HCCR-2干扰真核表达载体的构建及其稳定转染细胞系的建立

目的构建HCCR-2干扰真核表达载体,获得干扰质粒稳定转染的HepG2细胞系。方法人工合成HCCR-2基因干扰序列并定向插入到RNAi真核表达载体pGenesil-1,通过测序鉴定。将干扰质粒用脂质体法转染HepG2细胞,经G418持续压力选择和有限稀释法获得稳定转染的细胞系。RT-PCR检测筛选克隆HCCR-2 mRNA的表达水平。结果测序表明HCCR-2干扰序列及读框完全正确,干扰质粒稳定转染的HepG2细胞系在倒置荧光显微镜下呈绿色荧光。RT-PCR结果显示RNAi-H1、RNAi-H3序列对HCCR-2 mRNA有较好的抑制效果。结论成功构建了HCCR-2干扰真核表达载体,HCCR-2干扰质粒稳定转染的HepG2细胞系的建立为进一步研究HCCR-2在肝癌细胞中的作用奠定了基础。     

临床医学博士后培养过程中的若干问题与建议

从1985年博士后制度产生至今,中国博士后事业持续快速发展,在科技创新、人才培养等方面发挥了十分重要的作用.目前,国内各大临床教学医院多已设立博士后科研流动站,已培养出相当一批出站博士后人员,他们的工作对临床学科的建设和发展起到了积极的促进作用.本文主要结合自身实践,探讨当前临床医学博士后培养过程中遇到的若干问题及建议.     

幽门螺杆菌对细胞色素氧化酶基因Ⅱ表达的影响及其临床意义

目的观察幽门螺杆菌（H．pylori）培养滤液作用于胃癌细胞后,细胞色素氧化酶Ⅱ（COX-Ⅱ）mRNA及其蛋白表达的变化,探讨H．pylori致胃癌的可能分子机制。方法将6μl/ml H．pylori培养滤液与胃癌细胞分别作用4、8、12小时,收集细胞,提取RNA,应用lit-PCR和Westernblot法检测各时间点COX-Ⅱ mRNA及其蛋白表达。结果正常情况下,胃癌细胞COX-Ⅱ mRNA稳定表达。H．pylori培养滤液分别作用4、8、12小时后,其表达量呈缓慢下降趋势,8、12小时的表达量显著低于对照组（P〈0．05）。COX-Ⅱ蛋白的表达呈现相似的趋势。结论H．pylori可引起胃癌细胞线粒体编码基因COX-Ⅱ mRNA和蛋白的表达障碍,影响线粒体功能。     

hTERT干扰对HepG2肝癌细胞Smac表达的影响

目的检测RNAi靶向抑制hTERT基因表达促HepG2肝癌细胞凋亡与Smac的关系,探讨hTERT干扰促进细胞凋亡的可能机制。方法收集hTERT基因RNAi真核表达载体稳定转染第20代的HepG2肝癌转染细胞、对照细胞（转染空载体质粒）及未转染细胞,通过Westernblot检测胞内XIAP和caspase-3,以及线粒体和胞浆Smac的表达;采用共聚焦显微镜观察线粒体膜电位变化。结果与未转染细胞和对照细胞相比,转染细胞内XIAP表达明显减少（P〈0．05）,caspase-3表达明显增加（P〈0．05）,线粒体Smac表达明显减少（P〈0．05）,而胞浆Smac表达明显增加（P〈0．05）;转染细胞线粒体膜电位明显降低。结论RNAi靶向抑制hTERT基因表达可能通过降低HepG2肝癌细胞线粒体膜电位,引起Smac从线粒体释放入胞浆,进而抑制XIAP表达,促进caspase-3表达增加诱导细胞凋亡。     

Claudin 3在食管腺癌和贲门腺癌的表达和意义

目的 探讨Claudin 3在食管腺癌和贲门腺癌的表达及意义.方法 分别采用RT-PCR及Western blot检测16例食管腺癌、20例食管鳞癌、15例弥漫型贲门腺癌、25例肠型贲门腺癌、15例正常食管黏膜和15例正常贲门黏膜组织中Claudin 3 mRNA及蛋白表达.结果 与正常对照组和食管鳞癌、贲门弥漫型腺癌组相比,食管腺癌和贲门肠化型腺癌组织中Claudin 3 mRNA及蛋白表达显著增高(P＜0.01);食管鳞癌组、贲门弥漫型癌组Claudin 3 mRNA及蛋白表达与正常对照组无明显变化(P＞0.05).结论 Claudin 3与食管腺癌和贲门肠化型腺癌发生有关.     

食管异物致纵隔积气患者内镜治疗一例

患者男,23岁,主诉吞食鸭骨后胸骨后疼痛伴吞咽困难6 d.患者6 d前吃饭时误吞下鸭骨后出现咽部及胸骨后疼痛伴声嘶,吞咽时明显,无呼吸困难,自行禁食.在当地医院行胃镜检查示食管上段异物,胃镜下取出失败,遂至我院.     

Barrett食管诊治研究中存在的问题及对策

在房殿春教授的积极倡导组织下“全国第二届Barrett食管学术会议”在重庆胜利召开。与会专家就Barrett食管相关领域最新研究成果进行了研讨，内容涉及Barrett食管分子机制研究进展，Barrett食管病理诊断中的问题，Barrett食管与腺癌的关系，Barrett食管流行病学以及Barrett食管的内镜诊断和治疗。本刊将分两期刊登相关内容，以飨读者。