经不同途径应用NK-NKG5-SV细胞防治肝细胞肝癌的研究

目的研究NKG5-SV导入肝癌病人NK细胞对其抗肝细胞肝癌作用的影响.方法Percoll不连续密度梯度离心法分离肝癌病人外周血NK细胞,以逆转录病毒为载体将NKG5-SV基因和报告基因LacZ导入NK细胞.将不同NK细胞与LCI-D20裸鼠人肝癌同时皮下接种或待LCI-D20肿瘤成瘤后瘤内注射,观察对肿瘤成瘤和生长的影响.术中经切缘或脾内注射不同的NK细胞,观察其对LCI-D20肝癌切除术后转移复发的影响.结果不同NK细胞与LCI-D20肝癌同时皮下接种NK-NKG5-SV细胞组成瘤率、肿瘤直径(cm)均低于NK-LacZ细胞组(P均小于0.01).肿瘤内注射不同NK细胞,NK-NKG5-SV细胞组的肿瘤生长明显低于NK-LacZ细胞组(P均小于0.05).肝癌切除术中应用NK细胞对照组、NK-LacZ细胞组、NK-NKG5-SV细胞组切缘复发瘤直径、肝内转移灶数目、转移灶累及肝叶数、转移灶累及腹内部位数分别为切缘注射1.51±0.47、0.86±0.49、00±1.76,2.40±1.80、0.80±0.54、0.40±1.18,01),2.60±0.70、1.40±0.54、1.0.50=0.19(P＜0.4.20=2.16、1.80±0.13、0.60±0.54(P＜0.05).脾内注射1.18±0.34、0.86±0.40、0.70±0.35,2.40=1.6 7、0.60±0.89(P＜0.05)、0.40±0.89(P＜0.05),2.2±1.09、0.4±0.54(P＜0.05)、0.2± 0.01(P＜0.01).4.60±1.14、1.20±1.70(P＜0.01)、0.80±1.09(P＜0.01).结论NK细胞具有抑制LCI-D20肝癌生长及防治肝癌切除术后转移复发的作用.NKG5-SV基因转染NK细胞后可提高NK细胞的抗肝癌作用.     

MiR-1207-3p靶向XRCC6对结直肠癌细胞HT-29凋亡的影响研究

目的 探究MiR-1207-3p靶向X-射线修复交叉补充因子6(XRCC6)对结直肠癌细胞HT-29凋亡的影响.方法 对miR-1207-3p与XRCC6进行TargetScan分析其相关性,将XRCC6的3'端非编码区克隆进pmirGLO载体中,对miR-1207-3p进行双荧光素酶报告系统检测确定XRCC6基因是否...     

大鼠肝卵圆细胞的分离培养和体外分化研究

目的 观察大鼠肝卵圆细胞的活化，为进一步研究肝卵圆细胞特征建立简单的分离培养方法。方法 利用2-乙酰氨基笏／部分肝切除建立肝卵圆细胞活化的大鼠模型，采用选择性消化法从该模型中分离纯化肝卵圆细胞，并做免疫细胞荧光鉴定。用丁酸钠诱导其分化。结果 成功地建立了肝卵圆细胞活化模型，并从中分离培养了表达OV6、CK19、AFP、白蛋白、c-kit、Thy1、CD45和CD34的卵圆细胞。在丁酸钠刺激下它可向肝细胞分化。结论 利用选择性消化法可以分离到肝卵圆细胞，并且其具有肝干细胞的特征。     

无创机械通气治疗慢性肺源性心脏病合并急性左心衰竭

目的研究无创机械通气（NIMV）治疗慢性肺源性心脏病合并急性左心衰竭的作用。方法回顾性分析22例药物治疗效果不佳慢性肺心病合并急性左心衰竭的患者NIMV后的临床表现、胸部X片和动脉血气的变化。结果NIMV后,22例患者能较好耐受机械通气（MV）,2h后症状明显改善,24h后继续改善,5～7天基本缓解。在吸入流量相同的情况下,2h后PaO2从（72±8）mmHg升至（94±20）mmHg,PaCO2从（106±19）mmHg,降至（83±12）mmHg（P〈0．01）,无明显副作用。结论NIMV治疗慢性肺源性心脏病合并急性左心衰竭患者能缓解呼吸肌疲劳,减轻心脏负荷,改善心脏功能,纠正抵氧血症和高碳酸血症。     

逆转录病毒载体介导的反义白介素1β转换酶(ICE)部分阻断激活诱导的T细胞凋亡

激活T细胞在机体清除肿瘤细胞起主要作用,然而激活T细胞在杀灭肿瘤细胞的同时也伴有自身凋亡,在肿瘤治疗中难以达到足够数量激活的T细胞来杀灭肿瘤细胞,因此,阻断激活T细胞凋亡,增加激活T细胞数量,有望提高肿瘤免疫治疗的疗效.本研究应用CD3诱导Jurkat细胞系凋亡作为激活T细胞凋亡模型,应用逆转录病毒载体将反义ICE转染Ju-rkat,观察反义ICE对CD3及抗Fas单抗诱发Jurkat细胞的凋亡影响.为此本研究构建了一个反义ICE的逆转录病毒载体(pPS-3-neo-反义ICE),并转染Jurkat细胞系,发现Jurkat细胞ICE蛋白表达量下降,并部分阻断CD3及抗Fas单抗诱导Jurkat凋亡.这些结果表明应用反义技术可阻断ICE基因表达,并部分阻断CD3及抗Fas单抗诱导Jurkat细胞凋亡,因此,应用反义ICE进行基因治疗可望阻断激活T细胞凋亡,提高肿瘤的免疫治疗疗效.     

丝裂霉素C通过核因子-κB上调SK-HEP-1细胞中肿瘤坏死因子受体相关蛋白1基因表达

目的研究丝裂霉素C(MMC)对肿瘤坏死因子受体相关蛋白1(TRAFl)基因表达的影响，检测核因子-κB(NF-κB)在TRAF1基因表达的转录调控中的作用。方法免疫组织化学检测NF-κB细胞定位，半定量逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)检测TRAF1基因的mRNA水平．染色质免疫沉淀检测NF-κB同TRAF1基因启动子序列的结合。结果MMC作用后SK-HEP-1细胞浆中的NF-κB进入细胞核，MMC作用8h后TRAF1基因的mRNA水平升高，MMC作用后NF-κB同TRAF1启动子序列结合。结论MMC能够通过NF-κB入核启动TRAF1基因的转录从而上调TRAF1基因的表达，染色质免疫沉淀是体内研究转录调控的优秀方法。     

CT在立体定向治疗脑出血中确定置管路径上的应用

立体定向血肿腔置管抽吸引流法在近几年已成为治疗脑出血的首选方法，但在基层医院无导航系统情况下，如何充分利用CT机计算定位置管路径还是一个操作难点。我院自1998年11月至2004年4月实施立体定向血肿腔置管抽吸引流手术137例．全部经过CT扫描计算定位置管路径．再由神经科医师实施手术。通过借鉴他们的术中经验，术后CT复查结果，我们总结出了在双点(颅外空间点，靶点)置管技术中充分利用CT机计算定位置管路径的技术，现报告如下。     

脑梗塞合并阻塞性睡眠呼吸暂停综合征患者血栓形成相关因素分析

目的探讨阻塞性睡眠呼吸暂停综合征（OSAS）患者合并脑血管疾病（CVD）的体内血栓形成相关因素及发病机制。方法对确诊的OSAS伴CVD患者、对照组（OSAS患者、CVD患者、非OSAS非CVD患者）各30例,监测多导睡眠图PSG和头颅CT检查;测定外周血清内皮素（ET）作为血管内皮功能指标;经颅多普勒超声（TCD）检测大脑中动脉的血流速度作为脑血流动力学指标;同期检测血液流变学指标。结果 OSAS伴CVD组患者的呼吸紊乱指数、最长呼吸暂停时间、血氧饱和度（SaO22）〈0.9时间与其他三组相比均高,而最低血氧饱和度则显著低于其他三组,差异有统计学意义;该组患者的血浆内皮素、全血低切粘度、高切粘度、血小板聚集率及血浆纤维蛋白原均高于其他三组,差异有显著性;而凝血酶原时间、部分凝血活酶时间显著低于其他三组,差异有显著性。结论 OSAS与脑血管发病有密切相关,对OSAS患者进行诊断、治疗,对防治脑血管病有重要意义。     

白细胞介素12及白细胞介素2对大鼠肝癌的联合基因治疗研究

目的：研究利用小鼠白细胞介素12(mIL12)和人白细胞介素2(hIL2)基因对大鼠肝癌进行联合基因治疗的可行性和疗效。方法：构建携带mIL12和hIL2基因的逆转录病毒载体，转染包装细胞后对实验性肝癌大鼠进行肝癌局部注射，观察对肝癌细胞的生长抑制作用及其对大鼠的免疫功能变化、毒性反应。结果：携带mIL12/hIL2基因的重组逆转录病毒在肿瘤内局部注射明显抑制了肝肿瘤的生长。肝癌接种后第1,3,5,7天治疗组大鼠35 d生存率分别为100%,100%,30%,10%。IL12+IL2治疗组平均生存时间明显高于生理盐水对照组（P＜0.01)、逆转录病毒空载体对照组（P＜0.01)、IL2治疗组（P＜0.01)和IL12治疗组（P＜0.05)。治疗后肝癌组织中浸润的淋巴细胞明显增多。结论：肝癌局部注射携带mIL12和hIL2基因的逆转录包装细胞株可明显抑制肝癌细胞的生长，早期治疗优于晚期治疗。