细胞核蛋白质磷酸化和c-myc转录的变化在胃粘膜损伤修复中的作用

1 材料和方法 1.1 材料 Tyrphostin-51、PD098059、N-羟乙基哌嗪-N'-2-乙磺酸(HEPES)、钒酸钠(Na_3VO_4)、亮抑蛋白酶肽(leupeptin)、抑蛋白酶肽(aprotinin)、1,10-菲咯啉(1,10-phenanthroline)、二硫苏糖醇(DTT)、精胺、亚精胺、NP-40、三硝基甲苯(Triton X-100)和苯甲基磺酰氟(PMSF)均购自美国Sigama公司,蛋白质定量检测试剂盒(Protein assay kit)购自美国Bio-Rad公司,α-~(32)p-UTP和γ-~(32)p-ATP购自北京亚辉生物试剂公司,2,5-二苯基唑(PPO)和1,4-双-[5-酚-2-恶唑]-苯(POPOP)购自上海化学试剂厂,其他试剂为国产分析纯。LS6500型闪烁仪为美国Beckman公司产品,透析袋购自北京东方试剂仪器公司,(?)成年SD大鼠(220g～250g,第一军医大学动物所提供),禁食24h,以4mL(20mmol/L)去氧胆酸钠灌胃损伤胃粘膜,应用PTK抑制剂Tyrphostin-51(300μg·kg~(-1))和MAPKK抑制剂     

信号调节蛋白α1在胆管细胞性肝癌中的表达及生物学意义

目的 观察信号调节蛋白Sirp α1在胆管细胞性肝癌中的表达。方法 选取手术切除胆管癌和癌旁组织24例，10％甲醛固定24h后石蜡包埋切片，采用免疫组织化学方法测定胆管癌和癌旁组织Sirp α1表达。结果 Sirp α1在胆管癌细胞胞浆散在淡黄色表达，癌旁胆管细胞胞浆棕黄色表达，表达差异显著（P〈0．05），其表达程度与胆管癌肿瘤大小、组织分化程度、有无癌栓和子灶和淋巴结转移与否有关，肿瘤越大和分化程度越差，伴有子灶、胆管和门静脉癌栓者，Sirp α1表达越低（P〈0．05），而与血AFP和CA19-9高低无关（P〉0．05）。结论 Sirp α1作为一种负向调控因子参与了胆管细胞性肝癌的发生发展，但关于其详细调控机制尚待进一步研究。     

幽门螺杆菌研究的主要进展和趋势

1　Ｈ .ｐｙｌｏｒｉ的微生物学和流行病学1 1　Ｈ .ｐｙｌｏｒｉ的基因型　目前发现Ｈ .ｐｙｌｏｒｉ是基因型易变的细菌。目前研究的重点主要是Ｈ .ｐｙｌｏｒｉ的ｃａｇ致病岛、ｖａｃＡ基因、尿素酶Ａ基因、鞭毛素Ａ基因、粘附素基因及耐药基因 ,以期明确Ｈ .ｐｙｌｏｒｉ的致病性 ,进而达到免疫防治或减少Ｈ .ｐｙｌｏｒｉ的耐药性产生 ,提高Ｈ .ｐｙｌｏｒｉ根除疗效的目的。但尚未能根据Ｈ .ｐｙｌｏｒｉ的基因型对临床Ｈ .ｐｙｌｏｒｉ菌株进行系统分类 ,仅能根据Ｈ .ｐｙｌｏｒｉ的ｃａｇ致病岛和ｖａｃＡ基因型将Ｈ .ｐｙｌｏｒｉ…     

蛋白酪氨酸激酶活性变化在大鼠胃粘膜损伤修复中的作用及机理

目的 探讨大鼠胃粘膜损伤后蛋白酪氨酸激酶（ＰＴＫ）活性的变化及通过影响细胞核蛋白质磷酸化和转录因子激活蛋白（Ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ １，ＡＰ－１）的活性对胃粘膜修复的作用及意义。方法 以２０ｍｍｏｌ／Ｌ去氧胆酸钠（ＤＯＣ）给ＳＤ大鼠灌胃，损伤胃粘膜，损伤后３小时取胃，抽提分离细胞膜和细胞核组分，以膜结合法检测细胞膜ＰＴＫ活性和细胞核蛋白质的磷酸化，以凝胶电泳漂移实验检测ＡＰ－１活性，     

激活视黄醇类X受体抑制轻度氧化低密度脂蛋白诱导的小鼠巨噬细胞系RAW264.7增殖

目的 探讨激活视黄醇类X受体(RXR)对轻度氧化低密度脂蛋白(LoxLDL)诱导巨噬细胞增殖的影响及其作用机制.方法 饥饿处理后的小鼠巨噬细胞系RAW264.7经LoxLDL(20μg/ml)刺激24 h诱导细胞增殖,干预组同时给予不同浓度的RXR特异性激动剂顺式维甲酸9(9-cisRA),四甲基偶氮唑蓝方法检测细胞活力,脱氧尿嘧啶核苷免疫组化方法检测细胞DNA合成,流式细胞仪PI单染法检测细胞凋亡,Western印迹方法检测Nur77和RARB蛋白表达.结果 LoxLDL诱导24 h后,细胞活力和DNA合成(A值)分别升高0.79±0.12和1.81±0.31,RXR的特异性配体9-cisRA能够显著抑制LoxLDL的作用,在10-8mol/L和10-7mol/L浓度分别使细胞活力下降到0.43±0.10和0.26±0.07(P＜0.05),DNA合成升高为1.14±0.43和0.72±0.06(P＜0.05),且对细胞凋亡没有影响.Western印迹检测表明,孤儿核受体Nur77蛋白表达在LoxLDL刺激后显著升高5倍以上,9-cisRA显著下调Nur77表达,同时上调下游靶基因RARB蛋白表达.结论 激活核受体RXR能够显著抑制LoxLDL刺激引起的巨噬细胞增殖,其机制可能与调控RXR/Nur77异源二聚体及其下游靶基因RARβ有关.     

肝癌相关基因HCCA2的克隆及其与肝癌的相关性研究

目的　研究和克隆新的肝癌相关基因,探索肝癌发生的分子基础。方法　采用mRNA差异显示技术,分析肝细胞癌和癌旁组织间基因的差异表达情况,获得差异表达基因片断。用此基因片断作为探针,通过筛选胎盘cDNA文库,以获得该基因cDNA全长,并用Northern印迹杂交的方法,分析所获得的新基因在43对肝细胞癌、对应癌旁组织中的差异表达和在正常组织中的分布。结果　克隆了一个新的肝癌相关基因HCCA2的全长cDNA,其在人体正常组织中分布较为广泛,在正常肝组织中不表达。该基因在43对肝癌组织中表达的阳性率是79%(34/43)。它的表达与肝癌包膜的完整性、Ki-67蛋白的表达相关（P<0.01）。结论　肝癌差异表达新基因HCCA2可能与肝癌细胞的浸润和增殖能力有关。     

胃癌及癌前病变的中医分型与Hp感染、癌基因及抑癌基因表达的关系

根据中医理论将胃癌、异型增生、肠上皮化生、慢性胃炎各30例进行中医分型．分别为寒热夹杂21例，肝胃不和22例，胃阴不足29例，脾胃虚寒48例。出用ABC免疫组化法检测上述标本的C-myc、p21、p53，以改良Giemsa法检测HP．结果 脾胃虚寒型HP阳性率(72.9%)与寒热夹杂型阳性率(38.1％)、肝胃不和型阳性率(40.9％)比较有非常显差异(P<0.01)。C-myc，p21、p53阳性表达与HP感染、胃粘膜病变程度呈平行关系，各证型依次为脾胃虚寒>胃阴不足>肝胃不和>寒热夹杂。提示HP感染、癌基因及抑癌基因表达与胃癌及榭前病变中医分型有一定关系，有利于辨证辨病分型．     

9-顺式维甲酸抑制佛波酯诱导人单核细胞系THP-1向巨噬细胞分化

目的探讨视黄醇类X受体特异性激动剂9-顺式维甲酸对佛波酯诱导人单核细胞系THP-1向巨噬细胞分化的影响。方法体外培养人单核细胞系THP-1,经佛波酯诱导分化为巨噬细胞,同时给予9-顺式维甲酸对佛波酯诱导分化进行干预,通过相差显微镜观察细胞形态,MTT比色法检测细胞贴壁率,流式细胞仪检测与单核/巨噬细胞分化有关的细胞表面标志物CD11b和CD36的表达。结果9-顺式维甲酸干预后梭形、分支状细胞明显减少,与佛波酯单独作用组相比细胞贴壁率减少50%(P<0.01),细胞表面标志物CD11b和CD36分别减少50%和28%(P<0.01)。结论视黄醇类X受体特异性激动剂9-顺式维甲酸可明显抑制佛波酯诱导人单核细胞系THP-1向巨噬细胞分化。     

固、液体混合餐的胃排空研究

目的和方法:本文以~(131)I-BSA 和99mTc-DTPA 分别作为混合餐固、液体食物的标记物,检测35例慢性胃炎病人和10名健康志愿者的胃排空,其中两例受检者1周内进一步用~(99m)Tc-SC 复查固体排空,比较两次固体排空过程的相关性。在体外对上述3种放射性标记物在胃液、1mol/L NaCl 和0.1mol/L HCl 溶液中消化2小时,检测其稳定性。结果:~(131)I-BSA 和~(99m)Tc-SC 标记的固体食物经消化后的脱标率分别<2.87%和4.63%,~(99m)Tc-DTPA吸附于固相的吸附率<8.36%。固/液体排空曲线明显不同,固体排空有明显的延迟期,半排空时间较长,慢性胃炎病人固/液体排空时间均较正常对照组延长,两种固体标记物的排空曲线相似,相关性为 r=0.989(p<0.01),前、后两次排空相比,最大差值为9.2%,最小差值仅为0.8%。结论:~(131)I-BSA 作为固体标记物有较好的稳定性,可供临床选择用于胃排空的检测。     

慢性胃炎的中医辨证与胆汁返流关系的研究

通过研究胆汁返流和慢性胃炎证型间的关系，探讨胆汁返流各指标在中医分型、 证治中的应用价值并阐述各证型可能的发病机理。方法：将５９例慢性胃炎病人（胃镜下可见胆汁返 流者４２例．无返流者１７例）分为肝胃不和型（Ｕ型ｎ＝１９），东热夹杂型（Ｒ型，ｎ＝１５）．脾胃虚寒 型（Ｈ型，ｎ＝１９）和胃阴不足型（Ⅰ型，ｎ＝６）。１０名健康志愿者作为正常对照组（Ｃ组，ｎ＝１０）。检 测胃液胆酸（ＧＣ，μｇ／ｍｌ，ＲＩＡ法）、ｐＨ值、病理积分（ＲＦＩ，“１５分”法）和组织学ＨＰ。结果：Ｕ型病人 胃液 ＧＣ、ＰＨ和 ＲＦＩ明显高于其他各证型及 Ｃ组（ Ｐ ＜均０．０１ ），后者间 ＧＣ以及 ＰＨ无显著性差 异，但 ＲＦＩ以 Ｈ型的胃炎程度比 Ｒ型的重（ Ｐ ＜０． ０５），与 Ⅰ型间无显著性差异。幽门螺杆菌（ＨＰ） 感染与证型有关，以 Ｕ型的感染率最低，而 Ｒ型的感染率最高，明显高于其他各证型（ Ｐ ＜０． ０５～ ０． ０１）。以 ＧＣ＞５８ μｇ／ｍｌ，ｐＨ＞３． ０和ＲＦＩ＞９判断为病理性胆汁返流，则见Ｕ型的返流率明显高于 其他各证型（ Ｐ均＜０． ０１）。胆汁返流性胃炎以实证为主（占７０． ４％），其中又以 Ｕ型（５５ ６％）明显 高于Ｒ型（１４．８％）；而虚证