应用套式PCR克隆ST13基因cDNA的5′端序列

目的 获得ST13基因cDNA5′端的未知序列.方法 应用套式PCR方法直接从cDNA文库中扩增该基因的5′端序列,然后将扩增的片段克隆到pGEM-T.easy载体,并进行序列分析.结果 第1次PCR后得到1条约550bp的片段,经套式PCR后获得1条约480bp的片段,经序列分析证实该扩增的片段是ST13基因cDNA的5′端未知序列.结论 套式PCR技术是克隆基因cDNA的5′端未知序列较简捷、有效的方法.     

慢病毒载体介导人sTRAIL对胃癌SGC-7901细胞凋亡的诱导作用

目的 构建携带人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(sTRAIL)基因的自身失活型慢病毒载体,观察sTRAIL对人胃癌SGC-7901细胞的诱导凋亡作用,探讨其基因治疗功效.方法 构建含人sTRAIL基因及内部核糖体进入位点序列(IRES)和绿色荧光蛋白(GFP)基因的双顺反子慢病毒载体.采用脂质体转染法将慢病毒三质粒包装系统包装出的携带人sTRAIL的重组慢病毒,在体外感染人胃癌SGC-7901细胞、正常人肝细胞HL-7702、人胚肺成纤维细胞HLF-1.应用流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率,酶联免疫吸附实验(ELISA)评价sTRA IL蛋白在胃癌细胞中的表达.结果 成功构建了慢病毒表达质粒pXZ208-sTRAIL,包装的重组慢病毒滴度可达106 IU/mL,可有效感染体外培养的细胞;含sTRAIL的重组慢病毒感染SGC-7901细胞,细胞凋亡率随病毒感染复数(MOI)的增加而升高,呈剂量依赖性;在MOI为6.0、作用24 h时,细胞凋亡率最高,可达(29.12±2.87)％,细胞上清中sTRAIL表达量为(34.08±3.43) ng/mL;而在HL-7702、HLF-1等人正常细胞未见明显细胞凋亡.结论 含有sTRAIL基因的重组慢病毒载体在体外能够有效地感染胃癌SGC-7901细胞并使其分泌有生物活性的sTRAIL蛋白,可诱导SGC-7901细胞的凋亡,而对正常细胞无显著影响.     

基于风险的抗肿瘤药物临床试验方案偏离可持续管理探讨

目的 探讨我院2019年10月至2020年12月抗肿瘤药物临床试验方案偏离可持续化管理情况。方法 通过我院自主研发的“药物临床试验信息管理系统”下载2019年10月至2020年12月已上报我院伦理委员会的药物临床试验方案偏离备案资料1 060份,对方案偏离发生类别、例次、危害性、发生主体及亚组类别、质量风险等级的趋向进行描述性分析。结果 识别抗肿瘤药物临床试验方案偏离714例次,研究者为主体的方案偏离发生最多(48.18%);方案偏离的危害性经评估整体较低,其中持续违背方案(不属于重大方案违背,但反复多次的违背方案)为多发项。结论 我院主动建立风险模式下动态的可持续化质量管理模式,基于信息化管理平台,合理、适度、不过多干预临床试验进度的前提下,监测项目的风险等级趋向,对抗肿瘤药物临床试验质量进行评估管理,有助于药物临床研究的可持续健康发展。     

择期手术病人术前禁食禁饮时间调查分析

择期手术病人术前禁食8 h,禁饮4 h作为预防术中反流误吸的重要措施,已沿用多年,但实际工作中,病人禁食、禁饮时间普遍偏长,导致其出现一系列不良反应,直接影响麻醉、手术的安全性及病人术前的舒适度,甚至使手术延期。2004年2~12月我科对46例择期手术病人术前禁食、禁饮的相关问     

老年室上性心动过速的射频消融治疗

目的:探讨老年患者室上性心动过速的类型构成、发病机制方面的特殊性及射频消融的治疗效果.方法:189例老年室上性心动过速病例,其中男性90例,女性99例,年龄60～84岁,平均(67.1±5.3)岁,行常规电生理检查及射频消融治疗.结果:房室结折返性心动过速(AVNRT)101例,占52.1%,左侧旁道参与的房室折返性心动过速(AVRT)64例,占33.0%,右侧旁道参与的AVRT 20例,占10.3%,房性心动过速(AT)有9例,占4.6%.除1例AT未消融成功外,其余均消融成功,成功率99.5%.AVNRT 2例消融后出现高度～Ⅲ度房室传导阻滞(AVB),术后1个月复查恢复正常,较大的腹股沟血肿1例,经理疗后自行吸收,并发症发生率1.5%.平均手术时间(2.4±1.0)h,X线曝光时间(16.2±11.5)min.随访3个月至7.5年,复发6例(房室结双径2例,左侧旁道2例,右侧旁道及房速各1例),复发率3.0%.结论:老年室上性心动过速类型中,AVNRT占大部分,可能与Koch三角区及周围纤维化等退行性变有关;射频消融治疗老年室上性心动过速治愈率高,复发率低,并发症少.     

人血管内皮生长因子基因cDNA的克隆及其在COS-7细胞中的表达

目的：克隆和在COS－7细胞中表达人血管内皮生长因子165（VEGF165）。方法：利用RT－PCR方法，从新鲜卵巢癌组织中扩增到人VEGF165的全长cDNA，并测定其核酸序列；利用基因重组技术构建VEGF165的真核表达载体pcDNA3.1-VEGF165；应用脂质体介导的基因转移术将这一表达载体导入COS－7细胞后，免疫组化（SP法）检测瞬时表达的产物。结果：经酶切鉴定和基因测序证实，克隆的基因片段为人VEGF65cDNA，重组质粒pcDNA3．1－VEGF165转染COS－7细胞后，免疫组化检测有VEGF表达，结论：成功克隆人VEGF165基因，并在COS－7细胞获得表达。     

阵发性出汗为主要症状的心绞痛1例

1 临床资料 患者,男,64岁,2001年8月始无明显诱因出现胸骨后疼痛,伴全身出冷汗,呈阵发性,休息数分钟或用麝香保心丸可缓解,反复发作.于2001年9月行冠脉造影示:冠脉左前降支及右冠狭窄,随行冠脉内支架置入术,术后无明显胸痛发作.于2002年2月再次出现胸骨后疼痛,呈压榨性并向右胸放射,伴全身出冷汗,呈阵发性,休息或服用耐绞宁疼痛于数分钟内缓解,此后胸痛频繁发作,冠脉造影示支架内再狭窄.于2002年3月行冠脉搭桥术.手术顺利,恢复出院.5月20日无明显诱因突发心前区疼痛,休息及服用硝酸甘油不缓解,曾晕厥1min,查体发现血压95/55mmHg,心率42次/min,律不齐,心电图监护提示一过性三度房室传导阻滞、急性下壁心肌梗死,行急诊PTCA未成功.经内科常规治疗后胸痛逐渐消失.但患者在轻微活动后仍出现阵发性出汗,心跳加快,皮肤苍白,四肢湿冷,但无胸痛,无放射痛,持续时间2min～0.5h,平卧休息或服用硝酸甘油数分钟可缓解,发作时测血压较平时略低20mmHg左右,心率较平日快10～20次/min左右,心电图提示Ⅱ、Ⅲ、avF抬高0.05mv.服用硝酸甘油后出汗迅速消退,血压回升,心率变慢,可重复性强.     

模块化危急心电图教学在住院医师规范化培训中的应用

针对心电图教学的难点和临床规培医师的思维特点,构建以心内科危急症主诉为核心的模块化心电图图库,并由此开展基于主诉的模块化心电图教学。课程结束,对比采用传统教学的对照组规培学员和采用模块化教学的试验组规培学员教学满意度和考核成绩,结果表明,试验组教学满意度高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);试验组考核成绩高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。基于主诉的模块化心电图教学体系有利于提升心电图教学质量,有助于增强教学效果。     

喉癌组织中表皮生长因子受体mRNA含量测定

目的建立TagMan探针逆转录一实时荧光定量PCR技术测定喉癌组织中表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）mRNA水平的方法，分析其应用价值。方法设计高特异性引物和探针，以TagMan探针逆转录．实时荧光定量PCR技术对32例喉鳞状细胞癌组织和癌旁组织学正常喉黏膜组织EGFR mRNA表达水平进行测定。构建含有EGFR的重组质粒，进行测序鉴定。结果经测序分析证实，含EGFR的重组质粒构建成功，喉癌组织中EGFRmRNA相对含量（中位数0．025）高于癌旁正常喉黏膜组织中EGFRmRNA相对含量（中位数0。008），两者间的差异经Wilcoxon秩和检验，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论TagMan探针逆转录一实时荧光定量PCR技术可作为一种喉癌组织中EGFRmRNA水平定量测定的新方法。