细胞中DNA含量测定 Ⅰ.改进的二苯胺法

1930年 Dische 报告用二苯胺法测定 DNA,1956年 Burton 加以改进,遂使此法得以被广泛使用。其后虽先后经多人、多次进行修正,灵敏度始终在5～10μg/ml 水平。因此,分析那些得量少或核酸含量低的标本时便不得不用荧光法或 EB 荧光法,据知荧光法灵敏度高于二苯胺法。我室     

重组人甲状旁腺激素相关蛋白1-141序列的克隆和表达载体构建

目的：构建人甲状旁腺激素相关蛋白1-141（hPTHrP1—141）基因的表达载体。方法：提取人基因组DNA，PCR扩增PTHrP1—141基因，将其克隆入原核表达载体pQE-30Xa，构建重组表达载体pQE-30Xa／hPTHrP1—141。结果：重组载体pQE-30Xa／hPTHrP1-141经限制性核酸内切酶Pvu Ⅱ酶切鉴定，得到符合预期大小的核酸片段。结论：表达载体pQE-30Xa／hPTHrP1—141构建成功。     

针刺“风府”穴对大鼠脑内神经肽胆囊收缩素基因表达的影响

手法针刺大鼠“风府”（天门）穴，用ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔ方法对针刺不同时限的生理状态大鼠脑内神经肽胆囊收缩素（ＣｈｏｌｅｃｙｓｔｏｋｉｎｉｎＣＣＫ）的基因在转录水平的表达情况进行比较研究。结果表明针刺即刻ＣＣＫ信息核糖核酸（ｍＲＮＡ）表达开始增加，３小时其浓度急剧升高．６小时已回落，２４小时几近平复。提示针刺后３～６小时是ＣＣＫ基因表达的高峰时期，手法针刺诱发的脑内ＣＣＫｍＲＮＡ的表达没有观察到累积迭加和持续促进的结果，并且与捉抓引起的应激反应有本质区别。     

血清游离甲状腺素夹心酶联免疫分析法

将小分子半抗原激素T4与人血清白蛋白缀合而成T4缀合物,使T4由单价变为多价,实现FT4双位夹心免疫酶标检测法,灵敏度比常规酶标免疫方法(EIA)提高近10倍,批内、批间变异和回收率及正常和病理值均可达到临床应用要求.     

缺碘性甲状腺功能低下大鼠骨发育障碍的病理学观察

目的探讨缺碘所致发育期大鼠甲状腺功能(甲功)低下造成的发育障碍,包括成骨细胞分子异常、骨计量学证据和病理学证据等,本文报告病理学观察结果.方法复制了第1代和第2代碘缺乏大鼠动物模型,测定血清中T3、T4水平,拍摄X光片,并作股骨远端骨切片观察骨发育情况.结果 20日龄正常组与缺碘组T3水平分别为(1.83±1.11)nmol/L和(1.66±1.01)nmol/L,补碘后略有下降,差异无显著意义;T4水平分别为(104.68±25.73)nmol/L和(3.47±1.06)nmol/L,显示甲功低下,补碘后升至(119.88±29.45)nmol/L.缺碘大鼠体重在整个发育过程中(1～84 d)始终低于正常组,平均降低了56%;X光片中可见,缺碘大鼠的长骨较同日龄正常大鼠短且细,骨间隙增大,钙化不良.20日缺碘鼠肌骨远端骨骺病理切片显示,大鼠次级骨化中心形成迟缓且小,骨骺生长中几个软骨细胞区域层次混乱,储备细胞数目减少.增殖区宽度较正常大鼠者减少;甲状腺病理学变化显示,从生后1 d开始,碘缺乏大鼠已经出现了甲状腺肿大的典型变化,包括滤泡体积变小,形状不规则,胶质明显减少或缺如.滤泡上皮细胞增大呈柱状,胞浆淡染,有空泡变性,滤泡间小血管增多,充血明显.生后补碘可以部分纠正上述改变.结论缺碘导致大鼠发育迟缓,体重增长缓慢.骨骼发育不良,长骨骨骺软骨发育障碍,钙化过程也受到影响.生后给缺碘大鼠补碘可以改善骨骼发育.     

骨形态发生蛋白-7生物学功能的研究进展

最初发现骨形态发生蛋白(BMP)-7的作用是异位诱导成骨,并根据这一特点应用于治疗临床一些难治性骨缺损疾病.新近发现BMP-7还与泌尿系统、生殖系统关系密切,可用于治疗动物模型中缺血性肾病、炎性肾病、高转换率肾性骨营养不良和血管钙化等.因此,BMP-7具有广泛的功能与应用前景.     

2种方法制备小肽免疫原的免疫特性比较

目的:探讨用不同方式制备的免疫原所产生的针对36肽半抗原的免疫应答特性.方法:分别用载体蛋白偶联小肽半抗原的方法与原核表达重组融合蛋白的方法构建免疫原免疫家兔,对其刺激产生的抗体应答动力学进行比较.结果:2种方法制备的免疫原免疫家兔后均于初次免疫后3个月左右产生了峰值效价,偶联蛋白方法制备的免疫原免疫家兔后产生的最高效价可达1∶12 000,基因工程方法制备的免疫原免疫后最高效价为1∶6 000,但后者诱导产生的免疫反应较为持久.结论:偶联蛋白方法与基因工程方法制备的免疫原均可成功刺激家兔免疫系统产生针对36肽半抗原的有效抗体,但两者具有较为不同的免疫特性,偶联蛋白方法更加迅速有效.     

重组人促甲状腺激素α亚基在大肠杆菌中的表达

目的:构建pGEX-3X/hTSHα大肠杆菌表达系统,制备重组人促甲状腺激素α(TSHα)亚基.方法:Trizol法提取新鲜人绒毛膜组织总RNA,将1 μg总RNA逆转录合成cDNA并以之为模板进行PCR扩增hTSHα亚基的完全编码序列.EcoR1和BamHI双酶切将所扩增的hTSHα基因定向克隆入表达载体pGEX-3X,转化感受态大肠杆菌Mach1-T1,IPTG诱导表达融合蛋白GST-rhTSHα.离心收集菌体,超声碎菌后获得包涵体.以梯度浓度降低的尿素溶液洗涤,8 mol/L尿素溶液溶解包涵体.包涵体溶解液经透析后复性进行SDS-PAGE鉴定及竞争性ELISA抗原性分析.结果:DNA序列分析证实重组pGEX-3X/h TSHα质粒含有读码框正确的hTSHα基因.PAGE显示重组质粒可表达产生36 ku大小的特异蛋白条带.ELISA结果表明,所表达的融合蛋白具有与抗人TSHα抗体相结合的能力.结论:成功构建了重组pGEX-3X/hTSHα表达载体,其产物具有hTSHα抗原性.     

性类固醇激素对肝内糖的异生和糖原生成的影响

哺乳类妊娠时产生内源性胰岛素抗性。例如孕妇血浆胰岛素浓度虽高,糖耐量却降低到糖尿病的程度。随着胎儿生长成熟,母体血中雌激素和尿酮效价增加,同时致糖尿的应激也加强。鉴于肝产生葡萄糖的作用被扰乱,是糖尿病的重要特征。作者用雌鼠研究外源性雌二醇(E)和孕酮(P)对肝内葡萄糖产生和糖原生成的影响以及产生抗胰岛素的作用。128只雌大鼠分四组:分别注射E、P和E P(对照为麻油)共21天;每组再分为禁食2小时和24小时者各半。糖的异生以静脉注射丙酮酸-3~(14)C或丙氨酸-全-~(14)C后30分钟内转变成糖的百分率来计量。同时测血     

重组人胰岛素样生长因子1的制备

目的：建立人胰岛素样生长因子1(IGF—1)基因大肠杆菌高效表达系统及rhIGF—1的初步纯化方法。方法：将人IGF—1基因克隆人原核表达质粒载体pBV220，重组质粒转化大肠杆菌DH5α，温度诱导表达，Western Blot对表达产物进行鉴定。超滤离心纯化rhIGF-1，纯化产物行高效液相色谱分析。H^3-TdR掺人法测定所制备rhIGF—1的促细胞增殖活性。结果：成功构建了重组质粒pBV—IGF—1，聚丙烯酰胺凝胶电泳可见与预期7．5ku大小相符的蛋白条带，Western Blot证实该条带即为rhIGF—1。超滤离心一步纯化后rhIGF—1纯度即可达95％以上。H^3-TdR结果显示，所制备的rhIGF—1可促进体外培养成肌细胞增殖。结论：成功建立了rhIGF-1的制备及纯化方法，表达产物经体外试验证实具有促细胞增殖的生物活性。