外鼻胚胎性横纹肌肉瘤临床诊断1例分析

胚胎性横纹肌肉瘤是儿童较常见的一种恶性肿瘤,恶性程度高,发展快,尽早确诊、积极治疗殊为重要,以泌尿生殖系统、鼻腔、鼻窦,四肢为多见.今报告1例外鼻胚胎性横纹肌肉瘤,曾误诊为酒渣鼻、外鼻囊肿、血管瘤等.     

人胰腺细胞cDNA文库中丙型肝炎病毒E1结合蛋白基因的筛选

目的 应用酵母双杂交技术筛选人胰腺细胞cDNA文库中与HCV包膜糖蛋白E1相互作用的结合蛋白的编码基因.方法 扩增人胰腺细胞cDNA文库并经纯化鉴定后,将文库质粒转化酵母菌株Y187.诱饵质粒pGBKT7-E1转化酵母菌株AH109,在色氨酸缺陷型培养基(SD/-Trp)上筛选阳性菌落.应用酵母双杂交系统3将阳性重组AH109菌株与重组酵母菌株Y187进行配合,在四缺培养基(SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade)和铺有X-α-gal的四缺培养基上进行筛选,提取蓝色酵母菌落质粒,电转化大肠埃希菌DH5α后再提取质粒测序.测序结果进行序列比对.结果筛选出16种与HCV E1蛋白相结合的蛋白基因.结论在筛选出的与HCV E1蛋白结合的人胰腺细胞蛋白基因中,部分可能与糖、脂类代谢密切相关.     

小鼠呼吸机相关肺损伤过程中免疫机制的初步研究

目的建立小鼠呼吸机相关性肺损伤模型,并初步探讨呼吸机相关性肺损伤的免疫损伤机制。方法小鼠呼吸机维持通气潮气量(Vt)12ml/kg,维持呼吸频率130次/min,持续通气时间3h,流式细胞仪检测小鼠外周血及肺组织中CD11b+细胞、粒细胞、单核细胞等的比例,流式细胞仪CBA方法检测小鼠血浆中IL-6、TNF-α、IFN-γ、巨噬细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、IL-12、IL-10等细胞因子浓度。结果机械通气3h后小鼠心率[(521±13.40)次/min]较对照组心率[(431±20.14)次/min]明显升高(P<0.05)、R波振幅(0.44±0.0194)较对照组(0.47±0.0239)明显降低(P<0.05);机械通气组小鼠CD11b+髓系细胞比例[CD11b+CD19-/CD45+,外周血(33.2±7.75)%,肺组织(37.9±8.51)%]较对照组[外周血(22.9±5.07)%,肺组织(16.2±3.42)%]明显上升(P<0.05),升高的髓系细胞以粒细胞为主,单核细胞比例变化不明显;血浆中IL-6、TNF-α、MCP-1浓度分别为:(5.8±17.2)pg/ml、(16.8±2.16)pg/ml、(114.6±90.50)pg/ml,而对照组相应细胞因子的浓度均小于浓度标准曲线最小值(记为0pg/ml)。结论机械通气后小鼠出现明显缺氧的肺损伤表现,其血浆中炎性细胞因子IL-6、TNF-α、MCP-1浓度明显升高,肺组织的免疫损伤可能主要为髓系细胞中粒细胞介导。     

酵母双杂交技术筛选人胰腺细胞中HCV 1b NS3结合蛋白基因

目的:应用酵母双杂交技术筛选人胰腺cDNA文库中与HCV 1b亚型非结构蛋白NS3相互作用的结合蛋白的编码基因, 为进一步研究HCV影响糖、脂代谢机制奠定实验基础.方法:扩增人胰腺cDNA文库并纯化鉴定, 纯化后的文库质粒转化酵母菌Y187; 构建诱饵质粒PGBKT7-NS3并转化酵母菌AH109, 在色氨酸缺陷型培养基(SD/-Trp)上筛选阳性菌落.应用酵母双杂交系统3将阳性重组AH109菌株与重组酵母菌株Y187进行配合, 在四缺培养基(SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade)和铺有X-α-gal的四缺培养基上进行筛选, 提取蓝色酵母菌落质粒, 电转化大肠埃希菌DH5α后提取质粒测序,对测序结果进行序列比对和分析.结果:成功构建人胰腺cDNA文库和pGBKT7-NS3重组质粒; 将pGBKT7-NS3质粒转化AH109酵母菌株后, 并从人胰腺cDNA文库中筛选出11种与HCV NS3蛋白相结合的蛋白基因.结论:筛选出的与HCV NS3蛋白结合的胰腺蛋白基因中, 部分与2型糖尿病、肝脏脂肪变性密切相关.     

三肽化合物酪丝亮肽抗肿瘤作用及对单核巨噬细胞激活作用机制

目的: 观察三肽化合物酪丝亮肽的抗肿瘤作用,探讨其对单核巨噬细胞的激活作用.方法: 观察YSL对人肝癌BEL-7402裸鼠移植瘤的抑制作用;观察YSL对体外培养BEL-7402细胞体系的抑制作用;观察YSL对PEMφ杀伤肿瘤细胞BEL-7402及B16-F10的影响;观察YSL对PEMφ分泌合成IL-1β,TNF-α和NO等细胞毒效应分子的影响.结果: YSL能显著抑制BEL-7402移植瘤裸鼠的肿瘤生长,给药剂量为160 μg/(kg*d)时疗效最显著,抑制率为44.03%;YSL体外对BEL-7402细胞生长有一定的抑制作用,与阴性对照组比较有显著性差异(P<0.05);YSL能增强裸鼠PEMφ对BEL-7402,B16-F10杀伤作用,与生理盐水对照组相比有显著性差异(P<0.05);YSL能增强Balb/c小鼠PEMφ对BEL-7402,B16-F10杀伤作用,与生理盐水对照组相比有显著性差异(P<0.05);YSL能促进小鼠PEMφ分泌合成细胞毒效应分子IL-1β,TNF-α和NO,与生理盐水对照组相比有显著性差异(P<0.05).结论: YSL能够抑制BEL-7402的增殖,增强单核巨噬细胞的细胞毒功能,促进细胞毒效应分子IL-1β,TNF-α和NO的分泌合成.     

应用基因表达谱芯片技术筛选GABA作用下肝星状细胞差异表达基因

目的:应用基因芯片技术检测γ-氨基丁酸(GABA)对肝星状细胞(HSC-T6)基因表达谱的影响.方法:10μmol/L的GABA作用于HSC-T6细胞48 h,提取mRNA,逆转录为cDNA.双PBS作用的HSC-T6细胞为对照,进行cDNA芯片分析.结果:在4096个基因表达谱的筛选中,发现有11个基因表达水平显著上调,26个基因表达水平显著下调.结论:成功地应用基因芯片筛选GABA作用下肝星状细胞差异表达基因,证明GABA对肝星状细胞的表达谱有显著作用.     

hHGF转染HepG2细胞后基因表达谱差异筛选

目的:构建hHGF真核表达载体,并在HepG2细胞中表达,筛选其对HepG2细胞的差异表达基因.方法:构建pcDNA3.1(-)-hHGF载体,测序鉴定:转染HepG2细胞后蛋白免疫印迹检测:运用基因表达谱芯片技术,筛选pcDNA3.1(-)-hHGF和pcDNA3.1(-)载体分别转染HepG2细胞后,提取mRNA并逆转录为cDNA,经表达谱芯片分析差异表达基因.结果:构建的表达载体经酶切和测序确定;转染HepG2细胞后hHGF表达经蛋白免疫印迹证实;经20000个基因的表达谱芯片分析发现,其中有430个基因表达水平显著上调,88个基因表达水平显著下调.结论:筛选出HGF转染HepG2细胞后的差异表达基因,对其在肝细胞中多种作用机制研究提供了重要依据.