CTLA4Ig腺病毒基因治疗诱导异基因大鼠心脏移植耐受

目的: 通过CTLA4Ig腺病毒基因治疗诱导异基因大鼠之间的心脏移植耐受,并探讨相关机制.方法: 将异基因DA大鼠的心脏移植给受体LEW大鼠,同时经门静脉输注CTLA4Ig腺病毒(1×109～5×109 pfu*ml-1).通过RT-PCR检测CTLA4Ig的体内表达,观察记录心脏移植物的存活时间,通过MLR、IL-2逆转实验,Th1/Th2型细胞因子表达的检测,研究耐受的机制.结果:用LacZ腺病毒载体(AdLacZ)治疗组,不能延长移植物的存活,用CTLA4Ig腺病毒基因治疗组,DA大鼠的心脏移植物明显延长.RT-PCR实验证明,CTLA4Ig基因在受体内不同的组织表达量有所不同,并且随着时间的推移表达下降.Th1和Th2型细胞因子的检测显示,耐受大鼠体内未发现这两类细胞因子的偏移现象.MLR证明耐受大鼠的免疫应答表现为供体特异性,IL-2逆转实验表明,该耐受与克隆失活有关.结论: 在手术中给予CTLA4Ig腺病毒进行基因治疗,可诱导异基因大鼠间的心脏移植耐受,延长心脏移植物存活,该移植耐受表现为供体特异性,其形成与克隆失活有关,未发现Th1/Th2型细胞因子的偏移现象.     

白细胞介素8(IL-8)与炎症的关系及其检测方法

LI-8在体内由多种细胞产生,对多种白细胞具有趋化活性,特别是在炎性反应中,可出现局部的升高。呼吸道、泌尿道的感染,生殖系统感染引起的男性不育,类风湿等疾病状态下,均可出现IL-8的升高,IL-8的升高可引起局部中性粒细胞的聚集,而IL-8的升高与病原菌、刺激因子的刺激有关,并且与疾病的进展转归有关。其实验室检测方法有多种,可根据需要选择不同的方法,IL-8有望作为炎性疾病的临床诊断指标。     

CTLA4-FasL双功能融合蛋白分子抑制混合淋巴细胞反应及促进淋巴细胞凋亡

目的 构建人CTLA4-FasL融合蛋白真核表达载体，表达CTLA4-FasL融合蛋白，通过体外实验初步研究其生物学特性。方法 通过特异引物分别扩增出CLTA4和FasL胞外区的cDNA，将它们拼接后，克隆入真核表达载体pcDNA3．1( )中，体外表达纯化。Western blot分析CTLA4-FasL融合蛋白的抗原性。体外细胞结合试验研究其结合特异性配体作用。混合淋巴细胞反应研究其抑制免疫应答的效应。结果 测序证实所扩增的PCR产物分别是CLTA4和FasL胞外区的cDNA，其序列与文献报道相符。成功构建了pcDNA3．1-CTLA4-FasL真核表达载体。Western blot分析结果显示，表达获得的蛋白具有CTLA4和FasL的抗原性。体外细胞结合试验显示，CTLA4-FasL融合蛋白可以分别与Jurkat细胞表面的Fas受体和Raji细胞表面的町分子结合。混合淋巴细胞反应结果显示，该融合蛋白可以有效抑制异基因淋巴细胞的刺激作用及诱导淋巴细胞凋亡，并显示了显著的协同效应。结论 成功构建了CTLA4-FasL融合蛋白真核表达载体，体外表达并纯化了CTLA4-FasL融合蛋白，体外实验证实CTLA4-FasL融合蛋白是一个可以有效抑制免疫应答的双功能分子。     

CELL-ELISA法检测HLA-Ⅰ类抗原在内皮细胞的表达

ＣＥＬＬ－ＥＬＩＳＡ法检测ＨＬＡ－Ⅰ类抗原在内皮细胞的表达张庆殷侯桂华孔庆莲曹容华＊（山东医科大学附属医院检验科，济南２５００１２）用胰蛋白酶灌注消化法培养原代人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ），待形成致密单层后，用于ＨＬＡ－ＡＢＣ表达试验。在单层ＨＵ...     

血管紧张素Ⅱ对心肌梗塞大鼠成纤维细胞的核酸、胶原合成影响的研究

目的和方法：本实验利用酶法分离、培养成年大鼠心肌成纤维细胞（Ｆｂｓ），观察了血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）在不同处理因素下对Ｆｂｓ的３Ｈ－ＴｄＲ、１４Ｃ－ＵＲ、３Ｈ－Ｐｒｏ掺入率的影响。结果：在相同浓度（１０７ｍｏｌ／Ｌ）ＡｎｇⅡ作用下，ＭＩ组Ｆｂｓ对上述３种标记底物的掺入率均显著高于假手术（ＳＯ）组（Ｐ＜０．０５）。ＡｎｇⅡ的上述作用，可被特异性ＡｎｇⅡ拮抗剂［１８］ＡｎｇⅡ和血管紧张素抗肽（Ａｎｇ－ＡＰ）完全阻断，却不能被Ｌｏｓａｒｔａｎ完全阻断。结论：ＡｎｇⅡ可直接作用于心肌Ｆｂｓ，促进Ｆｂｓ的ＤＮＡ、ＲＮＡ和胶原蛋白的合成。ＭＩ组大鼠Ｆｂｓ对ＡｎｇⅡ反应性显著高于ＳＯ组，介导ＡｎｇⅡ对Ｆｂｓ的作用除ＡＴ１外，可能还有其他机制参与     

一种检测肿瘤细胞凋亡的新方法

细胞凋亡 (ａｐｏｐｔｏｓｉｓ)检测方法有多种 ,但大多操作复杂且需贵重试剂或仪器。我们根据ＭＴＴ试验及台盼蓝试验的原理 ,设计了一种由二者计算细胞凋亡率的简单方法 ,并以此方法分析了白血病细胞株ＨＬ - 60受抗癌药物ＶＰ - 1 6诱导时的凋亡情况。材　料　和　方　法一、细胞培养ＨＬ - 60细胞株 (本院血液病研究室提供 ) ,常规 1 640 (Ｇｂｉｃｏ)培养 ,隔天换液 ,取对数生长期的细胞实验。二、细胞处理调整细胞浓度至 1 0 9/Ｌ ,加入ＶＰ - 1 6(Ｓｉｇｍａ)至所需浓度 1 2ｈ后收获细胞备用 ,药物浓度依次为 0、5、1 0、2 0、40ｍｇ…