鲑鱼降钙素重组杆状病毒载体的构建及表达

目的：利用昆虫细胞杆状病毒系统表达重组鲑鱼降钙素（recombinant salmon Calcitonin，rsCT），探索一条真核生物表达生物活性rsCT的新途径。方法：将鲑鱼降钙素基因重组到pFastBac杆状病毒穿梭载体（baculovirus shuttle vector，Bacmid）中，构建重组鲑鱼降钙素杆状病毒表达载体即重组鲑鱼降钙素Bacmid，后将其转染昆虫细胞Sf9，表达目的蛋白，并对表达产物进行分子量及免疫反应性鉴定。结论：证实目的基因在昆虫细胞中获得了表达。结论：成功构建了鲑鱼降钙素重组杆状病毒载体并在昆虫细胞中初步表达。     

Transactivation of thyroid hormone receptor βΔ on target genes through thyroid hormone responsive element

研究TRβΔ是否具有转录因子活性.将pcDNA3.1-TRβΔ和荧光素酶报告基因pGL3-Promoter/甲状腺激素反应元件共转染COS-7,检测报告基因表达水平.结果 显示报告基因表达水平可被T3提高45倍.证实TRβΔ是一个受配体(T3)诱导的转录因子.     

不同强度有氧加力量混合运动对大鼠骨密度的影响

目的研究不同强度有氧加力量混合运动对大鼠骨密度的影响。方法以不同负重爬坡跑模拟有氧加力量混合运动,将18月龄雄性Wistar大鼠随机分为对照组,小强度运动(SL)组,中强度运动(ML)组和高强度运动(HL)组。第一次正式运动后测量血乳酸。8 w后检测骨密度;分析股骨Wnt家族分泌蛋白(Wnt3a)、β-连环蛋白(β-catenin)、Runt相关转录因子(Runx)2和碱性磷酸酶(ALP)mRNA水平。结果各组血乳酸值均4 mmol/L,满足实验要求。与对照组相比,ML组和HL组骨密度显著升高(P0.05,P0.01);3个运动组Wnt3a和β-catenin mRNA水平显著升高(P0.01);ML,HL组Runx2和ALP mRNA水平显著升高(P0.01)。结论血乳酸浓度≥3.4 mmol/L的有氧加力量混合运动能显著提高骨密度。     

IGF-1信号肽及成熟肽全编码序列的克隆

目的：克隆含信号肽编码序列的胰岛素样生长因子I(IGF-1)基因，为转IGF-1基因研究奠定基础。方法：分别扩增IGF-1信号肽及成熟肽的编码序列，以PCR的方法对二者进行拼接，将拼接后的DNA片段克隆入质粒载体pGEM—Teasy。结果：以PCR拼接的方式成功地扩增出大小为360bp含信号肽编码序列的IGF-1基因。完成了该DNA片段的克隆，经序列测定证实读码框架完全正确。结论：克隆IGF-1信号肽及成熟肽全编码序列，可以为转IGF-1基因研究奠定基础。     

重组人甲状旁腺素相关蛋白PTHrP1-86对骨质疏松大鼠治疗作用的实验研究

目的 探讨重组人甲状旁腺素相关蛋白PTHrP1-86对骨质疏松大鼠的骨同化作用.方法 用摘除大鼠双侧卵巢的方式制备骨质疏松模型(OVX),去势手术16周后,测定大鼠腰椎骨密度,确认动物模型造模成功.实验动物分为8个组,给药后测定骨密度、骨钙素、骨形态计量学、骨生物力学等指标,初步评价重组人甲状旁腺素相关蛋白PTHrP1-86对骨质疏松大鼠的骨同化作用.结果 重组人甲状旁腺素相关蛋白PTHrP1-86可使骨转换加快,促进新骨生成,使骨的力学性能提高,抗弯曲强度提高,抗变形能力增强,韧性增高,脆性降低,不易发生断裂.结论 PTHirPl-86能有效提高骨的抗骨折能力,对治疗和预防骨质疏松有一定疗效.同时证明该动物实验方法行之有效,可以很好地测定PTHrP对骨质疏松的治疗作用,并可以此为依据开始一期临床实验.     

人降钙素基因的克隆及其序列分析

目的：克隆人降钙素基因（ｈＣＴ）并经序列分析予以确证。方法：首先自新鲜全血中用含ＴｒｉｔｏｎＸ－１００的缓冲液提取基因组ＤＮＡ，经酒精沉淀和洗涤后，作为模板，加入上下游引物，应用聚合酶链反应直接扩增出ｈＣＴ的编码序列。并将此段ＤＮＡ插入克隆载体ｐＵＣ１８的ＥｃｏＲＩ和ＳｍａＩ位点之间。最后用ＰＣＲ－双脱氧末端终止法进行序列分析。结果：成功地克隆了ｈＣＴ，证实所得ｈＣＴ基因克隆含编码人降钙素３２个氨基酸的全长ＤＮＡ序列９６ｂｐ。结论：已获得人降钙素基因克隆，为后续研究打下基础     

当归对正常大鼠痛觉调节活动的影响

目的研究当归水煮液在正常大鼠痛觉调节活动中的作用。方法采用浓度为6、24和96 mg/ml的当归水煮液大鼠灌胃,利用热板和压板测痛仪分别记录正常大鼠60 min内7个时间点的后爪缩爪反应潜伏期(HWL),观察当归对大鼠痛觉调节活动的影响。结果与灌生理盐水的正常大鼠(对照组)比较,6 mg/ml当归水煮液组左爪热板HWL有显著差异(P<0.01),右爪热板HWL差异极其显著(P<0.001),而左、右爪压板HWL差异均极其显著(P<0.001);24和96 mg/ml的当归水煮液组,不论是左、右爪热板,还是左、右爪压板HWL均具有显著差异(P均<0.001),表明当归水煮液对大鼠具有明显的镇痛作用。结论当归水煮液对正常大鼠的痛觉具有调节作用。     

甲状腺激素受体蛋白的纯化 Ⅱ.羟基磷灰石层析法

以大量提取液为起始材料,制备、纯化低含量蛋白质,需先进行浓缩。甲状腺激素(T_3)受体蛋白在肝细胞核内含量极低,故其纯化工作必先要解决浓缩问题。最好在浓缩的同时又能达到部分纯化。为此本文采用羟基磷     

甲状腺激素受体蛋白纯化 Ⅰ.层析聚焦法

用层析聚焦或叫色谱聚焦法(chromatofocusing)进行甲状腺激素(T_3)受体的纯化工作,文献尚无报导。本文初步试用得到良好结果。正常成年Wistar大鼠,断头取肝,制成肝细胞核,经含Triton X-100的缓冲液洗去胞浆污染物后,用0.4mol/L KCl(于20mmol/L Tris缓冲液中)抽提受体蛋白。提取物对0.025mol/L     

Transactivation of thyroid hormone receptor βΔ on target genes through thyroid hormone responsive element

研究TRβΔ是否具有转录因子活性.将pcDNA3.1-TRβΔ和荧光素酶报告基因pGL3-Promoter/甲状腺激素反应元件共转染COS-7,检测报告基因表达水平.结果 显示报告基因表达水平可被T3提高45倍.证实TRβΔ是一个受配体(T3)诱导的转录因子.