半圆形截面支架介入串联囊状动脉瘤的血流动力学仿真

为了研究半圆形截面支架对颅内串联囊状动脉瘤血流动力学的影响,针对同一动脉瘤结构,构建无支架和4种截面支架介入动脉瘤的有限元模型,分别命名无支架为U型、圆形截面为C型、半圆形截面圆面朝向瘤腔为ES型、圆面朝向血管轴向为IS型,然后对模型中的生理脉动流进行计算流体动力学仿真。数值模拟的结果显示:有支架模型的腔内流速被有效削弱,壁面附近的流速很低;血流对瘤腔的冲击减弱,壁面切应力的量值和波动性降低,分布均衡;腔内压力在支架介入后略有升高。对比分析两个瘤腔,流动情况和壁面切应力基本相同,下游瘤腔的压力低于上游瘤腔。IS型的仿真结果更好,这为支架的结构设计提供了一些理论指导。     

人ING4的基因克隆及真核表达

目的 克隆人生长抑制因子家族(inhibitor of growth famility member4,ING4)基因,构建其真核表达载体pEGFP-ING4.方法 提取人胎盘总RNA,经RT-PCR扩增出ING4 cDNA,克隆至pEGFP-C2载体,构建的真核表达载体pEGFP-ING4用双酶切、基因测序进行序列鉴定;转染MCF-7细胞用荧光显微镜和免疫组化检测重组质粒的表达.结果 RT-PCR产物为750 bp的条带,双酶切和基因测序正确,转染可见目的 蛋白融合表达.结论 从人胎盘组织中成功克隆了ING4基因并构建其真核表达质粒在人MCF-7细胞中表达,为进一步研究ING4基因的作用及抗肿瘤机制奠定了基础.     

人脑星形细胞瘤中CD34的表达及其与恶性性程度的关系

目的探讨和评估CD34在人脑星形细胞瘤的表达及其与恶性程度的关系。方法采用免疫组化法检测人脑星形细胞瘤标本中CD34蛋白的表达,并与对照组比较,按WHO病理分级标准进行恶性程度评定。结果55例患者中53例CD34蛋白呈阳性表达,而对照组12例脑组织中均无表达。低度恶性组阳性细胞表达强度、阳性细胞数分别为22.94±1.73,76±10,高度恶性组为35.81±1.36,130±7。两组间差异均有统计学意义（〈0.01）。结论人脑星形细胞瘤中存在CD34蛋白的表达,而且其表达强度随星形细胞瘤恶性程度（病理级别）的增高而增强,CD34蛋白可能参与了星形细胞瘤的侵袭性生长,并与肿瘤的生物学行为相关。     

特异结合人禽流感病毒H5N1的scFv分子性能鉴定

目的 从人源化噬菌体抗体库(human single fold scFv libraries I+J)中筛选到能高亲和性、特异结合人禽流感病毒H5N1的单链抗体,为建立H5N1快速筛查试剂和人源化治疗单抗奠定基础.方法 以H5N1病毒的血凝素(hemagglutitin,HA)蛋白和核蛋白(nucleoprotein,NP)为目的 蛋白,对上述单抗噬菌体文库以亲和性为原理进行筛选,经过3轮筛选富集后,随机挑选了96个噬菌体克隆扩增培养,ELISA法挑选能特异性、高亲和性结合目的 蛋白的噬菌体克隆,并换用HB2151宿主菌对阳性单链抗体克隆进行可溶性表达,ELISA法鉴定可溶性单链抗体的结合活性,PCR扩增阳性克隆的轻、重链基因片段,并对阳性单链抗体分子测序和序列分析.结果 经过3轮筛选,分别从96个噬菌体克隆中挑选到了两株能特异结合NP蛋白、3株能特异结合HA蛋白的单链抗体,PCR扩增都得到了长为300、302和935 bp的轻链、重链和轻链-连接片段-重链的基因片段,测序结果分析发现上述5条单链抗体片段在轻链的47、49、50、51、53、54、56、96、97、98和99位的氨基酸组成不同,而特异结合NP蛋白的单链在重链区域氨基酸组成完全相同,而特异结合HA蛋白的单链在重链的44、47、85、86、87、88和89位氨基酸组成不同.结论 从噬菌体抗体库中筛选到的特异结合HA和NP蛋白的单链抗体片段,可为进一步研发H5N1快速筛选试剂和人源性治疗抗体奠定基础,也可为鉴定HA和NP蛋白中的抗原决定簇提供结构信息.     

扩增bFGF的条件优化及其真核载体构建

目的 :优化采用PCR技术从PBR3 2 2 bFGF质粒扩增bFGF基因片段的条件并构bFGF真核表达载体 ,为研究bFGF基因转移在骨组织工程学中的应用提供研究基础。方法 :(1)在不同的模板量、Mg2 浓度、退火温度下经PCR扩增bFGF基因 ,琼脂糖凝胶电泳检测。 (2 )载体和PCR产物经EcoRI和HindⅢ酶切、纯化 ,T4连接酶连接 ,转化大肠杆菌 ,抗生素筛选重组质粒。结果 :(1)得到三个最佳参数为 :模板量为 2 μl(5 0 4μg/ml) ;Mg2 浓度为2 0mmol/L ;退火温度为 5 5℃。 (2 )酶切、PCR和DNA序列鉴定均证实插入片段的正确性。结论 :在此优化条件下经PCR反应得到了特异、高效和忠实的bFGF基因片段 ,并成功构建了bFGF真核表达载体。