核苷(酸)类似物治疗对乙型肝炎病毒感染者聚合酶区基因变异的影响

目的分析不同核苷(酸)类似物治疗的乙型肝炎病毒感染者乙型肝炎病毒P基因逆转录酶区变异特点。方法采用直接测序法对471例慢性乙型肝炎病毒感染者乙型肝炎病毒P基因逆转录酶区进行测序,比较未曾应用核苷(酸)类似物(第1组)、曾经应用核苷(酸)类似物停药(第2组)和正在应用核苷(酸)类似物(第3组)治疗患者基因突变的特点。结果在第1组、第2组和第3组中分别检出耐药相关错义变异6例(2.0%)、4例(8.2%)和50例(38.5%),同义变异分别为25例(8.5%)、5例(10.2%)和20例(15.4%);在第3组患者中,错义变异组、同义变异组和未变异组血清HBV DNA分别为5.58±1.36lgcopies/ml、5.27±1.05lgcopies/ml和4.98±1.50 lgcopies/ml,差异无统计学意义(P>0.05)。结论不同核苷(酸)类似物治疗的乙型肝炎病毒感染者体内病毒耐药变异株存在的意义还需要进一步研究。     

临床药师参与药源性心律失常治疗的实践

多种药物可诱发心血管系统不良反应,其中包括各种类型的心律失常。心律失常是指心脏冲动的频率、节律、起源部位、传导速度或激动次序的异常,严重的心律失常危及患者生命。长沙市第三医院临床药师在临床实践中参与了3例药源性心律失常患者的药学监护,现报道如下。     

万古霉素高谷浓度给药方案的研究

目的建立万古霉素谷浓度为10～20μg·mL-1的给药设计方案。方法 采用Matxke方法估算药物动力学参数,以目标谷浓度为10～20μg·mL-1,利用药物动力学参数设计给药方案,比较预测谷浓度与实际谷浓度的差别并计算AUC0～24/MIC。结果43例患者的预测谷浓度为(15.25±1.60)μg·mL-1,实际谷浓度为(14.47±2.46)μg·mL-1,预测谷浓度的ME为0.78μg·mL-1(95%CI:0.13～1.42),MAE为1.57μg·mL-1(95%CI:1.09～2.06),RMAE为2.21μg·mL-1(95%CI:1.41～2.79)。预测谷浓度与实际谷浓度具有相关性(P<0.001,r=0.535);43例患者中有41例(95.35%)患者的实际谷浓度在10～20μg·mL-1。患者实际日剂量明显高于说明书推荐剂量(P<0.001)。当MIC≤1μg·mL-1时,43例患者中有42例(97.67%)患者的AUC0～24/MIC均可>400。结论本研究建立的给药方案可以满足谷浓度为10～20μg·mL-1的要求。     

肝细胞核因子4α增强型1.0倍HBV复制子体外复制模型建立及初步应用

目的建立一种肝细胞核因子4α(HNF4α)增强型1.0倍HBV复制子体外复制模型。方法从临床获得的急性乙型肝炎患者血清中扩增并克隆HBV全长DNA;手术获得肝组织中提取总RNA,扩增并克隆HNF4α基因cDNA。BspQI/ScaI双酶切回收HBV全长DNA,HNF4α基因cDNA定向连接到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建pcDNA3.1-4α表达载体。将HBV全长DNA1μg/孔,按比例共转染pcDNA3.1-4α(0,0.5μg,1μg)于HepG2细胞,96 h后检测细胞上清中的HBsAg、HBeAg和HBV DNA;以0.5μg/1μg pcDNA3.1-4α与HBV全长DNA共转染HepG2细胞,加入不同浓度LAM(0,100μmol/L)和ETV(0,10μmol/L),评价建立的体外复制模型。结果 1%TAE琼脂糖凝胶电泳鉴定HBV全长DNA和HNF4αcDNA PCR产物,条带长度为3.2 kb和1.5 kb;目的片段克隆后测序鉴定正确。胶回收HBV全长DNA克隆质粒酶切目的片段,构建的pcDNA3.1-4α表达载体酶切鉴定正确后,测序鉴定。不同浓度比例的pcDNA3.1-4α与HBV全长DNA转染HepG2细胞后,0μg/1μg组合:HBeAg阴性,HBsAg阴性,上清HBV DNA载量为103;0.5μg/1μg组合:HBeAg阴性,HBsAg A值从0.1升高到1.99,上清HBV DNA载量从1×10~3 IU/mL升高到4×10~4 IU/mL;1μg/1μg组合:HBeAg阴性,HBsAg A值从0.1升高到2.4,上清HBV DNA载量从1×10~3 IU/mL升高到1×10~5 IU/mL;LAM从0~100μmol/L,细胞上清HBV DNA降低了97.6%;ETV从0~10μmol/L,上清HBV DNA降低了99.0%。结论 HNF4α增强型1.0倍HBV复制子体外复制模型,可以体外评价临床常用抗病毒药物,为后续HBV研究提供新思路。     

小鼠STAT4和STAT6基因酵母双杂交表达载体的构建与鉴定

目的:分别克隆小鼠信号传导和转录活化因子-4(STAT4)、信号传导和转录活化因子-6(STAT6)基因编码序列(CDS序列),构建并鉴定其酵母表达质粒pGADT7-STAT4和pGADT7-STAT6。方法:PCR扩增STAT4和STAT6基因CDS序列,T-A亚克隆到pMD19-T simple载体中,酶切获取目的基因STAT4和STAT6,克隆入已经过双酶切和CIAP脱磷酸处理的酵母表达载体pGADT7,酶切鉴定并测序;转化pGADT7-STAT4和pGADT7-STAT6到酵母AH109细胞中,Western blot分析STAT4和STAT6的蛋白表达情况,同时检测其毒性和自激活作用。结果:成功扩增了STAT4和STAT6基因CDS序列,并分别成功克隆到pMD19-T simple载体和pGADT7中,测序结果符合要求。酵母表达质粒pGADT7-STAT4和pGADT7-STAT6成功转化到酵母AH109细胞中,无毒性和自激活作用,Western blot结果证实酵母细胞高表达融合蛋白STAT4和STAT6。结论:成功构建了酵母表达质粒pGADT7-STAT4和pGADT7-STAT6,为进一步研究STAT4和STAT6蛋白与其他蛋白质的相互作用奠定了基础。     

食管贲门癌中端粒酶活性与P27表达及其临床意义

目的探讨食管贲门癌组织中端粒酶活性及p27表达及其临床意义。方法采用PNA原位杂交方法和免疫组化方法,检测110例食管贲门癌及20例正常食管、贲门组织及30例癌旁组织端粒酶活性和p27的表达水平。结果110例食管贲门癌中,90例端粒酶表达呈阳性,阳性率迭81.8%,癌旁组织中5例呈阳性,阳性率4.5%,正常食管、贲门组织中阴性,差异有显著性(P<0.05)。端粒酶表达与肿块大小、淋巴结转移、病理分级和预后显著相关(P<0.05)。样本中51例p27表达呈阳性,阳性率达46.4%,癌旁组织中22例呈阳性,阳性率73.3%,二者间有显著性差异(P<0.05),p27表达与肿块大小、淋巴结转移、病理分级和预后显著相关(P<0.05)。端粒酶活性的表达和p27表达的水平呈负相关。结论食管贲门癌的发生发展及预后与端粒酶活性过度表达和p27表达水平下调有关,二者可作为食管、贲门癌诊断指标。     

七氟醚复合麻醉用于食管癌高龄患者手术的体会

高龄患者心肺等器官功能均有不同程度减退，加之食管病变长期进食困难，多伴有营养不良及代谢紊乱，因此，对麻醉提出了较高的要求。七氟醚具有诱导快、苏醒快、麻醉深度易调节、对循环抑制轻等优点，我院将七氟醚一芬太尼复合麻醉应用于高龄食管癌手术122例，取得满意效果，现报告如下。l临床资料1．1一般资料本组男88例，女34例，年龄70～83岁，平均74岁。有高血压病史28例，脑血管病史12例，冠心病20例，慢性支气管炎肺气肿17例，贫血、糖尿病32例。手术全部经左后外侧切口进胸，行食管一胃主动脉弓下吻合29例，弓上吻合64例，颈部吻合25…     

中西医结合治疗HBV相关慢加急性肝衰竭合并肝性脑病的效果分析

目的探讨中西医结合治疗HBV相关慢加急性肝衰竭(ACLF)合并肝性脑病(HE)患者8周病死率情况,分析影响其预后的独立危险因素。方法选取2012年1月-2015年2月18家医院收治的HBV-ACLF患者,采用随机对照设计分为试验组和对照组,分别给予中西医结合治疗和单纯西医综合治疗,纳入所有0周合并HE的患者125例。观察2组8周病死率情况。计量资料2组间比较采用t检验或Mann-Whitney U检验,计数资料2组间比较采用χ2检验,生存分析采用Kaplan-Meier方法及logrank检验,危险因素分析采用Cox比例风险回归模型。结果试验组及对照组8周病死率分别为27.5%、50.0%(χ~2=5.630,P=0.018),8周内中位生存时间分别为41.2 d、28.4 d,累积生存概率分别为60.4%、32.5%(χ~2=6.187,P=0.013);Cox回归分析结果显示与对照组相比,试验组是HBV-ACLF合并HE患者预后的保护因素[风险比(HR)=0.424,P=0.018,95%可信区间(95%CI):0.208~0.864],高TBil(HR=1.063,P=0.042,95%CI:1.002~1.128)、低PTA(HR=0.942,P=0.044,95%CI:0.890~0.998)、ACLF分期晚期(HR=2.737,P=0.009,95%CI:1.287~5.818)、合并消化道出血(HR=5.291,P=0.003,95%CI:1.736~16.126)是8周死亡的独立危险因素。结论中医药治疗可显著降低HBV-ACLF合并HE患者的8周病死率,提高8周生存概率,延长生存时间。TBil、PTA、疾病分期、消化道出血是该组患者的独立预后影响因素。     

基于治未病思想探讨茵芪三黄解毒汤对慢性乙型肝炎的作用机制

慢性乙型肝炎是人在感染HBV病毒后产生的一种慢性传染性疾病,对人类危害极大.“治未病”是中医学传统思想,对疾病的预防和治疗起到了指导作用.茵芪三黄解毒汤是吕文良教授的经验方,前期的小样本研究已经证实了其临床疗效良好.在对茵芪三黄解毒汤进行深入研究的同时,对其疗效的理论机制进行探讨.通过控析冶未病理论对慢性乙型肝炎的指导...     

中医情志对艾滋病患者治疗的影响和预后

艾滋病是人体感染人免疫缺陷病毒(HIV)而导致的获得性免疫缺陷综合征,可以通过性接触、血液传播、母婴传播等途径进入人体.人体在感染HIV后,一般经过急性HIV感染期、无症状HIV感染期(即潜伏期)、症状性HIV感染期、艾滋病期4个阶段.中医学认为:"正气存内,邪不可干,邪之所凑,其气必虚."正气与邪气的斗争贯穿艾滋病从感染到发病的全过程.而近代医学研究表明,中医的情志疗法就是现代的心理疗法对艾滋病患者的预后有更重要的意义[2].