛋白研究进展

钠离子依赖性二羧酸转运蛋白(NaDCs)是一类负责三羧酸循环中间代谢产物跨细胞膜转运的有机阴离子转运蛋白家族,主要分布在小肠、肾脏等组织,负责从细胞外转运琥珀酸、α-酮戊二酸、枸橼酸等多种三羧酸循环中间产物到细胞内,对维系血和尿液中二羧酸的浓度具有重要作用。新近研究     

人cubilin蛋白与其配体白蛋白结合特定结构域的预测

目的 同源模建cub8功能域的三维模型,并以计算机辅助的分子对接方法预测cub8功能域与白蛋白的候选结合氨基酸残基.方法 采用insightⅡ工作站对cub8蛋白进行同源模建,对cub8蛋白和白蛋白进行分子对接,寻找白蛋白和cub8的候选结合氨基酸残基.结果 cub8蛋白三维结构为两个反平行的β片层结构,中间以β转角相连.cub8蛋白片段与白蛋白通过正负电势的吸引完成受体与配体的结合.Asp59-Tyr60-Leu61-Glu62-Leu-Tyr64和Arg72-Tyr73肽段可能是cubilin与白蛋白结合的关键氨基酸残基.结论 利用计算机辅助的分子对接技术,获得cub8和白蛋白相互作用的两个候选结合域,为进一步研究cubilin与白蛋白相互作用奠定基础.