双靶向组织特异性HSV-tk/GCV抗瘤系统构建及体外效应研究

目的 构建高靶向性基因转移及基因表达系统,并研究其介导HSV-tk/GCV自杀基因系统对人肝癌细胞的体外杀伤作用。 方法 通过重组DNA技术分别构建anti-TfR ScFv-GAL4融合蛋白表达载体ScFv-GAL4-pET28a及含AFP启动子、GAL4特异性识别序列(GAL4rec)的HSV-tk真核表达载体pEBAF/tk-GAL4rec。前者经IPTG诱导表达获取anti-TfR ScFv-GAL4融合蛋白作为非病毒转运载体,利用受体介导内吞作用介导pEBAF/tk-GAL4rec质粒转染表面均高表达TfR的人肝癌细胞株HepG2、SMMC7721及人肺癌细胞株A549,潮霉素筛选阳性细胞,扩大培养,分别命名为HepG2/tk、SMMC7721/tk及A549/tk,然后通过MTT法检测GCV对它们的杀伤作用。 结果 双酶切鉴定及SDS-PAGE电泳证明非病毒转移载体anti-TfR ScFv-GALA融合蛋白及重组pEBAF/tk-GAL4rec真核表达质粒构建成功。体外杀伤实验中,表面TfR阳性且高分泌AFP(845 ng/ml)的HepG2/tk细胞对GCV很敏感,且抑制率与GCV浓度及作用时间呈正相关;而低分泌AFP(2ng/ml)的SMMC7721/tk细胞对GCV低度敏感;表面TfR阳性但不分泌AFP的A549/tk细胞则对前药不敏感。 结论 双靶向组织特异性HSV-tk/GCV抗瘤系统构建成功,并显示出很好的靶向性。     

TLR4基因多态性与疾病易感性的研究进展

Toll样受体是近年来发现的跨膜信号传递受体,作为一种重要的模式识别受体(PRRs)在多种疾病中起着重要的作用.基因多态性影响机体对疾病的遗传易感性.TLR4作为跨膜受体与多种疾病有着密切的联系,越来越多数据表明,TLRs单核苷酸多态性(SNPs)与多种疾病遗传易感性相关,本文就TLR4 SNPs与多种疾病的遗传易感性之间相关性进行综述.     

抗TfR-scFv-EGFP融合蛋白的构建与表达

目的:抗转铁蛋白受体单链抗体(TfR-scFv)-EGFP融合蛋白真核表达载体的构建与表达.方法:设计两对引物引入连接肽(Gly4Ser)3以及酶切位点HindⅢ和BamH Ⅰ,采用重叠延伸PCR扩增与构建具有前导肽的L-VH-Linker-VL单链抗体基因,亚克隆至pEGFP-N1,转染COS-7细胞,倒置相差荧光显微镜下观察荧光蛋白表达,流式细胞术(FCM)检测细胞分泌上清与乳腺癌细胞MCF-7及黑色素瘤细胞A375结合活性.结果:测序表明获得了正确的L-VH-Linker-VL单链抗体基因序列;亚克隆至pEGFP-N1后,表达载体转染COS-7细胞,经荧光显微镜观察转染细胞,及通过流式细胞术(FCM)检测细胞分泌上清,证实抗TfR-scFv-EGFP融合蛋白在转染细胞中分泌性表达,并能够与天然高表达TfR的细胞特异性结合.结论:抗TfR-scFv-EGFP融合蛋白真核表达载体构建成功,其表达产物具有与TfR阳性细胞结合的活性.     

抗慢性B淋巴细胞白血病患者血清IgM McAb的纯化及其酶结合物的制备

应用DEAE-22纤维素离子交换柱和正辛酸法从接种杂交瘤细胞BALB/C 鼠的腹水或腹腔肿瘤浸出液中纯化抗慢性淋巴细胞白血病(B-CLL)患者血清IgM 单克隆抗体(McAb),纯化物经巴比妥琼脂电泳,SDS-PAGE 鉴定为高纯度。ELISA 法证明具有高效价、高度特异性。采用过碘酸钠氧化结合法制备的辣根过氧化酶 HRPO-McAb 结合物的免疫活性、酶与蛋白质二者mol比、标记率均达到质量要求。     

Localization and Biodistribution of Conjugate ATG－Dex－DNR in Nude Mice as Models for Human Leukemia

ＬｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎａｎｄＢｉｏｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆＣｏｎｊｕｇａｔｅＡＴＧ－Ｄｅｘ－ＤＮＲｉｎＮｕｄｅＭｉｃｅａｓＭｏｄｅｌｓｆｏｒＨｕｍａｎＬｅｕｋｅｍｉａＺＨＡＮＧＤｏｎｇ－ｈｕａ（张东华），ＴＡＮＧＪｉｎ－ｚｈｉ（唐锦治），ＬＩＺ...     

PHA、抗CD_3单克隆抗体、LI-2诱导牌细胞培养上清液抗肿瘤效应的研究

本文探讨了PHA、CD_3单克隆抗体、IL-2体外诱导正常人脾细胞培养上清液抗肿瘤效应及其对LAK细胞抗肿瘤效应的增强作用。结果显示，IL-2诱导脾细胞的培养上清液在体外不仅具有直接杀伤肿瘤细胞效应，并且能增强LAK细胞的抗肿瘤作用。PHA、抗CD_3单克隆抗体和IL-2联合刺激可增强脾细胞培养上清液杀伤肿瘤细胞效应。     

肺动脉碎栓联合下腔静脉滤器植入治疗急性肺动脉栓塞的围手术期护理

总结31例肺动脉碎栓联合下腔静脉滤器植入治疗急性肺动脉栓塞患者的护理。主要护理措施是心理护理,密切观察病情,做好术前准备,术中熟练配合医生进行操作,术后观察急性肺栓塞症状改善情况,做好抗凝药物的护理和术后相关护理。本组经治疗后治愈25例、显效4例、好转2例。     

动脉化疗栓塞治疗宫颈癌23例临床分析

本院2003年4月-2006年8月收治了Ⅰb2期～Ⅱb期宫颈癌患者23例，对其行术前超选择动脉灌注化疗栓塞（以下简称动脉化疗栓塞），现将观察结果报道如下。[第一段]     

抗人IgM单克隆抗体的制备及其特征研究

以人IgM作为抗原免疫Balb/C小鼠,采用杂交瘤技术获得5株分泌抗人IgM单抗的杂交瘤细胞株.通过酶联免疫吸附试验、免疫双向扩散试验证明:该组单抗仅与人IgM起反应,而不与其他各类免疫球蛋白反应。间接免疫荧光试验证明:该组单抗测得不同人群外周血淋巴细胞阳性数与用抗B细胞单抗和直接免疫荧光法测得的结果接近.免疫转印试验证明抗体作用的分子量为50～70kd(dalten法定单位为u,换算系数0.9921,下同).提示为IgM.本文还对单抗应用价值进行了讨论。