急性肝损伤实验动物模型的研究进展

肝是人体最大的消化腺,堪称人体的能量化学工厂.因此,肝功能是否正常与人体的生活质量密切相关.临床上,急性肝损伤是十分常见的病症,多种因素如化学性肝毒物、病毒感染、免疫性因素、乙醇性因素以及外科手术等均可引起急性肝损伤,甚至肝功能衰竭,其防治研究一直是热门课题.现就已经开展的关于急性肝损伤的实验研究进行了归总,为以后进一步对肝损伤保护进行实验及临床研究提供参考.     

重组截短型人角质细胞生长因子-1的表达及纯化

目的：构建高效表达N端缺失的23个氨基酸重组人角质细胞生长因子1( rhKGF1_dest23)的基因工程菌,为治疗放化疗后口腔黏膜炎的新药开发提供实验数据。方法：利用PCR方法分别以pET3c-hKGF1及sumo-EGF为模板合成N端缺失的23个氨基酸rhKGF1_dest23及sumo基因片段,构建4种原核表达载体pET22b-rhKGF1_dest23﹑pET22b-sumo-rhKGF1_dest23﹑pET3c-rhKGF1_dest23和pET3c-sumo-rhKGF1_dest23,分别转化原核表达宿主菌Rosetta(DE3) plysS、BL21(DE3) 、BL21(DE3)Star plysS、origima(DE3) 和BL21AI,筛选rhKGF1_dest23蛋白表达的最佳质粒与宿主菌组合。CM离子交换和肝素亲和层析法纯化rhKGF1_dest23蛋白,Western blotting法鉴定rhKGF1_dest23蛋白。结果： pET22b-rhKGF1_dest23质粒与BL21AI 宿主菌为最佳组合表达,经IPTG与阿拉伯糖诱导, SDS-PAGE电泳后表明目的蛋白大部分以可溶性形式存在,约占菌体总蛋白的10％,经CM和肝素两步纯化后rhKGF1_dest23蛋白纯度为95%以上,Western blotting法鉴定为rhKGF1_dest23蛋白。结论：成功构建表达人KGF1_dest23重组蛋白的基因工程菌,经IPTG与阿拉伯糖诱导,CM弱阳离子与肝素亲合层析后,得到了纯化的rhKGF1_dest23蛋白。     

人类重组酸性成纤维细胞生长因子对细胞增殖和凋亡的影响

目的：通过对人类重组型和野生型酸性成纤 维细胞生长因子（raFGF，waFGF）的比较研究，探讨raFGF与促分裂性有关的生物学作用。 方法：应用NIH3T3细胞株，用MTT法通过细胞增殖实验检测waFGF和raFGF 的促分裂性，通过流式细胞术检测细胞凋亡、细胞膜通透性和线粒体膜电位。同时检测肝素 （HS）对aFGF生物学作用的影响。结果：raFGF对细胞增殖 作用明显低于waFGF。raFGF对细胞凋亡的抑制作用及其对细胞膜通透性的增强作用也明显低 于waFGF，对线粒体膜电位的增强作用明显低于waFGF。HS对aFGF的生物学作用具有促进作用 。结论：raFGF的促分裂作用低于waFGF，而对细胞凋亡的影响不明显。     

小鼠自体胰岛肌肉移植及疗效评价

目的探讨小鼠自体胰腺部分切除及自体胰岛的肌肉移植方法,并对术后小鼠进行疗效评价。方法选用C57BL/6小鼠,分为三组,胰腺部分切除后移植组为麻醉后切除十二指肠部沿胃大弯至脾部位的胰腺组织,并将胰岛纯化后移植至自体肌肉组织;以切除部分胰腺后未移植组和正常组作对照。结果小鼠自体胰腺部分切除和自体胰岛肌肉移植术后存活率较高,但在饲养过程中均出现持续体重下降和血糖不稳定,OGTT显示两组术后小鼠20、40 min的血糖均较正常组高,肌肉移植7 d后HE染色显示胰岛在肌肉中存活,但胰岛中心部位细胞有坏死。结论本研究建立了一种无免疫排斥下研究小鼠胰岛移植的方法,可为进一步探索改进胰岛移植研究提供参考。     

现代生物工程技术在美容学中的应用

由于多学科的交叉发展 ,现代美容模式已呈现出多元化、多层次、整体性的发展势头。现代生物工程技术的飞速发展 ,以及生物工程技术向医学整形及美容化妆品制造领域的渗透和广泛应用 ,给整形科学、美容学、化妆品学都带来了全新的发展机遇。1　基因工程技术在美容学中的应用　将基因工程技术应用于整形及美容护肤方面 ,可以发挥神奇的效果。利用ＤＮＡ重组技术 ,可以将一些在美容和整形中起重要作用的蛋白质(如各种细胞生长因子 ) ,在真核及原核细胞中高效表达 ,使得适量补充某些外源性蛋白质成为可能 ,真正解决了其它方法不能解决的问题。这…     

nmhaFGF对人乳腺癌细胞增殖的影响及相关机制

目的比较nmhaFGF和haFGF对恶性肿瘤细胞的促增殖作用及其机制，探讨nmhaFGF临床应用的安全性。方法以haFGF和nmhaFGF分别处理人乳腺癌细胞(MCF-7)，用MTT法检测其细胞增殖活性；用流式细胞技术分析细胞周期；用蛋白免疫印迹法半定量检测MAPK通路中的信号蛋白Grb2和ERK1/2在MCF-7中的表达。结果nmhaFGF对MCF-7细胞的促增殖作用明显低于haFGF；haFGF组G₁/G₀和G₂/M期细胞比例均低于nmhaFGF组和对照组，S期细胞比例显著高于nmhaFGF组和对照组；nmhaFGF组的Grb2和ERK1/2信号蛋白表达水平均低于haFGF组，亦接近对照组。结论nmhaFGF的促增殖活性显著下降，其机制是通过下调MAPK信号通路中的Grb2和ERK1/2信号分子的表达来实现的。     

aFGF对庆大霉素所致海马星形胶质细胞损害的保护作用

目的 研究酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对庆大霉素(GM)引起的体外培养的大鼠海马星形胶质细胞损害的保护作用.方法 大鼠海马经分离、剪切、胰蛋白酶消化,进行星形胶质细胞的体外培养.采用兔抗GFAP多克隆抗体进行免疫组织化学染色鉴定,传3代细胞接种于96 孔培养板.(1)培养24 h后加入一系列浓度的GM,再培养2...     

bFGF生物蛋白海绵体外生物学活性检测方法的建立及其稳定性评价

目的：建立碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）生物蛋白海绵体外生物学活性测定方法观察bFGF生物蛋白海绵常温放置的稳定性。方法：bFGF生物蛋白海绵供试品融于稀释液中,离心后获得浸提液,以bFGF标准品为对照,与NIH3T3细胞共培养,MTT法检测bFGF生物蛋白海绵浸提液对NIH3T3细胞的促增值作用,用bFGF标准品计算bFGF生物蛋白海绵的相对百分效价,对该方法进行验证;以常温储存2、3和4年的bFGF生物蛋白海绵为供试品,以低温储存30 d的bFGF生物蛋白海绵为标准对照,以不含bFGF生物蛋白海绵和bFGF的培养液为空白对照,测定各组生物学活性效价,比较不同储存时间bFGF生物蛋白海绵的体外生物学活性效价的稳定性。结果：bFGF生物蛋白海绵供试品浸提液随浓度增加其吸光度（A值）增高,即NIH3T3细胞增殖作用增加,与空白组比较差异有统计学意义(P<0.01),与bFGF标准品比较差异无统计学意义（P>0.05）;bFGF标准品和bFGF生物蛋白海绵在该方法中均存在量效关系,且符合四参数方程式：y=（A－D）∕［1+（X／C）B］+D;常温条件下储存2、3和4年生物蛋白海绵体与低温储存30 d比较,其生物学活性效价(U?mL-1)下降率分别为0.5%、0.6%和0.8%,均低于15%的国家标准。结论：bFGF生物蛋白海绵在体外能够促进NIH3T3细胞增殖,具有良好生物学活性;应用NIH3T3细胞检测bFGF生物蛋白海绵体外生物学活性可作为常规检测方法;bFGF生物蛋白海绵常温储存2~4年稳定性良好。     

FGF/胶原蛋白复合海绵的皮内刺激试验和短期肌肉植入试验

目的:评估FGF/胶原蛋白复合海绵在动物体内的生物相容性。方法:由不同原料制备的FGF/胶原蛋白复合海绵,分别进行以下生物学测试;(1)皮内刺激试验;(2)短期肌肉植入试验,实验数据根据标准进行分析和评估。结果:在急性眼刺激试验和皮内刺激试验中,2种供试品评分均为0分,表明它们对组织均无刺激性;在短期肌肉植入试验中,2种供试品在组织内无明显的炎症排斥反应,能够在短期内被降解吸收。结论:供试品的生物学测试结果显示了FGF/胶原蛋白复合海绵具有较好的生物相容性,在临床植入医用等领域有应用潜力。