慢性酒精中毒大鼠腺垂体分泌细胞形态学改变的电镜观察

选用 Wistar大鼠分实验组和对照组。实验组饮用 2 0 %医用酒精 ,对照组正常饮水。分别于喂养 3个月、6个月和 18个月时断头处死动物 ,取脑垂体入 2 .5 %戊二醛磷酸缓冲液固定 ,1%锇酸后固定。丙酮逐级脱水 ,Epon812包埋 ,L KB超薄切片机 40～ 5 0 nm厚切片。透射电子显微镜观察 ,比较了腺垂体生长激素细胞、促性腺激素细胞、促肾上腺皮质激素细胞和催乳激素细胞在洒清中毒组的形态学变化。结果显示洒精中毒组上述内分泌细胞的细胞间隙变宽 ,细胞核固缩 ,核周隙增大。内质网扩张明显 ,局部成池。细胞内颗粒电子密度减低或深浅不一。生长激…     

髓系特异性Abro1基因敲除小鼠构建和表型初步分析北大核心CSCD

目的:构建髓系特异性Abro1(Abraxas brother 1)基因敲除小鼠,并初步分析其对小鼠造血系统及LPS诱导败血症的影响。方法:采用CRISPR/Cas9基因编辑技术和Cre/LoxP重组系统构建Abro1^(flox/+)小鼠,将Abro1^(flox/+)雌雄小鼠自交,子代得到Abro1^(flox/flox)基因型小鼠。Abro1^(flox/flox)与Lyz2-Cre^(+)小鼠交配,子代得到Abro1^(flox/+)/Lyz2-Cre^(+)小鼠,再将其与Abro1^(flox/flox)交配,最终得到的Abro1^(flox/flox)/Lyz2-Cre^(+)小鼠为髓系特异性Abro1基因敲除小鼠,即MKO小鼠;Abro1^(flox/flox)/Lyz2-Cre^(−)小鼠作为野生型小鼠,即WT小鼠。提取WT和MKO小鼠尾基因组DNA,PCR扩增后琼脂糖凝胶电泳鉴定其基因型。提取WT和MKO小鼠免疫细胞蛋白,Western blot检测ABRO1蛋白表达。流式细胞术分析小鼠骨髓和外周血免疫细胞组成,检测MKO小鼠对造血系统的影响。LPS处理WT和MKO小鼠3 h,检测血清中相关生化指标变化以及炎症因子分泌情况。结果:PCR和Western blot结果显示髓系特异性Abro1基因敲除小鼠构建成功。流式细胞术结果显示WT和MKO小鼠骨髓和外周血中髓系细胞(CD11b^(+)、CD11b^(+)Ly6G^(+)、CD11b^(+)Ly6C^(+))和淋巴细胞组成(CD3^(+)、B220^(+))无差异。LPS诱导败血症实验中,MKO小鼠相关生化指标和炎症因子水平均低于WT小鼠,表明MKO小鼠可抵抗LPS诱导的败血症。结论:成功构建ABRO1 MKO敲除小鼠,发现MKO小鼠造血系统正常,但可抵抗LPS诱导的败血症,ABRO1 MKO小鼠的建立为揭示ABRO1在免疫细胞亚群中的差异性调控机制提供了良好的动物模型。     

肿瘤转移抑制基因nm23—H1 mRNA在乳腺癌中的转录表达

目的：探讨nm23—H1基因mRNA在乳腺患组织中的表达及其与临床的关系．方法:采用半定量RT—PCR方法，检测30例乳腺患组织nm23—H1的表达．结果:①淋巴结阳性的原发灶组织nm23—H1 mRNAA表达明显低于淋巴结阴性的原发灶组织，Ⅲ期乳腺患组织nm23—H1 mRNA水平较Ⅰ、Ⅱ期的明显低．②多因素分析发现淋巴结转移与nm23—H1 mRNA的表达有显著性相关．结论nm23—H1基因mRNA表达强度与淋巴结转移呈负相关．在乳胰患转移过程中，nm23—H1 mRNA起重要的作用。     

放线菌素D/TNF-α诱导大鼠肝干细胞凋亡及HGF的拮抗作用

目的 研究TNF-α、肝细胞生长因子(HGF)在肝干细胞的增殖、分化调控及凋亡中的作用。方法 用大鼠肝干细胞系WB F-344细胞进行实验，用MTT法检测细胞毒作用；用DNA凝胶电泳及流式细胞仪检测细胞凋亡；用Western blot方法检测磷酸化MAPK及PI3K蛋白的表达。结果 发现TNF-α单独对WB F-344细胞无明显作用；而TNF-α对放线菌素D(ActD)致敏的WB F-344细胞有明显细胞毒作用。进一步，发现TNF-α能够诱导ActD致敏的WB F-344细胞发生凋亡，在作用9h即出现细胞凋亡(13．60％)，48h达高峰(51％)，并且这种凋亡呈剂量效应关系。我们还发现，HGF可以明显拮抗ActD／TNF-α诱导的WB F-344细胞凋亡，并且呈剂量效应关系。Western blot结果显示，HGF刺激后，磷酸化MAPK蛋白高表达，表明HGF激活了MAPK途径。我们进一步用PI3K特异的抑制剂WT阻断PI3K途径，发现HGF的抗凋亡作用被阻断；然而，用MAPK特异抑制剂U0126阻断MAPK途径后，却并不影响HGF的抗凋亡作用。结论 TNF-α能诱导ActD致敏的肝干细胞发生凋亡，而HGF则对这种细胞凋亡有明显的拮抗作用；虽然HGF能够激活PI3K及MAPK 2条途径，但其抗凋亡作用是由PI3K途径传导的。     

超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素基因B的原核表达

目的构建重组pET-30a-SEB原核表达载体,转化感受态大肠杆菌BL-21(DE3),诱导表达超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素B(staphylococcalenterotoxinB,SEB)。方法利用PCR技术从产SEB的金黄色葡萄球菌标准菌株CMCC-26075基因组DNA中克隆SEB全长序列,将其克隆到pGEM-TEasy载体中并进行测序。构建pET-30a-SEB原核表达质粒,转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),异丙基硫代β-D半乳糖苷(isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达,经镍离子螯合亲和层析纯化后免疫鉴定。结果PCR获得超抗原SEB基因片段,与克隆载体连接后经测序与文献报道的基本一致;成功构建了pET-30a-SEB原核表达质粒且成功诱导表达出相对分子质量(Mr)约31×103的蛋白。结论成功克隆了seb基因序列,并进行了原核表达和鉴定,获得了SEB蛋白,为后续对超抗原SEB的进一步研究奠定了基础。     

不同长度poly(A)尾对mRNA体外表达的影响及转录模板在大肠埃希菌中的传代稳定性

目的探索不同长度poly(A)尾对mRNA体外表达的影响以及含poly(A)尾转录模板在大肠埃希菌中的传代稳定性。方法设计并构建含38、60、103、125 nt和60 nt+6 nt间隔序列+60 nt(简称126 nt)poly(A)尾的模板质粒, 利用单酶切将其线性化并以此作为转录模板进行体外转录反应制备增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, EGFP)-mRNA。将含有不同长度poly(A)尾的EGFP-mRNA转染293T细胞, 流式细胞术检测EGFP表达情况。将poly(A)尾长度为125 nt和126 nt的模板质粒分别转化至大肠埃希菌TransStbl3感受态细胞以及Top10感受态细胞中, 各挑取7个单克隆进行培养并提取质粒, 质粒经双酶切后进行毛细管电泳检测。分别从中选取3个测序正确的单克隆于37℃条件下进行连续传代, 每两代提取一次质粒, 双酶切后进行毛细管电泳检测。同时将poly(A)尾长度为125 nt的两组单克隆再分别于30℃条件下进行连续传代, 每两代提取一次质粒并进行双酶切鉴定和毛细管电泳检测。结果成功构...     

线粒体转运蛋白质家族

线粒体转运蛋白质家族(mitochondrial transporter family)等可溶性物质载体(solute carrier,SLC),主要包括SLC25,广泛存在于真核生物线粒体中,负责可溶性物质跨线粒体内膜的转运.SLC25家族成员拥有相似的结构特征、种类繁多的转运底物,并与细胞的多种生理功能密切相关.有研究表明,SLC25家族蛋白质的缺失或突变可导致多种代谢性疾病或神经系统疾病的发生.     

难治性癫痫的外科治疗

2001年10月至2006年10月,我们对28例难治性癫痫进行了多种手术方式相结合的治疗,并经6个月~5年随访,以进一步确定对难治性癫痫进行手术治疗的疗效并探索如何改进手术方法,现报告如下。1资料与方法1.1临床资料本组28例患者,男性17例,女性11例;年龄11~48岁,平均23.2岁;癫痫发作病     

塑料刷取样涂片法应用于宫颈癌病变检测的研究

目的探讨塑料刷取样涂片法在宫颈病变检测中的意义,以期找到宫颈癌早期筛查的合理方案。方法2005年5～12月,对在徐州市第一人民医院妇产科门诊就诊的妇女分别以传统宫颈细胞涂片法(1850例),塑料刷取样涂片法(1500例),液基细胞检查(TCT)法(2200例)进行宫颈病变的检测。细胞诊断系用TBS分级系统,阳性诊断为意义不明的不典型鳞状上皮(ASCUS)及以上病变。所有阳性结果病例全部在阴道镜下活检。结果传统宫颈细胞涂片法、塑料刷取样涂片法、TCT法对ASCUS以上病变的检出率分别为4.9%、9.8%、10.2%,后二者与前者相比,结果差异有显著性(P﹤0.01),后两者结果无明显差别(P﹥0.05)。三者与病理诊断的阳性符合率分别为20.8%、36.7%、35.8%,后两者与前者相比有明显优势(P﹤0.05),而后两者无明显差别(P﹥0.05)。结论塑料刷取片法应用于宫颈病变的检测操作简单,费用较低,特异性敏感高,较传统涂片法及TCT有明显优势,可作为宫颈癌筛查的最佳选择。     

心脏瓣膜置换术中冠状动脉阻力及心肌酶变化的研究

目的 观察体外循环(CPB)心脏瓣膜置换术中抑肽酶对冠状动脉阻力(CAR)及心肌酶学变化的影响.方法 随机选取风湿性心脏瓣膜病(RHVD)的二尖瓣替换(MVR)患者40例.随机分为A组:RHVD瓣膜替换术,B组:RHVD瓣膜替换术 CPB中使用抑肽酶,每组20例.所有患者于阻断前、主动脉开放1 h、术后12 h、24h、48 h、72 h晨静脉抽血,检测血清磷酸肌酸激酶(CK)、磷酸肌酸激酶同功酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白(cTnI).阻断开始、阻断30 min、阻断60 min、开放前温血灌注末,记录每次灌注的压力及流量,测算出CAR.结果 B组在阻断60 min和开放前温血灌注末中CAR明显低于A组,尤其在开放前温血灌注末差异更明显(P<0.01).2组CK、CK-MB、cTnI在主动脉开放各时点较术前均有不同程度的升高(P<0.05或P<0.01),B组升高幅度小于A组,2组在CPB后各对应时点的差异显著(P<0.01);B组心脏自动复跳率、窦性心率恢复率高于A组,电除颤率、心律失常发生率低于A组(P均<0.05).结论 在心脏停搏下手术时,抑肽酶在主动脉阻断温血灌注中可降低冠状动脉血管的张力,且具有心肌保护作用.