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背景:实验为基因治疗退变椎间盘实验的前期部分,旨在构建含免疫荧光的pAAV-hSOX9-IRES-tdTomato重组质粒并应用腺相关病毒包装,为后期体内外实验打下基础。目的:构建人SOX9基因过表达腺相关病毒pAAV-hSOX9-IRES-tdTomato的包装。方法:用酶切法将质粒pAAV-IRES-tdTomato和质粒pUC57-hSOX9连接成pAAV-hSOX9-IRES-tdTomato,用质粒共转染方法包装腺相关病毒,感染293AAV细胞,腺相关病毒纯化及用生物学滴度测定法进行滴度测定。结果与结论:经测序结果BLAST比对分析,pAAV-hSOX9-IRES-tdTomato完全与合成的基因序列hSOX9相符,滴度为1×107TU/mL。结果表明,人SOX9基因过表达腺相关病毒pAAV-hSOX9-IRES-tdTomato包装成功。 相似文献
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响应面法优化连翘苷超声提取工艺 总被引:2,自引:0,他引:2
在单因素实验基础上,采用Box-Behnken中心组合设计原理优化提取溶剂甲醇的浓度、超声提取时间、超声功率和液料比.以连翘苷得率为响应值进行多元二次响应回归分析,得到连翘苷的最佳提取工艺条件为:甲醇浓度100%,超声提取时间27min,超声功率416 W,液料比12:1.回归模型预测最优条件下连翘苷得率为0.082%,验证值为0.080%,与预测值的相对误差为2.39%. 相似文献