髓系特异性Abro1基因敲除小鼠构建和表型初步分析北大核心CSCD

目的:构建髓系特异性Abro1(Abraxas brother 1)基因敲除小鼠,并初步分析其对小鼠造血系统及LPS诱导败血症的影响。方法:采用CRISPR/Cas9基因编辑技术和Cre/LoxP重组系统构建Abro1^(flox/+)小鼠,将Abro1^(flox/+)雌雄小鼠自交,子代得到Abro1^(flox/flox)基因型小鼠。Abro1^(flox/flox)与Lyz2-Cre^(+)小鼠交配,子代得到Abro1^(flox/+)/Lyz2-Cre^(+)小鼠,再将其与Abro1^(flox/flox)交配,最终得到的Abro1^(flox/flox)/Lyz2-Cre^(+)小鼠为髓系特异性Abro1基因敲除小鼠,即MKO小鼠;Abro1^(flox/flox)/Lyz2-Cre^(−)小鼠作为野生型小鼠,即WT小鼠。提取WT和MKO小鼠尾基因组DNA,PCR扩增后琼脂糖凝胶电泳鉴定其基因型。提取WT和MKO小鼠免疫细胞蛋白,Western blot检测ABRO1蛋白表达。流式细胞术分析小鼠骨髓和外周血免疫细胞组成,检测MKO小鼠对造血系统的影响。LPS处理WT和MKO小鼠3 h,检测血清中相关生化指标变化以及炎症因子分泌情况。结果:PCR和Western blot结果显示髓系特异性Abro1基因敲除小鼠构建成功。流式细胞术结果显示WT和MKO小鼠骨髓和外周血中髓系细胞(CD11b^(+)、CD11b^(+)Ly6G^(+)、CD11b^(+)Ly6C^(+))和淋巴细胞组成(CD3^(+)、B220^(+))无差异。LPS诱导败血症实验中,MKO小鼠相关生化指标和炎症因子水平均低于WT小鼠,表明MKO小鼠可抵抗LPS诱导的败血症。结论:成功构建ABRO1 MKO敲除小鼠,发现MKO小鼠造血系统正常,但可抵抗LPS诱导的败血症,ABRO1 MKO小鼠的建立为揭示ABRO1在免疫细胞亚群中的差异性调控机制提供了良好的动物模型。     

肿瘤转移抑制基因nm23—H1 mRNA在乳腺癌中的转录表达

目的：探讨nm23—H1基因mRNA在乳腺患组织中的表达及其与临床的关系．方法:采用半定量RT—PCR方法，检测30例乳腺患组织nm23—H1的表达．结果:①淋巴结阳性的原发灶组织nm23—H1 mRNAA表达明显低于淋巴结阴性的原发灶组织，Ⅲ期乳腺患组织nm23—H1 mRNA水平较Ⅰ、Ⅱ期的明显低．②多因素分析发现淋巴结转移与nm23—H1 mRNA的表达有显著性相关．结论nm23—H1基因mRNA表达强度与淋巴结转移呈负相关．在乳胰患转移过程中，nm23—H1 mRNA起重要的作用。     

放线菌素D/TNF-α诱导大鼠肝干细胞凋亡及HGF的拮抗作用

目的 研究TNF-α、肝细胞生长因子(HGF)在肝干细胞的增殖、分化调控及凋亡中的作用。方法 用大鼠肝干细胞系WB F-344细胞进行实验，用MTT法检测细胞毒作用；用DNA凝胶电泳及流式细胞仪检测细胞凋亡；用Western blot方法检测磷酸化MAPK及PI3K蛋白的表达。结果 发现TNF-α单独对WB F-344细胞无明显作用；而TNF-α对放线菌素D(ActD)致敏的WB F-344细胞有明显细胞毒作用。进一步，发现TNF-α能够诱导ActD致敏的WB F-344细胞发生凋亡，在作用9h即出现细胞凋亡(13．60％)，48h达高峰(51％)，并且这种凋亡呈剂量效应关系。我们还发现，HGF可以明显拮抗ActD／TNF-α诱导的WB F-344细胞凋亡，并且呈剂量效应关系。Western blot结果显示，HGF刺激后，磷酸化MAPK蛋白高表达，表明HGF激活了MAPK途径。我们进一步用PI3K特异的抑制剂WT阻断PI3K途径，发现HGF的抗凋亡作用被阻断；然而，用MAPK特异抑制剂U0126阻断MAPK途径后，却并不影响HGF的抗凋亡作用。结论 TNF-α能诱导ActD致敏的肝干细胞发生凋亡，而HGF则对这种细胞凋亡有明显的拮抗作用；虽然HGF能够激活PI3K及MAPK 2条途径，但其抗凋亡作用是由PI3K途径传导的。     

超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素基因B的原核表达

目的构建重组pET-30a-SEB原核表达载体,转化感受态大肠杆菌BL-21(DE3),诱导表达超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素B(staphylococcalenterotoxinB,SEB)。方法利用PCR技术从产SEB的金黄色葡萄球菌标准菌株CMCC-26075基因组DNA中克隆SEB全长序列,将其克隆到pGEM-TEasy载体中并进行测序。构建pET-30a-SEB原核表达质粒,转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),异丙基硫代β-D半乳糖苷(isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达,经镍离子螯合亲和层析纯化后免疫鉴定。结果PCR获得超抗原SEB基因片段,与克隆载体连接后经测序与文献报道的基本一致;成功构建了pET-30a-SEB原核表达质粒且成功诱导表达出相对分子质量(Mr)约31×103的蛋白。结论成功克隆了seb基因序列,并进行了原核表达和鉴定,获得了SEB蛋白,为后续对超抗原SEB的进一步研究奠定了基础。     

不同长度poly(A)尾对mRNA体外表达的影响及转录模板在大肠埃希菌中的传代稳定性

目的探索不同长度poly(A)尾对mRNA体外表达的影响以及含poly(A)尾转录模板在大肠埃希菌中的传代稳定性。方法设计并构建含38、60、103、125 nt和60 nt+6 nt间隔序列+60 nt(简称126 nt)poly(A)尾的模板质粒, 利用单酶切将其线性化并以此作为转录模板进行体外转录反应制备增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, EGFP)-mRNA。将含有不同长度poly(A)尾的EGFP-mRNA转染293T细胞, 流式细胞术检测EGFP表达情况。将poly(A)尾长度为125 nt和126 nt的模板质粒分别转化至大肠埃希菌TransStbl3感受态细胞以及Top10感受态细胞中, 各挑取7个单克隆进行培养并提取质粒, 质粒经双酶切后进行毛细管电泳检测。分别从中选取3个测序正确的单克隆于37℃条件下进行连续传代, 每两代提取一次质粒, 双酶切后进行毛细管电泳检测。同时将poly(A)尾长度为125 nt的两组单克隆再分别于30℃条件下进行连续传代, 每两代提取一次质粒并进行双酶切鉴定和毛细管电泳检测。结果成功构...     

X线—病理对照研究中肺标本的制做和应用

本文通过总结我们做过的周围型肺肿块X 线一病理对照研究并结合有关文献,将X 线-病理对照研究中肺标本的制做和应用等问题加以讨沦。一、肺标本制做的方法与步骤1.将收集到的术后切除肺标本立即轻轻挤压,使     

PCBP1:一种在多水平上参与基因表达调控的蛋白因子

多聚胞嘧啶结合蛋白1 (poly C binding protein-1,PCBP1),属于RNA结合蛋白亚家族,因其具有同RNA的多聚胞嘧啶(poly C)区域特异的结合活性而得名.目前该亚家族共有5个成员:hnRNP K(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K)、PCBP1、PCBP2、PCBP3和PCBP4.PCBP1蛋白在多个水平参与基因的表达调控,如转录、mRNA加工、mRNA的转运、mRNA稳定以及翻译水平调控等.本文对PCBP1基因的结构和生物学功能进行了综述.     

多靶点蛋白酪氨酸激酶抑制剂的研究进展

肿瘤的发生与发展涉及多种受体或信号通路网络。多项研究结果表明,多靶点药物的治疗效果优于单靶点药物,多靶点抑制肿瘤信号转导是肿瘤防治药物重要的研究方向。本文根据化学结构分类,对多靶点蛋白酪氨酸激酶抑制剂及其发展前景做简要综述。     

1975至2014年上海市静安区户籍人口脑血管病死亡的流行趋势分析

目的 了解1975至2014年上海市静安区户籍人口脑血管病死亡的流行趋势,为制定预防控制策略和 措施提供科学依据。 方法 利用静安区1975至2014年居民死因监测资料,计算脑血管病粗死亡率,标化死亡率,40年间死 亡率变化趋势及平均死亡年龄的变化趋势。 结果 1975至2014年上海市静安区户籍人口脑血管病死亡的平均粗死亡率及标化死亡率分别为 165.60/10万和120.54/10万,男女性的死亡率差异无统计学意义;40年间脑血管病粗死亡率呈上升趋 势（χ 2 趋势=10.58,P <0.001）,标化死亡率呈逐年下降的线性趋势,用SAS系统中的AUTOREG（自回归） 过程进行时间序列线性趋势拟合,回归模型有意义（t =32.13,P <0.001）;脑血管病平均死亡年龄呈 逐年上升的线性趋势,采用时间序列线性趋势拟合,回归模型有意义（t =260.46,P <0.001）。 结论 本文的研究结果提示上海市脑血管病的患病率将持续升高,而脑血管病的存活年龄逐年上升。     

人工肱骨头置换治疗老年肱骨近端粉碎性骨折的技术要点

背景：采用人工肱骨头置换治疗老年肱骨近端粉碎性骨折可快速恢复肩关节良好的活动功能。但人工肱骨头置换过程中如何重建和恢复肩关节周围软组织平衡,其关键技术值得探讨。 目的：分析人工肱骨头置换治疗老年肱骨近端粉碎性骨折的效果及技术关键。 方法：选择1999-06/2009-01解放军第八十九医院骨科关节外科施行人工肱骨头置换的13例肱骨近端粉碎性骨折患者,男4例,女9例,年龄在69.2(63~78)岁。术中准确复位固定大小结节,假体植入得当,修复肩袖损伤,术后进行康复训练,采用Neer评分标准随访评价治疗效果。 结果与结论：13例患者随访51(9~112)个月,Neer评分标准显示,优6例,良5例,可2例,优良率85%;X射线片示无关节脱位、假体松动或断柄,患者均能完成日常活动,10例主观非常满意,主观满意度为77%。在熟悉肩关节解剖和功能特点的基础上,严格把握手术适应证,遵循肱骨头置换过程中的关键技术方法,置换后落实必不可少的康复训练过程,采用人工肱骨头置换治疗老年肱骨近端粉碎性骨折,可快速恢复肩关节良好的活动功能。