多肽的电泳分离

目的：对4种PAGE方法进行比较，选择出适用于分离小分子质量多肽的电泳方法。方法：用常规SDS-PAGE、低分子质量Tricine-SDS-PAGE、多肽SDS-PAGE以及含尿素的多肽SDS-PAGE4种方法对相同的样品进行电泳分离，并对分离效果进行比较。结果：常规SDS-PAGE不适合分离小分子质量多肽，Tricine-SDS-PAGE对分子质量小于10ku的样品效果不佳。多肽SDS-PAGE能分离分子质量在5～20ku的多肽，含尿素的多肽SDS-PAGE对分子质量小于5．0ku的多肽也能很好的分离。结论：含尿素的多肽SDS-PAGE对小分子质量多肽的分离效果最好，可根据实验的需要选择适合的电泳方式。     

壳聚糖-明胶网络/羟基磷灰石复合材料支架的研究--成骨细胞培养

目的　研究大鼠颅骨成骨细胞在壳聚糖 -明胶网络 /羟基磷灰石 (CS- Gel/ HA)复合材料支架上的生长情况。方法　将原代培养大鼠颅骨成骨细胞第 3代 ,密度为 1.0 1× 10 6 / m l悬液 ,种植于孔隙率分别为85 .2 0 %、90 .4 0 %和 95 .80 %的 CS- Gel/ HA支架材料中 ,利用细胞计数法检测种植后 3天 ,1、2及 3周的细胞增殖曲线 ,采用 HE和 von Kossa染色方法观察细胞生长、骨样组织形成和矿化沉积情况。结果　大鼠颅骨成骨细胞在孔隙率为 85 .2 0 %的支架中增殖较慢 ,在孔隙率为 90 .4 0 %和 95 .80 %的 CS- Gel/ HA复合材料支架上生长良好 ,增殖较快 ,周围分泌有大量细胞外基质 ,3周时局部已出现骨样组织 ,且细胞 /支架结构物有利于钙质沉积。结论　CS- Gel/ HA复合材料支架有望成为培养自体成骨细胞的材料 ,以重建新的骨组织     

人血清甲状腺素的生物素-亲和素竞争酶联免疫分析

目的:建立人血清T4-BA-ELISA分析方法。方法:合成的3种生物素化的T4-衍生物、经过筛选,Biotin-BSA-T4被用于以下实验中:T4在三氯乙酸作用下与甲状腺T4结合球蛋白（TBG）分离,并与Biotin-BSA-T4对有限量的兔抗人T4IgG形成竞争,在链霉亲和素化辣根过氧化物酶（streptavidin-HRP）存在下,以四甲基联苯胺（TMB）为底物,进行T4的ELISA定量分析。结果:标准曲线的可测量范围是10～20μg/L,批内变异系数为7.1％,批间变异系数为 8.03％。另外,用EIA和RIA同时测定了71份血清标本,对两套数据作了回归分析.r=0.969 5,P<0.001。结论:此方法的灵敏度已达到甚至超过了放射免疫分析的灵敏度,标准曲线范围与放射免疫分析相同。     

大肠杆菌偏嗜性人γ干扰素基因编码序列的克隆

目的：获得适于大肠杆菌表达的人γ干扰素(hlFN-γ)基因。方法：用大肠杆菌偏嗜性密码子替换已知hlFN-γ基因编码序列中相应的密码子，将重新设计后的编码序列分为六段进行人工化学合成，通过PCR拼接技术扩增出大肠杆菌偏嗜性hlFN-γ基因编码序列，并进行克隆及序列分析。结果：经序列分析证实，重组pGEM—hlFN-γ质粒含有与预期结果一致的hlFN-γ基因编码序列。结论：成功进行了大肠杆菌偏嗜性hlFN-γ基因的克隆，为hlFN-γ基因的体外高表达奠定了基础。     

牦牛肾脏cDNA文库的构建

目的 :构建牦牛肾脏的cDNA文库 ,为进一步筛选、克隆和表达有益基因做准备。方法 :从牦牛肾脏中提取总mRNA ,经逆转录合成cDNA后 ,以pSPORT1质粒为载体构建cDNA文库。结果 :牦牛肾脏cDNA文库库容量为1×106转化子/μgcDNA ,经E.coliDH5α菌株平板测定 ,重组率为93 %。结论 :经平板鉴定和PCR鉴定表明 ,所构建cDNA文库达到建库要求 ,能够用于目的基因筛选和克隆表达     

破骨细胞分化因子和护骨素 mRNA在OVX小鼠骨组织的相对表达

目的　研究破骨细胞分化因子 (ODF)和护骨素 (OPG)mRNA在OVX小鼠骨组织中的相对表达水平 ,探讨ODF和OPG在绝经后骨质疏松 (PMO)发病中的意义。　方法　将 4 0只小鼠随机分为 5组 ,第Ⅰ、Ⅴ组行假手术 ,两组小鼠分别在术后 1周和 5周处死 ;第Ⅱ、Ⅲ组行卵巢切除手术 ,分别在术后 1周和 5周处死 ;Ⅳ组行卵巢切除手术 ,术后第 2天给苯甲酸雌二醇治疗 ,5周后处死。小鼠处死后 ,提取其骨组织总RNA ,RT PCR检测ODF和OPGmRNA表达水平。　结果　去卵巢后Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组ODF与OPGmRNA比值 (分别为 1 16 78± 0 2 873、0 80 93± 0 14 14、0 6 6 4 0± 0 0 935 )显著增高 ,采用雌激素防治可使其一定程度上恢复。　结论　PMO发病中雌激素减退所导致的骨丢失与骨组织ODF和OPG的mRNA相对表达水平紊乱有关     

缺碘大鼠补碘对脑内甲状腺激素受体的影响

目的研究缺碘大鼠补充不同质量浓度碘后脑内甲状腺激素受体与激素结合动力学参数的变化。方法复制Wistar低碘大鼠,然后根据饮用不同质量浓度的碘水来分组。选用第2代20日龄仔鼠实验,测定甲状腺功能状态,利用放射配体结合分析法测定脑内T3受体。结果①血清T3浓度:低碘组(LI)、高碘组(HI)、适碘组(AI)与正常对照组(N)相比,差异无显著意义(P> 0.05)。血清FT3:LI组、HI组明显高于N组(P< 0.05);②血清T4和FT4:LI组和HI组均显著低于N组(P< 0.05);③受体最大结合容量(MBC):LI组明显高于N组(P< 0.05)。结论LI组血中TT4和FT4低于N组,而脑中T3核受体MBC高于N组,提示甲状腺功能低下(甲低)状态下,脑组织中T3核受体有代偿性升高。高碘状态下缺碘大鼠脑细胞核T3核受体、MBC虽略有升高,但血中TT4和FT4却低于正常,提示长期缺碘后过量补碘会出现碘性甲低。长期缺碘后,即使补充适量碘也会出现一过性碘性甲状腺功能亢进(甲亢)。     

不同碘营养状态对大鼠肝组织Ⅰ型脱碘酶和脑组织Ⅱ型脱碘酶活性的影响

不同碘营养状态Wistar大鼠分别于饲养3、6、12个月时处死,放射免疫法测定血清甲状腺激素水平.放射性核素分析法检测大鼠脑组织Ⅱ型脱碘酶(DⅡ)和肝组织Ⅰ型脱碘酶(DⅠ)的活性.结果 显示在早期碘缺乏状态下,动物出现以低T4为主要表现的甲减,DⅠ和DⅡ活性代偿性上调.高碘在转录后直接抑制DⅠ的活性,使血清TT3和FT3下降,而DⅡ的活性增高,可能是由于T4和T3对酶的底物诱导失活所致.     

缺碘对发育期大鼠甲状腺激素水平的影响

SegaI等于1982年报道，大鼠血清T3和T4含量在出生时都是最低，生后1～2个月达到最高峰。以后随年龄的增长。血清T3降低或不变，血清T4降低。冯力等于1991年测定了2,6,12，18月龄大鼠血清TT3水平。发现TT3水平在2月龄时最高，以后随年龄的增加而逐渐下降。我们在复制胚胎期和生后发育期碘缺乏大鼠动物模型以研究碘     

诱导骨髓基质细胞定向分化为软骨细胞的因素

关节软骨损伤后,自身难以修复,久之易导致骨关节退行性变,临床上尚无有效的治疗方法,组织工程学的出现,为软骨修复开辟了一片新的领域。“载体”、“诱导因子”、“种子细胞”被称为组织工程的3个要素,合适的种子细胞是软骨修复的重要条件之一,目前组织工程使用的细胞有软骨细胞、骨膜和软骨膜细胞、间充质干细胞及胚胎干细胞等。自体软骨细胞来源有限,在体外培养条件下生物特性不稳定,丧失表达Ⅱ型胶原和蛋白聚糖的能力,制约了大规模的应用。骨髓基质细胞(bone marrowstromal cell,BMSC),又称间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC),…