c-Jun氨基末端激酶在小鼠T细胞增殖中的作用

目的研究c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)在小鼠T细胞增殖中的作用。方法以活体染料羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFSE)染色,建立了在多克隆刺激剂刀豆蛋白A(Con A)刺激下评价小鼠T细胞增殖的模型,通过流式细胞术分析JNK的一种新的特异性抑制剂SP600125在不同剂量、不同时间对T细胞增殖的影响,并应用CellQuest软件分析增殖细胞各代所占比例和增殖指数(PI)及抑制指数(HI)。采用碘化丙锭染色分析不同剂量SP600125对Con A或佛波醇酯(PDB)加离子霉素(Ion)刺激的小鼠T细胞周期变化的作用。结果随着SP600125浓度从1.0μmol/L逐渐增至16.0μmol/L,Con A对T细胞的促增殖作用逐渐减弱,以8.0～16.0μmol/L的抑制作用最为明显,呈剂最依赖关系(r=0.98,P<0.01);选择最佳剂量8.0μmol/L,SP600125对T细胞增殖的抑制作用随时间从24h递增至96b而逐渐增强;进一步发现SP600125能使PDB加Ion刺激的小鼠T细胞停滞于G_0/G_1期,阻止其进入S期和G_2/M期,且阻止作用随上述浓度的增加而增强,呈明显剂量依赖关系(S期:r=-0.98,P<0.01;G_2/M期:r=-0.88,P<0.05);SP600125也呈剂量依赖性地使Con A诱导的T细胞停滞于G_0/G_1期,阻止其进入S期(r=-0.90,P<0.05)。结论JNK信号通路的活化在小鼠T细胞增殖中可能起着重要作用。     

瘤苗免疫的实验研究

我们在进行莪术抗癌作用原理的实验研究中,发现用莪术处理的艾氏腹水癌瘤苗免疫昆明种小鼠,与碘乙酸瘤苗一样,均能使动物获得明显的免疫保护效应,进一步用615近交系小鼠的L615白血病作模型,同样发现,用莪术L615瘤苗与X线照射L615瘤苗主动免疫后,均     

成纤维细胞生长因子和胰岛素对小鼠软骨细胞增殖的影响

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和胰岛素对小鼠原代软骨细胞的影响。方法: 在低血清培养基培养条件下进行小鼠原代软骨细胞培养, 采用WST1比色法和荧光染色法观察bFGF和胰岛素对软骨细胞增殖的影响。结果:原代软骨细胞在0.4%胎牛血清培养基培养条件下, 不同浓度的bFGF和胰岛素对软骨细胞的增殖有剂量相关性。形态学观察表明, bFGF和胰岛素不仅促进细胞增殖, 而且可使细胞分泌基质增多。结论:bFGF和胰岛素均能促进软骨细胞的增殖。     

ERK信号途径对EGF诱导的HaCaT细胞增殖具有双向调节作用

目的利用带有ERK-2基因的腺病毒载体感染成角质细胞系HaCaT,探讨ERK信号途径在EGF对HaCaT细胞增殖影响中的作用。方法用3H-TdR掺入法检测HaCaT细胞增殖及PD98059对EGF促HaCaT细胞增殖的影响。腺病毒载体转染HaCaT细胞,流式细胞仪检测转染率,W estern b lot检测ERK-2蛋白的表达。结果1μg/L和10μg/L EGF可促进HaCaT细胞增殖,而100μg/L EGF促增殖作用反下降。PD98059抑制EGF引起的HaCaT细胞增殖,且具有浓度依赖性。腺病毒载体具有高转染率,感染Ad-ERK2的HaCaT细胞高表达ERK-2。EGF抑制转染的HaCaT细胞增殖。结论ERK信号途径在EGF促HaCaT细胞增殖中具有双向调节作用。     

调节性T细胞介导异基因交配孕鼠对父方抗原同种反应性的影响

目的研究怀有同种异基因胚胎对母体对父方抗原同种反应性的影响及其相关机制.方法采用CFSE标记应答细胞、SNARF-1标记刺激细胞的单向混合淋巴细胞培养体系,对孕10.5d的同基因交配孕鼠BALB/c×BALB/c(syn-BALB/c)和异基因交配孕鼠BALB/c×C57(allo-BALB/c)对C57小鼠同种抗原的应答强度进行比较;流式细胞术检测CD4 CD25 T细胞在syn-BALB/c和allo-BALB/c各淋巴器官的比例变化,及其胞内Foxp3表达.结果孕10.5d的allo-BALB/c对C57同种抗原的应答强度明显低于syn-BALB/c,但将应答细胞中的CD4 CD25 T细胞去除后,应答强度反而高于syn-BALB/c.allo-BALB/c脾脏、淋巴结和外周血CD4 CD25 T细胞明显高于syn-BALB/c,这些细胞均表达高水平的Foxp3.结论异基因交配孕鼠对父方抗原的同种反应性较同基因交配孕鼠降低,这一现象很可能是由CD4 CD25 Treg介导的.     

孕妇外周血中胎儿细胞对3种抗体表达的研究

目的：利用流式细胞仪研究孕妇血中胎儿细胞对三种抗体表达的情况。希望能更准确的标记孕妇血中的胎儿细胞。以助提高胎儿细胞的分离纯度。方法：用CD71、CD45、GPA（糖蛋白A）分别标记抗凝的22例孕妇血、28例脐血、30例正常未孕妇女血各100ul。在流式细胞仪上检测。同时对已标记2种抗体的2例20ml母血在流式细胞仪上进行胎儿细胞分离,并经PCR技术鉴定男性SRY基因。结果：1、正常未孕妇女血中几乎无CD71 细胞存在。2、在脐血和孕妇血中CD71 细胞主要有两群。高表达群和低表达群。有核红细胞（表达CD71 GPA /CD45-）主要在高表达群中,脐血是58.73%,孕妇血36.43%。3、无论是高表达群 低表达群,CD45 细胞占多数。在脐血中低表达群是90.86%,高表达群占22.26%。孕妇血CD71 低表达群中CD45 细胞占82.11%。高表达群CD45 细胞占79.29%。4、利用流式细胞仪分离已标记三种抗体的母血中胎儿细胞,经PCR技术鉴定分离后的标本中存在男性SRY基因的胎儿细胞。结论：1、正常未孕妇女血中几乎不存在有核红细胞。2=在脐血和孕妇血中有核红细胞主要有两群。高表达群和低表达群。有核红细胞主要在高表达群中。3、无论高表达群或低表达群。CD45 细胞（增殖的白细胞）仍占多数,说明依然缺乏识别胎儿细胞的特异性标记物。主张多参数标记胎儿细胞有利于提高分防细胞纯度。     

活动性结核对结核菌素反应的进一步观察

作者观察了100例活动性结核患者(培养确诊)对各种结核菌素的反应。对100例活动性结核患者在入院24小时内用三种结核菌素和腮腺炎抗原作第一次试验。结果:Tine试验(皮内注射5单位旧结核菌素)假阴性率28％,PPD-T(加Tween作稳定剂的结核菌素,0.1毫升相当于5单位)和PPD(没有加Tween的结核菌素)试验的假阴性率均为21％。按照作者所     

不同病程尖锐湿疣患者外周血Th细胞亚群的研究

目的 从辅助性T细胞(Th)极化情况,探讨不同病程尖锐湿疣患者的细胞免疫状态。方法 取肝素抗凝血,用密度梯度离心法分离出血浆和外周血单一核细胞(PBMC)进行细胞培养和免疫荧光染色:PHA和自身血浆刺激PBMC诱导T细胞极化,72h后收获细胞,分别标记抗CD4-PE与抗CCR5-FITC和抗CD4-FITC与抗CCR3-PE,最后利用流式细胞仪对标记细胞进行分析。结果 尖锐湿疣患者中,短病程组与长病程组Th1/Th2极化细胞百分率分别为(25.82±2.22)%/(14.80±1.14)%与(12.20±1.37)%/(13.74±0.99)%,两组极化细胞百分率分别与正常对照组比较差异均有显著性(P<0.05),短病程组Th1/Th2的比值为1.75±0.17,而长病程组为0.89±0.11。结论 短病程尖锐湿疣患者机体呈现Th1型反应,而长病程者则以Th2型反应为主,存在Th1型反应向Th2型反应切换的现象。     

小鼠异基因骨髓移植急性移植物抗宿主病模型的建立

目的：建立稳定可靠的小鼠异基因骨髓移植急性移植物抗宿主病（GVHD）模型，为异基因骨髓移植中GVHD研究提供理想的实验参照。方法：以C57BL/6 (H-2^b) 小鼠为供鼠、BALB/c (H-2^d) 小鼠为受鼠，在移植物中混合不同比例的供鼠外周淋巴细胞以引起不同程度的GVHD。根据临床表现、存活期及病理检查等判断GVHD程度。结果：单纯异基因骨髓组只有部分小鼠出现急性GVHD，20%的小鼠长期存活（超过120 d），无急性GVHD表现；混合不同比例外周淋巴细胞的异基因骨髓移植小鼠出现GVHD的时间和程度均有差异，其中骨髓与外周淋巴细胞1:1混合组小鼠全部在移植后5-14 d出现典型的弓背体位，存活期6-24 d，临床和病理均可在相对集中的时间内观察到典型的急性GVHD改变。结论：以供鼠骨髓与外周淋巴细胞1:1混合进行的异基因骨髓移植，100%引出致死性的急性GVHD。     

妊娠水平孕酮体外对HIV-1感染和复制的影响

目的：研究相当于妊娠后外周血和胎盘局部浓度的孕酮（P4）体外对HIV-1感染及复制的影响。方法：检测终浓度为10^-6mol／L（相当于妊娠妇女外周血水平）和10^-5mol／L（相当于母胎界面局部浓度）的P4对HIV-1介导细胞融合的影响；ELISA法检测感染HIV的MT-2细胞培养上清p24抗原含量来探讨对HIV-1复制的影响；流式细胞术检测对淋巴细胞活化后CD69表达的影响和^1H-TdR掺入法检测对淋巴细胞增殖的影响。结果：10^-5mol／L的P4可以明显抑制HIV-1介导的细胞融合，并且降低感染细胞培养上清中p24抗原含量，两种浓度对淋巴细胞的活化和增殖都有抑制作用。结论：相当于妊娠后母胎界面局部浓度的P4体外可以抑制HIV-1感染和复制，其机制与抑制淋巴细胞活化和增殖有关。