携带SLC基因的Birc5-siRNA质粒载体的构建及鉴定

目的：构建携带SLC基因的Birc5‐siRNA质粒载体,为肿瘤靶向治疗研究提供基础。方法使用Ambion公司siRNATarget Finder设计的Birc5 mRNA干扰序列,将Birc5‐siRNA插入载体 PEGFP6‐1后转化大肠埃希菌扩增培养,提取质粒;将SLC插入质粒pGenesil‐8后转化细菌扩增培养,提取质粒;挑取酶切鉴定正确的质粒转化菌液测序鉴定;采用分子克隆技术构建特异性沉默Birc5且携带SLC基因的质粒,命名为pgsiRNA‐Birc5＋SLC。结果质粒Birc5能被 EcoRⅠ酶切出1条约400 bp的DNA条带,说明Birc5‐siRNA 已插入质粒载体PEGFP6‐1;pGenesil‐8‐SLC能被BglⅡ＋ XbaⅠ酶切出1条约430 bp的DNA条带,说明SLC插入正确;酶切鉴定正确的质粒转化菌液Birc5‐siRNA和SLC测序结果显示均为插入正确的克隆质粒;经酶切鉴定分析显示pgsiRNA‐Birc5＋SLC符合酶切鉴定结果,表明携带SLC基因的Birc5‐siRNA质粒载体构建成功。结论成功构建了携带SLC基因的Birc5‐siRNA质粒,为进一步研究靶向沉默肿瘤Birc5基因并趋化淋巴细胞抗肿瘤研究提供了工具和基础。     

心内科病房夜间输注多巴胺的管理

总结238例微泵输注多巴胺患者夜间护理。认为微泵输注多巴胺患者在夜间存在较多不安全因素,护士要加强责任心,认真交接班,保证剂量准确无误,保持管道通畅,防止药液外渗,密切观察用药效果,保证患者血压平稳,严防药物骤然增多或减少,提高夜间护理质量。     

老年心力衰竭患者服用地高辛依从性原因分析及护理

目的探讨影响地高辛药物依从性的因素。方法通过对100例老年心衰服用用地高辛的患者采用询问、电话随访、调查问卷的方法,评价影响地高辛药物依从性的因素,并实施有效的护理对策。结果影响地高辛药物依从性的因素有病人的健康信念模式、相关知识、药物的副反应等。结论除了让患者被动地遵从医嘱外,提高地高辛药物依从性,可减少并发症,提高生活质量。     

阿莫西林钠舒巴坦钠和长春西丁存在配伍禁忌

阿莫西林钠舒巴坦钠是由阿莫西林钠和舒巴坦钠组成的复方制剂,是抗生素和β-内酰胺酶抑制剂的复合剂,是广谱抗菌药。适用于上呼吸道感染、下呼吸道感染、泌尿系统感染、盆腔感染、口腔感染等。长春西丁主要用于改善脑梗死后遗症、脑出血后遗症、脑动脉硬化等,对大脑血管有选择性作用,通过增加脑血流量,改善大脑氧的供给。在临床输液过程中,笔者发现这2种药物存在配伍禁忌,现报道如下。     

EGFR特异性单链抗体与靶细胞结合的特异性

目的:检测EGFR特异性单链抗体F4-scFv与EGFR阳性及阴性细胞结合特性。方法:提取细菌周质腔蛋白经N i-NTA柱纯化F4-scFv;采用流式细胞术及W estern b lot检测F4-scFv与EGFR阳性及阴性细胞结合的特异性。结果:N i2+柱纯化的F4-scFv经SDS-PAGE可见分子量为36 kDa单一条带,F4-scFv可与EGFR阳性细胞CHO-EGFR-GFP1、A431及MDA-MB-231特异性结合,而不与EGFR阴性细胞CHO-K1及SKOV3结合。结论:F4-scFv可与天然表达EGFR的细胞特异性结合,为其靶向抗肿瘤研究奠定了基础。     

抗人转铁蛋白受体单克隆抗体体外抗瘤效应研究

目的:探讨抗人转铁蛋白受体(TfR)单克隆抗体(mAb)体外抗瘤效应.方法:采用CFSE染色、PI-Annexin Ⅴ染色和PI染色,通过流式细胞术分析抗人TfR mAb对高表达的人肝癌细胞系HepG2和人乳腺癌细胞系MCF-7增殖、凋亡和周期的影响;通过MTT法检测抗人TfR mAb联合化疗药物对HepG2和MCF-7细胞增殖的抑制作用.结果:抗人TfR mAb能抑制HepG2和MCF-7细胞的增殖,并诱导其凋亡和S期阻滞;与化疗药物联用可增强其对肿瘤细胞增殖的抑制作用.结论:抗人TfR mAb具有良好的体外抗瘤效应.     

抗CD71人-鼠嵌合抗体对活化淋巴细胞的效应

目的　通过体外实验探讨抗CD71人 鼠嵌合抗体对活化淋巴细胞效应的影响 ,并与其鼠源性单克隆抗体进行比较。方法　以丝裂原诱导的人外周血单个核细胞 (PBMC)为靶细胞 ,测定嵌合抗体和鼠源性单抗对其增殖抑制率 ;在新鲜补体存在下 ,测定补体依赖性嵌合抗体介导的细胞毒效应(CDC)。以EBV转化的B细胞为刺激细胞 ,测定两种抗体对其诱导的同种异体PBMC的增殖抑制率 ;以同种异体的PBMC为刺激细胞 ,测定两种抗体在单向、双向混合淋巴细胞培养 (MLC)中的增殖抑制率。结果　嵌合抗体和鼠源性单抗均可明显抑制丝裂原诱导的PBMC的增殖反应 ,且二者抑制率差异无显著性(P >0 .0 5 ) ,其抑制作用随抗体浓度增加而增强 ,PBMC和丝裂原共同孵育 12h后加入抗体的增殖抑制效应最明显 ;在新鲜补体存在下 ,嵌合抗体对丝裂原诱导增殖的PBMC具有CDC作用 ,而鼠源性单抗CDC作用较弱 ;两种抗体对混合淋巴细胞培养反应有明显的抑制作用 ,且嵌合抗体组抑制率明显高于鼠源性单抗组 (P <0 .0 5 )。结论　抗CD71人 鼠嵌合抗体在体外实验中可抑制淋巴细胞的活化及其效应 ,其作用明显强于抗CD71鼠源性单克隆抗体。     

CTLA4-Ig在树突状细胞中的表达及效应研究

目的 获得CTLA4-Ig转基因修饰的DC细胞,分析表达产物CTLA4-Ig对T细胞活化功能的影响。方法 采用脂质体转染方法将CTLA4-Ig表达载体转入DC细胞,通过ELISA法鉴定转染DC细胞48和72h培养上清液及稳定表达的培养上清液,分离Balb/c小鼠和C57BL/10J小鼠淋巴细胞为反应细胞和刺激细胞,观察CTLA4-Ig对同种细胞混合培养反应的影响。结果 将鼠CTLA4-Ig表达载体转入DC细胞,获得瞬时表达及稳定表达,CTLA4-Ig可抑制单向混合淋巴细胞反应,且效应亦呈剂量依赖性。结论 鼠CTLA4-Ig表达产物对同种细胞刺激的增殖反应有抑制作用,其抑制作用随表达载体转染细胞培养上清液的增加而增强。同时获得了稳定表达CTLA4-Ig融合蛋白的CTLA4-Ig转基因修饰的DC细胞,为以后的工作奠定了基础。     

抗转铁蛋白受体双价抗体的构建、表达及鉴定

目的：抗转铁蛋白受体（TfR）双价抗体（bsFv）构建、表达及其与细胞结合的活性鉴定。方法：以抗TfR的单链抗体（scFv）为模板，设计引物引入中问连接肽（G4S）及酶切位点AscI，通过PCR方法扩增两条scFv片段，将其连接并克隆至原核表达载体pAB1，转化大肠杆菌TG1，阳性菌经IPTG诱导表达，FCM检测bsFv与K562，HepG2肿瘤细胞结合的活性及特异性。结果：酶切鉴定及DNA测序证明该bsFv构建成功；SDS-PAGE、Westernblot鉴定表明表达蛋白分子量与bsFv理论值一致；FCM结果证明bsFv可与K562，HepG2肿瘤细胞特异性结合，且结合的阳性率较scFv有所提高。结论：成功构建了抗转TfR的bsFv，且能与K562，HepG2肿瘤细胞特异性结合。     

小鼠诱导性共刺激分子-Ig在小鼠树突状细胞中的表达及其效应研究

目的 获得mICOS-Ig基因修饰的小鼠DC，分析表达产物mICOS-Ig对T细胞活化的影响。方法 采用电转染方法将mICOS-Ig表达载体转入小鼠DC，通过ELISA法检测转染小鼠DC 60和96h以及稳定表达的培养上清；观察mICOS-Ig对同种混合细胞培养反应的影响。结果 ELISA法检测证明将mICOS-Ig表达载体转入小鼠DC，获得瞬时表达及稳定表达，mICOS-Ig可抑制单向混合淋巴细胞反应，抑制率达40％，其效应呈剂量依赖性。结论 获得了稳定表达mICOS-Ig融合蛋白的小鼠DC，mICOS-Ig表达产物对同种细胞刺激的增殖反应有抑制作用。