哈萨克族食管癌中MMP-1、MMP-2、MMP-7、TIMP-1和MTA1的表达及其临床病理意义

目的：探讨在新疆哈萨克族食管癌组织中基质金属蛋白酶1、2、7（MMP-1、MMP-2、MMP-7）、基质金属蛋白酶抑制因子1（TIMP-1）和肿瘤转移相关基因1（MTA1）mRNA的表达及其临床意义。方法：采用RT-PCR方法检测75例哈萨克族食管癌标本中MMP-1、MMP-2、MMP-7、TIMP-1和MTA1 mRNA的表达水平,分析其表达与临床病理特征的关系。结果：MMP-1、MMP-2、MMP-7、TIMP-1和MTA1 mRNA在哈萨克族食管癌组织中的表达较正常组织增高,差异均具有统计学意义（P均〈0.05）;且MMP-2、MMP-7、MTA1 mRNA的表达与淋巴结转移有关（P〈0.05）,MMP-1、MMP-7 mRNA的表达与临床分期有关（P〈0.05）;TIMP-1与MMP-1、MMP-7、MTA1的表达呈正相关（r=0.446、0.458、0.333,P均〈0.01）。结论：MMP-1、MMP-2、MMP-7、TIMP-1和MTA1 mRNA表达上调共同参与了哈萨克族食管癌的发生发展过程;MMP-2、MMP-7和MTA1可能是哈萨克族食管癌发生侵袭、转移的主导因素。     

食管癌ECA109细胞中Survivin shRNA干扰对核因子κB表达的影响及调控机制

目的探讨Survivin作为基因表达调控因子,对核因子κB(NF-κB)基因的转录及蛋白水平活性的影响及与NF-κB的调控关系。方法采用Survivin短发夹RNA(shRNA)干扰技术,脂质体转染食管癌ECA109细胞,检测Survivin沉默效果,选择最佳转染浓度;半定量RT-PCR检测Survivin shRNA干扰后食管癌ECA109细胞中NF-κB及其通路的上游调控因子核因子κB抑制蛋白α(IKKα)、IKKβ表达变化;Western blotting方法检测NF-κB蛋白的表达变化;流式细胞术检测干扰之后食管癌ECA109细胞增殖、凋亡指数的变化。结果 Survivin shRNA干扰食管癌ECA109细胞后,Survivin mRNA和蛋白表达明显下调;NF-κB mRNA表达变化无明显差异,但其蛋白磷酸化水平降低,NF-κB上游因子IKKα、IKKβmRNA表达下调;食管癌ECA109细胞凋亡明显增加,G2期细胞比例增加,S期细胞减少,细胞周期受阻。结论 Survivin通过在转录水平影响IKKα、IKKβmRNA表达,调控NF-κB蛋白活化水平,提示Survivin在肿瘤信号调控网络中可作为一个新的基因表达调控因子。     

食管鳞癌组织中hMLH1 mRNA的表达变化及意义

目的观察食管鳞癌组织中错配修复基因hMLH1 mRNA的表达变化,并探讨其临床意义。方法采用RT-PCR法检测60例食管鳞癌组织与癌旁组织中的hMLH1 mRNA。结果食管鳞癌组织中hMLH1 mRNA相对表达量（0.761 7±0.035 7）明显低于癌旁正常组织（1.025 2±0.047 4）,P〈0.05;hMLH1 mRNA的相对表达量与食管鳞癌分化程度、肿瘤浸润深度和淋巴结转移无关（P均〉0.05）,与病理分期有关（P〈0.05）。结论hMLH1 mR-NA表达缺失参与了食管鳞癌的发生或发展。     

MMP-7、MMP-2在新疆维吾尔族食管癌中的表达及其相关性研究

目的：探讨基质金属蛋白酶7（MMP7）基因、基质金属蛋白酶2（MMP-2）基因在维吾尔族食管癌和正常组织中的表达及相互关联性。方法：采用逆转录-聚合酶链式反应（RTPCR）方法检测MMP-7、MMP2在30例食管癌组织及其相应30例正常组织中的表达。结果：MMP-7、MMP-2在30例癌组织中的阳性表达率均为90．0％（27／30）,在30例正常组织中的阳性表达率均为56．7％（17／30）,MMP-7、MMP-2的表达在癌组织与正常组织中的差异有统计学意义（Pd0．05）。MMP7和MMP2mRNA的表达与肿瘤大小、分化程度,分期及淋巴结转移之间差异无统计学意义（P〉O．05）。MMP-7和MMP-2mRNA在癌组织中的表达有正相关性。结论：MMP7、MMP-2基因的表达可能与维吾尔族食管癌的发生、发展有关,两者之间可能具有协同作用,共同促进食管癌的发生及发展。     

内皮型一氧化氮合酶基因多态性与新疆汉族原发性高血压的相关性研究

目的研究新疆汉族人内皮型一氧化氮合酶（Endothelial nitric oxide synthase,eNOS）基因第7外显子G894T及第4内含子4b/a VNTR多态性与原发性高血压（essential hypertension,EH）的关系。方法分别采用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性（Polymerase chain reaction-restricted fragments length polymorphism,PCR-RFLP）技术及PCR技术检测176例原发性高血压患者、131例对照组eNOS基因G894T和4b/a多态性的基因型,分析其对原发性高血压的影响。结果原发性高血压组和对照组eNOS基因G894T、4b/a多态性的等位基因频率及基因型分布在两组间差异无统计学意义。结论 eNOS基因894G→T变异及4b/a VNTR多态性与新疆汉族原发性高血压无明显关联。     

HPV16 E6/E7融合基因真核表达载体的构建

目的构建pEGFP-N1-E6/E7融合基因真核表达载体。方法应用聚合酶链反应技术(polymerasechain reaction,PCR)从SiHa细胞中扩增出人类乳头瘤病毒16型(HPV16)E6/E7基因全长片段,并将其克隆到真核表达载体pEGFP-N1上。结果获得了包含全长阅读框架的HPV16E6/E7基因,并成功克隆到真核表达载体中。结论成功构建了pEGFP-N1-E6/E7融合基因真核表达载体。     

哈萨克族食管癌中cdc42启动子区CpG岛及全基因共构建真核表达载体

目的构建cdc42基因启动子区CpG岛及全基因共构建真核表达载体,研究cdc42基因启动子区的甲基化状态对该基因表达及功能的影响。方法采用PCR方法从新疆哈萨克族食管癌的cDNA表达阳性的标本中扩增出cdc42基因,以阳性组织基因组DNA扩增出cdc42基因启动子区CpG岛,cdc42基因经双酶切后与真核表达载体pEGFP-N1相连,并转入甲基化酶缺陷的大肠杆菌E.coliER1793中扩增。经测序成功后,将重组质粒及cdc42基因启动子区CpG岛用HindⅢ酶切,连接后再次转入E.coliER1793中扩增。将重组质粒转染至食管癌细胞株Eca-109中,荧光显微镜观察结果。结果 DNA测序证明获得了包含ORF全长的cdc42基因及其启动子区CpG岛,并将双序列成功克隆入真核表达载体pEGFP-N1中。转染后荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋白。结论成功构建真核表达载体,为进一步探讨cdc42基因启动子区CpG岛甲基化状态对该基因在哈萨克族食管癌细胞株中的表达及功能的影响奠定了基础。     

新疆维族非综合征型遗传性耳聋肾虚血瘀型与线粒体DNA 12SrRNA A1555G突变分析

目的：研究新疆地区维族非综合征型遗传性耳聋线粒体DNA12SrRNAA1555G突变频率,探讨与肾虚血瘀型的关系。方法：收集新疆地区51例非综合征型遗传性耳聋患者,其中肾虚血瘀型占67％（34／51）,另选53例维族听力正常者作为对照。抽取外周静脉血,从白细胞中提取DNA,多聚酶链反应（PCR）扩增线粒体DNA目的片断,Alw26I限制性内切酶检测A1555G点突变,而后对阳性患者的PCR产物进行DNA测序验证。结果：在所有样本中,2例存在mtDNAA1555G点突变,均为维族肾虚血瘀非综合征型遗传性耳聋患者。结论：携带有该突变的个体对氨基糖甙类抗生素的耳毒作用有高度易感性。遗传性耳聋肾虚血瘀型患者较mtDNAA1555G突变非肾虚血瘀型高。但突变检出率比较,差异无显著性意义（P〉0．05）。     

Survivin、CyclinD1基因在哈萨克族食管癌中表达及其意义的研究

目的：研究Survivin和CyclinD1基因在哈萨克族食管癌组织中的表达。方法：采用逆转录多聚酶链反应技术检测Survivin和CyclinD1基因在20例食管癌组织及其相应癌旁组织中的表达。结果：20例食管癌组织中Survivin基因的总阳性率为50%,相应癌旁组织中Survivin基因的总阳性率为20%,且其表达量均低于其对应的癌组织。在20例食管癌组织中有10例表达CyclinD1基因,阳性率为50%,而在20例癌旁组织中有13例表达,阳性率为65%,且癌组织的表达低于其对应的癌旁组织。结论：提示Survivin基因的异常表达引起的细胞凋亡抑制在哈萨克族食管癌的发生、发展过程中起到一定的作用。CyclinD1在哈萨克族食管癌中的作用与其在其它民族中的作用可能有所不同。     

TNF-α在食管鳞癌细胞中对PD-L1表达的影响

目的 探讨TNF-α在食管鳞癌细胞株Eca109中对PD-L1表达的影响以及PKA/CREB在TNF-α调节PD-L1表达中的作用.方法 体外培养食管鳞状细胞癌Eca109细胞,实验分为空白对照组、TNF-α组(20 ng/ml TNF-α诱导24 h)和TNF-α+Staurosporine组(先20 ng/ml S...