不同地理居群破布叶的psbA-trnH和ITS2序列及其聚类分析

目的探讨破布叶Microcos paniculata不同地理居群间的DNA序列变异与地理分布的关系,为其种质资源评价和基原植物的分子鉴定提供参考。方法对破布叶14个居群14份个体样品以改良的3×CTAB法提取基因组DNA,选择特异的引物扩增ITS2和psb A-trnH序列;PCR扩增产物直接双向测序分析。DNAMAN 8.0软件处理测序数据,MEGA6.0软件计算K2P遗传距离,运用NJ法构建系统聚类树。结果破布叶14个居群的ITS2序列均为462 bp,共检测到14个变异位点,居群间遗传距离0.000 0~0.019 8。除云南景洪居群样本的psb A-trnH序列存在8 bp缺失外,其他13个居群样本的psb A-trnH序列均长387 bp,无变异,居群间遗传距离为0.000 0。结论不同地理居群破布叶的psb A-trnH较ITS2更为保守,二者PCR扩增引物特异性好,扩增效率和测序成功率高,对其药材及基原植物的分子鉴定可采用psb A-trnH为主,ITS2序列为辅的DNA条形码技术。     

基于代谢组学技术的田黄方配伍机制分析

【目的】观察田黄方不同组方对血脂及代谢产物的影响,揭示其治疗高脂血症的组方机制。【方法】取雄性SD大鼠30只,分为正常组、模型组、三七组、黄连组及田黄组。采用高脂乳剂灌胃法复制高脂血症大鼠模型并给予相应药物治疗,采集治疗4周后的血液,采用超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱联用(UPLC/Q-TOF MS)技术建立大鼠血清的代谢物指纹图谱。应用主成分分析和偏最小二乘判别分析模型组和田黄组、三七组、黄连组之间的代谢物谱差异,并通过变量重要性投影(VIP)选取生物标志物,比较各组的标志物并找出差异。【结果】田黄方对饮食性高脂血症大鼠模型的干预作用主要体现在对脂肪代谢、氨基酸代谢、炎症和氧化应激的调节作用,而三七、黄连虽能一定程度改善模型组大鼠的代谢紊乱状态,但未能从根本上恢复。【结论】田黄方对高脂血症动物模型血脂及代谢产物的调节作用优于三七、黄连单用,其中三七以调节氨基酸代谢、能量代谢为主,黄连以调节炎症、氧化应激及能量代谢为主,田黄方对上述代谢紊乱均有调节作用。     

老年肥胖胆囊炎患者的临床特点及诊治经验

目的探讨老年肥胖患者胆囊炎的临床特点。方法我科2008年1月-2011年3月收治898例胆囊炎患者,其中129例为老年肥胖患者,129例中行保守治疗55例,余74例行手术治疗,其中胆囊切除术67例,胆囊切除＋胆囊造瘘术5例,胆囊大部分切除术2例。结果74例手术患者术后出现胆漏3例,出血1例,伤口脂肪液化2例,均治愈。55例保守治疗患者中2例并发肝功能衰竭死亡。伴有糖尿病及BMI≥28的患者,其手术时间长,术中出血量大、住院时间久,并发症发生率高（P〈0．05）。结论老年,尤其是肥胖患者,可能是慢性胆囊炎急性发作、胆囊结石的危险因素之一;其临床症状不典型,具有较强的隐蔽性,并发症相对较多,预后相对较差,应该及早诊治。     

不同产地布渣叶总黄酮含量及其清除自由基活性研究

目的测定13个不同产地布渣叶样品中总黄酮含量及其清除自由基活性。方法采用Al（NO3）3-NaNO2-NaOH体系比色法测定总黄酮含量,采用1,1-二苯基-2-苦基肼自由基（DPPH.）、羟自由基（.OH）和超氧自由基（O2.-）等模型测定布渣叶总黄酮清除自由基活性。结果各产地总黄酮含量差异较大,其中以广西来宾样品含量最高,达到了55.22 mg.g-1,平均为27.06 mg.g-1。各产地总黄酮样品均具有清除DPPH.活性,其自由基清除率随供试品总黄酮浓度的增大而提高,呈现一定的量效关系;但其清除.OH和O2.-活性与总黄酮浓度关系不明显。结论不同产地布渣叶总黄酮含量差异较大;各产地布渣叶总黄酮均具有较好的自由基清除活性。     

胆南星的薄层色谱鉴别

目的建立以猪胆汁制的胆南星的薄层色谱鉴别方法。方法以环己烷-乙酸乙酯-冰醋酸（体积比8：8：0．8）为展开剂,以羧甲基纤维素钠为黏合剂自制硅胶G薄层板,20％磷钼酸溶液为显色剂,进行薄层色谱分析。结果胆南星药材和猪去氧胆酸对照品在薄层板上主斑点位置及颜色一致;且斑点集中,分离度好。结论所建立的方法快速、简便、灵敏、重现性好、专属性强,可作为以猪胆汁制的胆南星的质量控制方法之一。     

RNA干扰对骨桥蛋白不同片段表达的影响

目的 观察RNA干扰技术对肝癌细胞株内骨桥蛋白(osteopontin,OPN)不同片段的抑制效果,以期为针对OPN的靶向治疗提供更准确、有效的位点.方法 应用合成OPN序列特异性双链RNA(OPNi-A、OPNi-B、OPNi-C),转染人HEP G2肝癌细胞株,用荧光定量PCR和免疫组化检测比较OPN的mRNA和蛋白表达情况.结果 OPNi-A、OPNi-B、OPNi-C转染HEP-G2后,A片段的荧光强度大于B片段和C片段.RNA干扰HEP-G2细胞株48 h后,A、B、C、三个片段的OPNmRNA的△CT值分别从干扰前的8.31±1.58、8.78±1.49、8.25±1.51上升至12.14±1.43、10.22±1.97、10.48±1.88 (P＜0.05)；三个片段的OPN蛋白水平免疫组化评分也从干扰前的6.44±1.67、5.43±2.05、5.45±2.52下降到2.84±1.52、4.43±1.65、3.95±1.43.结论 RNA干扰对肝癌细胞株内骨桥蛋白不同片段有不同的抑制作用.合成更具针对性的siRNA可能对抑制肝癌侵袭转移具有重要的科学和卫生经济学意义.     

CAD工程制图实验教学中的几点体会

结合教学实践,针对制药工程制图实验教学过程中遇到的问题,对教学方法进行了探索。在课程中营造和谐气氛,建立师生合作关系,激发学生主动探索的精神,加强CAD画图练习中的指导,重视计算机动画演示制图等对培养学生的创造性思维收到较佳效果。     

牡荆苷和异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖苷的电喷雾飞行时间质谱研究

目的:研究牡荆苷和异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖苷的电喷雾质谱裂解规律.方法:利用超高效液相色谱串联电喷雾四极杆飞行时间质谱(UPLC-ESI-Q-TOF/CID/MS/MS),结合源内碰撞诱导解离技术进行分析.结果:ESI-MS谱给出的主要是m/z 431.095 8和m/z623.156 6的[M-H]-基峰.牡荆苷的CID-MS/MS显示了5个主要的特征碎片离子,其中3个对应于葡萄糖基的环破裂m/z353,341和311;另外2个分别为黄酮苄基离子m/z283,苷元离子,m/z269.此外,还有2个低丰度的特征离子,即RDA裂解产生的m/z 161和m/z117.异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖苷的CID-MS/MS显示了有6个主要特征碎片离子,分别对应于鼠李糖基的中性丢失m/z477和芸香糖基的环破裂m/z387,357和311,以及异鼠李素苷元离子m/z315.此外,还有B环产生的m/z 300和m/z 271和c环产生的m/z 243以及RDA裂解产生的,m/z151和m/z 125.结论:上述质谱裂解规律可作为牡荆苷和异鼠李-3-O-β-D-芸香糖苷的鉴定依据.     

自微乳用于提取分离生姜中姜辣素的研究

目的探讨自微乳提取和分离生姜中姜辣素类化合物的可行性。方法以姜辣素的提取率筛选油相、乳化剂、助乳化剂,利用伪三元相图优化自微乳处方;以姜辣素质量分数为指标,按照L9(34)正交设计方案,对超声温度、时间、液固比等工艺参数进行优化;采用浊点浓缩分离自微乳提取液中的姜辣素类成分。结果优选的自微乳处方为:v[聚乙二醇辛基苯基醚-正丁醇(体积比5∶1)]∶v(油酸乙酯)∶v(水)=2.5∶0.5∶7;液固比为20∶1,35℃下280 W、40 kHz超声强化浸提60 min,姜辣素的提取率为92.1%;利用浊点浓缩的方法处理自微乳提取液,油层姜辣素的回收率为90.33%。结论自微乳用于生姜的提取和分离,可在保证脂溶性成分提取率的前提下,避免有机溶剂的使用,且可快速浓缩分离,简化工艺。     

田黄方降脂作用配伍机制的尿液代谢组学研究

目的:在前期研究发现田黄方合用比单用三七、黄连对高脂血症大鼠模型血脂调节作用更优的基础上,进一步采用代谢组学技术比较其合用及单用对饮食性高脂血症大鼠尿液代谢产物的差异,揭示其治疗高脂血症的配伍机制。方法:取雄性SD大鼠30只,分为空白组、模型组、黄连组(3g/kg)、三七组(3g/kg)、田黄方组(3g/kg),采用高脂乳剂灌胃法复制高脂血症大鼠模型并给予相应药物治疗,给药30天后,采集24 h尿样用于代谢组学的分析。尿液样品UPLC-TOF/MS检测分析,质谱数据采MarkerLynx XS软件统计分析,并采用主成分分析法(PCA)和偏最小二乘-判别分析法(PLS-DA)对获得的数据进行处理。结果:在得分图中,各给药组与模型组显著分离;黄连组与三七组较接近,处于模型组和正常组之间;田黄方组和正常组较接近。同时三七、黄连、田黄方分别对8、10、15个生物标志物具有干预作用,综合评价各给药组对高脂血症大鼠代谢和生物标志物的干预作用,结果田黄方全方作用最好,黄连次之,三七最弱。结论:田黄方(3g/kg)对饮食性高脂血症大鼠模型的干预作用主要体现在对脂肪代谢、氨基酸代谢、炎症和氧化应激的调节作用,而三七、黄连虽能一定程度的改善模型组大鼠的代谢紊乱状态,但未能从根本上恢复,说明田黄方组合的合理性。