供体抗原特异性Treg细胞体外分选与鉴定

目的 构建大鼠肾移植受体源性CD4＋CD25＋Treg细胞体外分选、鉴定及供体抗原特异性诱导体系.方法 大鼠同种异体肾移植受体脾细胞同供肾组织体外混合培养以诱导供体抗原特异性表型 分选受体CD4＋CD25＋T细胞,鉴定CD4＋CD25＋ Treg细胞纯度 等量诱导后的Treg细胞加入供、受体大鼠脾细胞混合体系（测定组1）和第三系大鼠同受体大鼠脾细胞混合体系（测定组2）.以受体大鼠脾细胞悬液为阴性对照组,以供、受体大鼠脾细胞混合体系为阳性对照组,检测各组吸光度OD值,观察Treg细胞对两个测定组的抑制效率（IR）.结果 CD4＋CD25＋细胞的得率为4.13%,分离纯度为73.34%,CD4＋CD25＋ Treg细胞纯度为91.37%.测定组1、2的IR分别为85.4%及21.9% ,两者间有显著性差异（P〈0.05）.结论 体外分选获得高纯度受体源性Treg细胞,并成功诱导获得供体抗原的特异性表型,可满足细胞功能学及在体实验研究.     

超选择肾动脉栓塞治疗外伤性移植肾破裂一例

患者　男 ,39岁。肾移植术后 19个月 ,外伤致右下腹疼痛伴血尿 3h入院。体检 :右下腹肌紧张、压痛明显 ,移植肾边界不清 ,质硬 ,触痛。检查 :红细胞 3.6× 10 12 /L ,血红蛋白 118g/L ,尿蛋白 11mg/L ,尿红细胞 ,血清肌酐 10 9μmol/L。CT、彩超检查示移植肾上极包膜下血肿 ,大小约 3cm× 4cm。给予患者绝对卧床、抗感染、镇痛、补液等保守治疗 ,同时留置尿管 ,观察尿液变化。 7d后 ,患者仍感右下腹疼痛 ,尿液颜色逐渐变深红色 ,尿量由原2 4 0 0ml/d减少至 110 0ml/d。复查 :红细胞 2 .8× 10 12 /L ,血红蛋白 86 g/L ,尿蛋白 16mg/…     

Foxp3基因转染小鼠CD4+CD25-T细胞对同种T细胞增殖反应的影响

目的观察Foxp3基因转染的小鼠CD4 CD25-T细胞对同种T细胞增殖反应的影响。方法以免疫磁珠法分离小鼠脾细胞中的CD4 CD25 和CD4 CD25-T细胞,用流式细胞术检测细胞纯度,以电穿孔法将质粒PMFOXP3-IRES2-EGFP转染小鼠CD4 CD25-T细胞,用荧光显微镜观察转染细胞中Foxp3的表达,转染细胞和CD4 CD25 T细胞与同种T细胞做混合淋巴细胞培养,以3H-TdR掺入测定CPM值。结果在质粒PMFOXP3-IRES2-EGFP转染CD4 CD25-T细胞24h后,转染细胞中可检测到高水平的Foxp3;转染细胞和CD4 CD25 T细胞CPM值分别为3 927.0±674.7和3 895.3±504.6(P>0.05)。结论以质粒PMFOXP3-IRES2-EGFP转染的CD4 CD25-T细胞对同种T细胞增殖反应具有显著抑制作用,与CD4 CD25 T细胞的抑制作用等同。     

CTLA4Ig转染供者DC对同种异体胰岛移植存活的影响

目的 探讨共刺激信号阻断剂CTLA-4Ig基因修饰的树突状细胞(dendritic cells,DC)对胰岛移植存活的影响.方法 以BN、Lewis大鼠为胰岛移植供、受体;用CTLA-4Ig基因重组腺病毒转染供、受体骨髓源性DC使之表达CT-LA-4Ig;将供、受体DC于胰岛移植前24 h经股静脉分别注入受体(设为组Ⅰ、组Ⅱ),供、受体DC混合后注入受体(组Ⅲ),注射生理盐水的为空白对照组(组Ⅳ);观察各组糖尿病鼠高血糖改善情况及存活时间,术后第20天,MTT法检测受体脾细胞对供体及无关抗原刺激的反应.结果 与对照组相比,组Ⅰ和组Ⅲ血糖维持正常时间和受体存活时间显著延长[组Ⅰ:(28.75±13.60)d和(35.38±13.21)d,P＜0.01;组Ⅲ:(41.25±13.74)d和(49.50±13.87)d,P＜0.01],组Ⅱ移植胰岛存活时间无延长[(8.75±3.33)d与(7.33±1.97)d相比,P＞0.05].术后第20天,组Ⅰ、组Ⅲ脾细胞对供体抗原刺激的反应均明显低于正常对照[(0.24±0.05)和(0.21±0.05)与(0.70±0.09)相比,P＜0.01],而对无关抗原刺激的反应与正常对照无显著差异[(0.66±0.07)和(0.66±0.07)与(0.69±0.05)相比,P＞0.05].结论 CTLA-4Ig基因修饰的供体DC可以明显延长大鼠移植胰岛的存活时间,而受体DC则无此作用,但两种DC联合应用可以使移植胰岛获得更长的存活时间.     

Simulect 和 Zenapax 应用于肾移植诱导治疗的5年临床观察

目的评价2剂Simulect和5剂Zenapax在肾移植中诱导治疗预防急性排斥反应(AR)的有效性、安全性以及对近、远期人/肾存活的影响。方法选择1999年4月~2001年4月首次肾移植患者102例,分成Simulect组(54例)和Zenapax组(48例),在三联免疫抑制剂基础上(环孢素A/FK506、骁悉、皮质激素)加用Simulect(术前2h和术后第4天分别予20mg静滴)或Zenapax(1mg.kg-1.d-1,最大剂量100mg,首剂术前2h,此后每2周1剂,共5剂)。观察术后3个月内肾功、AR、移植肾功能延迟恢复(DGF)、急性肾小管坏死情况;术后5年内肾功、排斥反应、并发症及人/肾存活情况。结果术后3个月内AR发生率明显降低(Simulect组:14.8%;Zenapax组:14.6%);首次AR发生时间延迟;激素治疗对大部分AR有效;5年内再次排斥反应发生率为9.3%(Simulect组)和6.3%(Zenapax组)。术后肾功能恢复明显加快,早期及远期肾功能良好。未出现细胞因子释放综合征,仅2例DGF。5年内,感染、糖尿病、高脂血症、恶性肿瘤等未见增加。5年人/肾存活良好,均达95%以上。结论2剂Simulect和5剂Zenapax预防肾移植术后AR的效果好、安全性高,有利于早期肾功能恢复和远期人/肾存活。     

普乐可复替换环孢素A减缓早期CAN肾功能减退

目的了解用普乐可复(FK506)替代环孢素A(CsA)能否减缓早期慢性移植肾肾病(CAN)患者肾功能衰竭的速度,及其机制。方法1999年1月~2003年4月期间,对病理诊断为慢性移植肾肾病(I级)肾功不全、且正在服用CsA的124例肾移植患者随机分为A、B两组。A组(68例):将CsA改为FK506,替换剂量比例约为75∶1,其他免疫抑制剂不变;B组(56例):环孢素A和其他免疫抑制剂均不作调整。对上述患者进行至少3年的随访,比较两组肾功能、3年随访期内肌酐清除率(Ccr)减损量、急性排斥反应发生率、血浆转移生长因子β1(TGF-β1)浓度等。结果3年后A组有42例(61.8%)患者移植肾功能稳定或好转,而B组除6例(10.7%)肾功能稳定外,其他患者肾功能均进行性减退;3年随访期内A、B两组Ccr分别减少了(10.1±9.9)ml/min和(22.3±16.7)ml/min;3年后A、B两组血浆TGF-β1浓度分别为(16.7±8.7)ng/ml和(39.7±10.8)ng/ml。上述结果比较,两组差异有统计学意义(P<0.01)。3年随访期内,两组急性排斥反应发生率分别为11.8%和10.7%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论以FK506替代CsA可延缓慢性移植肾肾病患者肾功能衰竭的速度,其机制可能与降低体内TGF-β1分泌有关。     

肾移植术后卡氏肺孢子虫肺炎的诊治及预防

目的 探讨肾移植术后发生卡氏肺孢子虫肺炎的诊断、治疗及预防.方法 综合分析我院2002～2004年13例肾移植术后发生卡氏肺孢子虫肺炎患者的临床资料,提出治疗方案以及预防措施.结果 本组患者发病时间在肾移植术后88～142d,平均106d.病程为12～30d,平均22d.本病的临床特点为临床症状重、肺部体征轻,胸片及胸部CT有特异性表现,纤支镜肺泡灌洗可以确诊.经调整免疫抑制药物剂量,给予口服复方新诺明,吸氧、支持治疗,13例患者均康复出院.结论 卡氏肺孢子虫肺炎是一种严重威胁肾移植术后患者生命安全的肺部感染性疾病,常见于过度免疫抑制患者,如不及时治疗可发生急性呼吸窘迫综合征,威胁患者生命.采用复方新诺明治疗本病疗效可靠.     

改良法建立小鼠颈部异位心脏移植模型

目的 探索小鼠颈部异位心脏移植技术的改进,建立稳定、可靠的小鼠异位心脏移植模型.方法 采用供心升主动脉与受体颈总动脉,供心肺动脉与受体颈外静脉吻合的方法进行小鼠颈部异位心脏移植.结果 应用本方法完成手术50例,成功46例,供心缺血时间平均为40min,总手术时间在90～100min之间.结论 经改进的手术方法降低了手术难度,缩短了手术时间,能够建立稳定、可靠的小鼠异位心脏移植模型.     

应用前列腺素E1改善移植肾早期功能

目的研究前列腺素E1对肾移植后早期肾功能恢复的影响.方法自1999年11月至2003年12月,对267例肾移植受者术中及术后2周内每天应用前列腺素E1(PGE1)90μg,与同期内282例未使用PGE1的肾移植受者进行对比,比较两组术后尿量、血肌酐、内生肌酐清除率、B超下移植肾血流阻力指数以及两组肾功能恢复延迟和急性排斥反应的发生率.结果应用前列腺素E1的患者术后尿量、内生肌酐清除率均明显高于对照组(P＜0.01),而血肌酐、肾血流阻力指数和肾功能恢复延迟的发生率则明显低于对照组(P＜0.01),但两组急性排斥反应发生率无明显差异(P＞0.01).结论肾移植受者术中及术后早期应用前列腺素E1有利于术后移植肾功能的恢复,但不降低急性排斥反应发生率.     

用负载供体抗原的致耐受性树突状细胞延长大鼠移植肾存活

目的 研究负载供体抗原的致耐受性受体树突状细胞(Dendritic cells,DC)对移植肾存活的影响。方法 以BN、Lewis大鼠为肾移植供、受体;受体骨髓源性DC负载供体淋巴细胞抗原并与共刺激阻断剂CTLA4Ig共孵育;将上述DC于肾移植前24 h经股静脉注入受体(治疗组),未注射DC的受体为对照组;观察各组移植肾存活时间,术后第20天,MTT法检测受体脾细胞对供体及无关抗原刺激的反应。结果移植肾存活时间:与对照组相比,治疗组移植肾存活时间显著延长[(54.6±9.5)d vs(8.3±0.8)d,P<0.01]。术后第20天,治疗组脾细胞对供体抗原刺激的反应明显低于正常对照[(0.17±0.04)vs(0.74±0.06),P<0.01],而受体对无关抗原刺激的反应与正常对照无显著差异[(0.72±0.04)vs(0.69±0.07),P>0.05]。结论 负载供体抗原的致耐受性受体DC可以特异性抑制受体对供体抗原的免疫反应、明显延长大鼠移植肾存活时间。