抗人抗凝血酶Ⅲ单克隆抗体的制备

抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)是血浆中抑制凝血的关键物质,约占血浆总抗凝血酶活性的50%～70%,它可直接抑制凝血酶,也可与凝血酶形成复合物(TAT),抑制多种凝血因子的活性[1].动物实验显示,在内毒素休克、弥散性血管内凝血(DIC)鼠动物模型中,DIC早期血清AT-Ⅲ水平下降较其它DIC指标出现早,而且在DIC发病后1小时内注射AT-Ⅲ,结果证实有预防或延缓DIC的治疗作用[2].     

过敏原特异性IgE抗体实验室检测及其临床应用

摘要：过敏原特异性IgE(sIgE)抗体检测对过敏性疾病的诊断和治疗具有重要价值。从待检抗体角度分析，sIgE抗体检测分为sIgE抗体物质含量检测和sIgE抗体病理活性检测，前者采用免疫化学(血清学)方法，后者采用细胞生物学方法。血清学检测为临床实验室常用方法，涉及斑点-酶免疫吸附试验(Dot-ELISA)、ELISA和荧光酶免疫分析(FEIA)等标记免疫技术。从已知抗原角度分析，sIgE抗体检测分为混合组分诊断(MRD)和单一组分诊断(CRD)。CRD可获得sIgE抗体谱结果，为临床提供更丰富的诊断信息。无论采用何种标记免疫技术，sIgE抗体实验室检测已从定性分析发展到定量分析，且分析灵敏度不断提升，这将逐渐满足临床诊断的需求，提高过敏性疾病的诊断和治疗水平。     

兔肺动脉内皮细胞DNA损伤检测方法的建立及初步应用

[目的]建立兔肺动脉内皮细胞单细胞电泳方法检测DNA的损伤并初步观察肺心病患者血清对兔肺动脉内皮细胞DNA的损伤作用。[方法]用胶原酶Ⅰ消化分离获得兔肺动脉内皮细胞(RPAECs)，将血管内皮细胞与含不同浓度肺心病患者和正常人血清的培养基共同孵育12h，收集细胞利用溶解液破坏细胞膜，再用高盐溶液将细胞DNA解链，然后对其进行琼脂糖凝胶电泳(AGE)。电泳后经溴乙啶染色并在荧光显微镜下观察彗星样的电泳形状，判断细胞DNA的损伤程度。[结果]高浓度的肺心病患者血清作用后的内皮细胞，可见彗星样电泳形状。[结论]高浓度肺心病患者血清对兔肺动脉内皮细胞的DNA有损伤。     

不同方法提取和处理中华绒螯蟹组织蛋白的过敏原组分分析

目的:分析不同方法提取和处理中华绒螯蟹组织的蛋白组分及过敏原组分,为检测中华绒螯蟹特异性IgE提供最佳抗原制备方法。方法:分别采用PBS提取法、丙酮抽提法和裂解液提取法提取中华绒螯蟹组织蛋白,并用裂解液提取法分别提取加热前、后的蟹蛋白;采用SDS-PAGE和双向电泳分析蛋白组分,采用Western blot分析过敏原组分。结果:不同方法提取的蛋白组分、sIgE与蛋白结合的强度和所识别的蛋白组分存在一定差异。PBS提取液蛋白主要分布在94、85、76、66、18kD,丙酮提取液蛋白主要分布在94、85、76、36 kD,裂解液提取液蛋白主要分布在200、125、51、43、38 kD。PBS提取液与sIgE结合的阳性反应条带主要分布在76、66、53、43、38、18 kD;丙酮提取液主要分布在94、76、66、50、43、38、18 kD;裂解液提取液主要分布在200、105、94、76、43、38、18 kD。加热前、后蟹蛋白过敏原组分差别不大。结论:裂解液提取法提取的中华绒螯蟹过敏原更适于制备测定特异性IgE的抗原。加热不影响蟹过敏原组分和与特异性IgE的结合活性。     

天津地区1670例皮肤病患儿过敏原流行特征分析

目的 分析天津地区湿疹、荨麻疹患儿过敏原特异性免疫球蛋白E(sIgE)定量检测结果,为临床诊疗提供参考.方法 采用酶联免疫捕获法对2019年8月至2020年3月就诊于天津市儿童医院的1023例湿疹、647例荨麻疹患儿进行吸入及食物过敏原sIgE检测,并对检测结果进行统计分析.结果 1670例患儿检出过敏原sIgE阳性1254例,检出率为75.09％;检出食物过敏原sIgE阳性1185例(70.96％),检出吸入过敏原sIgE阳性739例(44.25％).食物过敏原sIgE检出前3位由高到低依次为鸡蛋白/蛋黄(943例,56.47％)、牛奶(533例,31.92％)、小麦面粉(336例,20.12％),吸入过敏原sIgE检出前3位由高到低依次为屋尘(561例,33.59％)、交链孢霉(182例,10.90％)、粉尘螨(127例,7.60％).不同性别患儿过敏原sIgE检出率比较,差异无统计学意义(P>0.05);1～<4岁患儿鸡蛋白/蛋黄、屋尘、牛奶、小麦面粉sIgE检出率最高,4～6岁患儿交链孢霉sIgE检出率最高,>6岁患儿粉尘螨sIgE检出率最高.荨麻疹患儿屋尘sIgE检出率高于湿疹患儿,其余几种过敏原sIgE检出率与湿疹患儿比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 该研究结果在一定程度上反映了湿疹、荨麻疹患儿过敏原sIgE的流行特征,有助于疾病的诊断和防治.     

贫血患者大脑静息葡萄糖代谢改变的研究

目的 探讨不同程度贫血患者大脑静息状态下葡萄糖代谢改变的特点。 方法 回顾性分析2016年12月至2019年4月经郑州大学人民医院临床诊断为贫血的51例患者的脑部18F-氟脱氧葡萄糖（FDG）PET/CT影像资料,其中男性16例、女性35例,年龄21~60（41.13±9.78）岁。根据WHO和相关文献中的贫血诊断标准将患者分为轻度贫血（90 g/L~正常下限）、中度贫血（60~90 g/L）、重度贫血（30~60 g/L）3组。将56名同期行全身PET/CT检查的健康体检者作为对照组,其中男性29名、女性27名,年龄19~58（41.96±9.27）岁。采用统计参数图（SPM）8软件对贫血患者及健康对照者的PET图像进行处理与分析。分别将贫血患者与健康对照者,轻度、中度、重度贫血患者间的脑PET图像进行体素对体素的两独立样本t检验,得到各自组间的脑葡萄糖代谢差异分布图,同时利用xjView软件对差异有统计学意义的脑区进行立体定位分析及体素值定量分析,得出各异常区域的t值。 结果 与健康对照者比较,贫血患者脑PET图像表现为区域性大脑静息葡萄糖代谢减低,累及的脑区包括双侧额上、中、下回,右侧颞叶下回和右侧顶下小叶,未见明显代谢增高脑区,总体素数为3705个（t=5.01~5.85,均P<0.05）。与轻度贫血患者比较,中度贫血患者脑代谢减低区见于双侧额下回、右侧额中回、右侧颞叶下回和右侧顶下小叶,总体素数为832个（t=5.22~5.86,均P<0.05）;重度贫血患者脑代谢减低区见于双侧额上回、双侧额中下回、右侧颞叶下回和右侧顶下小叶,总体素数为1834个（t=5.42~6.05, 均P<0.05）。与中度贫血患者比较,重度贫血患者脑代谢减低区见于左侧额上回、左侧额中下回、右侧额中回、右侧颞叶下回和右侧顶下小叶,总体素数为1598个（t=5.72~6.48,均P<0.05）。 结论 贫血患者大脑静息状态下葡萄糖代谢改变以区域性葡萄糖代谢减低为主,代谢减低区多涉及情感、认知等相关的脑区,且随着贫血程度的加重,脑代谢减低区的范围扩大。     

对梭子蟹过敏患者血清特异性IgE抗体针对的过敏原的异质性分析

目的分析梭子蟹过敏患者血清特异性IgE(sIgE)抗体所针对过敏原的异质性。方法提取梭子蟹蛋白质溶液,经酶免疫印迹技术,分析50例梭子蟹过敏患者血清sIgE与梭子蟹蛋白质发生特异性结合的不同区带,并分析个体间的差异。结果针对分子量(Mr)36 000蛋白质的sIgE在患者人群中出现的频率高达80%(40/50),针对Mr 48 000、43 000蛋白质的sIgE分别达62%(31/50)和50%(25/50)。反应条带为3条及3条以上的患者总数占92%(46/50),6条反应条带的患者达30%(15/50)。结论对梭子蟹过敏患者血清中sIgE所针对的过敏原组分存在明显异质性。     

多重荧光定量PCR检测婴幼儿腹泻病毒感染及其临床应用

目的:建立一种能同时检测婴幼儿腹泻粪便中常见病毒的多重荧光定量 PCR技术。方法:根据GenBank上几种病毒基因组保守序列设计引物序列,建立多重荧光定量PCR方法,对所建立的多重荧光定量PCR方法的特异性、灵敏性及重复性进行验证;并以所建立的方法对150例婴幼儿病毒性腹泻患者粪便标本进行检测。结果:所建立的多重荧光定量PCR检测方法具有很好的特异性,灵敏性检测可达102拷贝/mL,检测不同病毒核酸浓度各自的检测 Ct 值标准差均较小,变异系数均低于1.0%,具有较好的重复性;检测150 份粪便标本,多重荧光定量 PCR 的检出率为36%,胶体金方法检出率为38.67%,两者比较差别无统计学意义（χ2= 6.91,P > 0.05）。多重荧光定量 PCR方法中轮状病毒、腺病毒、诺如病毒、星状病毒的检出率分别为12.67%、6.00%、13.33%和4.00%,测序结果与已知病毒株基因都具有高度同源性。结论:所建立的多重荧光定量PCR方法快速、特异、灵敏,可以作为临床病原诊断的一个重要工具且适用于流行病学调查研究。     

酪丝亮肽对人肝癌BEL-7402细胞的抑制作用及对NK细胞杀伤活性的影响

[目的]研究三肽化合物酪丝亮肽(tyroserleutide,YSL)对人肝癌BEL-7402裸鼠移植瘤的抑制作用及对自然杀伤细胞(NK细胞)杀伤活性的影响。[方法]建立人肝癌BEL-7402裸鼠移植瘤模型,观察YSL对肿瘤生长的抑制作用;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测YSL对正常小鼠及人肝癌BEL-7402荷瘤鼠的NK细胞杀伤活性的影响。[结果]YSL[160μg(/kg·d)]能抑制BEL-7402的生长,肿瘤抑制率为72.23%,且能增强BEL-7402荷瘤裸鼠及正常小鼠NK细胞杀伤活性,与生理盐水组相比均具有显著性差异(P<0.05)。[结论]YSL对人肝癌BEL-7402裸鼠移植瘤有抑制作用,并具有增强正常及荷瘤小鼠NK细胞杀伤肿瘤细胞活性的作用。