肠出血性大肠杆菌O157∶H7志贺样毒素Ⅱ毒素亚单位Stx2A的表达与纯化

目的克隆表达肠出血性大肠杆菌(Enterohem orrhagic Escherichia col,i EHEC)O157∶H7志贺样毒素A亚单位(Sh iga-like toxin,Stx2A),并对其初步纯化。方法设计引物采用PCR法自EHEC O157∶H7基因组扩增Stx2A的编码基因stx2 a,T-A克隆后构建原核表达质粒pET-11 c( )-stx2 a,经测序鉴定后转化E.coli.BL21(DE3),IPTG诱导表达,以SDS-PAGE和W esten b lot分析目的蛋白的表达,并采用固相镍离子亲和层析纯化重组蛋白。结果扩增的stx2 a基因约950bp;原核表达质粒pET-11 c( )-stx2 a经酶切和测序鉴定与预期序列一致;并在E.coli.BL21(DE3)中得到高效表达,蛋白表达率约30%;PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量约31×103;经固相镍离子亲和层析纯化后,蛋白纯度可达92.3%。结论EHEC O157∶H7 Stx2A的高效表达与初步纯化,为探讨O157∶H7菌的感染机制奠定基础。     

幽门螺杆菌疫苗候选抗原lpp20基因的克隆表达及其纯化研究

目的克隆表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)lpp20基因,为筛选预防或治疗幽门螺杆菌感染的疫苗保护性抗原奠定基础.方法用PCR方法从临床分离株9806的染色体DNA中扩增出lpp20基因片段,将目的基因插入表达载体pET22b中,重组载体pET22b-Lpp20经DNA测序鉴定后,将重组质粒转化大肠杆菌E. coli.BL21(DE3),IPTG诱导表达.采用镍离子亲和层析纯化蛋白,并用SDS-PAGE和Western blot鉴定.结果PCR扩增的lpp20基因长度为528bp,经酶切和测序分析,插入到载体的基因片段与GenBank公布的序列相似性达99%,SDS-PAGE显示,经IPTG诱导目的蛋白占总蛋白的19.7%,纯化后,蛋白纯度达80%以上.Western blot检测该蛋白与兔抗Hp的多克隆抗血清发生结合反应.结论成功构建了lpp20表达载体pET22b-Lpp20,并在大肠杆菌中表达.     

肠出血性大肠杆菌O157:H7志贺样毒素Ⅱ毒素亚单位Stx2A的表达与纯化

目的克隆表达肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)O157:H7志贺样毒素A亚单位(Shiga-like toxin,Stx2A),并对其初步纯化.方法设计引物采用PCR法自EHEC O157:H7基因组扩增Stx2A的编码基因stx2a,T-A克隆后构建原核表达质粒pET-11c(+)-stx2a,经测序鉴定后转化E.coli.BL21(DE3),IPTG诱导表达,以SDSPAGE和Westen blot分析目的蛋白的表达,并采用固相镍离子亲和层析纯化重组蛋白.结果扩增的stx2a基因约950bp;原核表达质粒pET-11c(+)-stx2a经酶切和测序鉴定与预期序列一致;并在E.coli.BL21(DE3)中得到高效表达,蛋白表达率约30%;PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量约31×103;经固相镍离子亲和层析纯化后,蛋白纯度可达92.3%.结论EHEC O157:H7 Stx2A的高效表达与初步纯化,为探讨O157:H7菌的感染机制奠定基础.     

应用Hoefer GE 200 Gel Eluter纯化重组的LTB

目的：纯化基因重组表达的大肠杆菌毒素B亚单位（LTB），方法：采用Hoefer GE 200 Gel Eluter从聚丙烯酰胺凝胶中回收LTB蛋白，SDS－PAGE，HPLC分析其纯度，western-blot分析其免疫学性质，结果：电洗脱1次可获得300ug重组蛋白，纯化蛋白经Tricine-SDS-PAGE电泳表现为单一蛋白质带，HPLC检测纯度为99．46％，免疫印迹证实其保持有免疫学活性。结论；该系统纯化LTB蛋白操作方便，快捷，所得蛋白纯度好，回收率高。     

Rathke囊肿:CT、MRI表现与病理对照研究

目的：探讨Rathke囊肿的影像学表现与病理组织学之间的关系。材料和方法：病理证实的Rathke囊肿20例，男12例，女8例。年龄11—70岁，平均44岁。18例行CT检查，其中7例增强；12例行MRI检查，其中7例增强；20例中CT和MRI检查均进行有10例。分析所有CT、MRI片，并与手术病理对照。结果：10例Rathke囊肿位于鞍内，9例位于鞍内伴鞍上延伸，1例位于鞍上。Rathke囊肿因其囊液成分不同而有不同的影像学表现。少数伴出血。一般无强化，少数可见囊壁的强化。结论：Rathke囊肿影像学表现多样，CT和MRI有一定的价值，确诊需结合病理分析。     

浅析根管治疗失败的原因及预防

目前对急、慢性牙髓病、根尖周病最为有效的治疗方法为根管治疗,它是通过根管预备、根管清洗消毒和严密根管充填来完成以达到根尖周病的愈合。随着根管治疗器械的不断发展及根管检查手段进一步完善,使得更多的牙体得到保存。但临床上因诊断、治疗不当还有很多失败的病例,现将失败的原因及预防措施综述如下。     

临床免疫学及免疫学检验实验教学体会

临床免疫学及免疫学检验是一门基础知识丰富、实践性很强的课程,强调理论联系实际。实验教学则是理论联系实际的重要环节。笔者所在单位在长期的教学过程中,不断探索实验教学中存在的问题,并采取各种措施进行改进,大大提高临床免疫学实验教学质量。     

幽门螺杆菌BALB/c小鼠适应性菌株的驯化及模型建立

目的:通过体内连续传代获得幽门螺杆菌(Hpylori)的BALB/c小鼠适应性定植菌株并建立稳定的感染模型.方法:以H pylori蒙古沙鼠适应株GS_(10)连续传代感染BALB/c小鼠,每次感染20只,感染后4 wk进行微生物学检查(分离培养、直接涂片染色镜检、快速尿素酶试验、PCR鉴定),观察H pylori的定植情况,计算每批动物的感染率,直至感染率稳定在80%以上,然后对已稳定感染的小鼠胃黏膜组织进行H pylori定量培养及病理学检查.结果:随着H pylori菌株GS_(10)在BALB/c小鼠内的连续传代,感染率逐渐升高.GS_(10)株初次感染率仅为11.1%,传代至第6代(BS_6株)以后,感染率稳定在80%以上;BALB/c小鼠适应株BS_8感染小鼠后4 wk在胃窦、胃体和胃底的定植密度(CFU/g组织)的常数对数均值分别为5.32±0.88,4.14±1.05和1.05±2.25,与SS1的定植密度相比,相差不显著(P>0.05).感染鼠病理学检查在胃窦黏膜上皮细胞间及固有层中发现大量炎症细胞浸润;在胃窦及幽门部上皮细胞表层黏液、胃腺窝中见到大量H pylori存在.结论:经过连续传代感染,驯化出一株高定植力和感染率的Hpylori BALB/c小鼠适应株,并成功建立稳定的H pylori小鼠感染模型.     

乳腺1H磁共振波谱(续)

对比增强MRI已经成为重要的乳腺成像手段,但是该手段并不总能提供确切的病理.在动态增强MRI基础上增加活体MRS的初步研究显示的结果很具前景,越来越多的研究小组将MRS加入乳腺MR扫描协议.本文阐明了进行MRS检查的预期检查结果,并列举了其中的一些缺陷.     

坚固专业思想,深化检验医学教学改革

随着人类医学的飞速发展,如何培养高素质的检验医学复合型人才成为新课题.为了适应新时期医学发展及教学改革的需要,探索医学院校检验专业教学新模式,在对医学检验专业本科学员专业思想以及专业授课情况调查分析的基础上,探索课堂教学的基本规律,大力开展教学改革,提高实验课质量、加强专业理论课与临床实际的联系,不断提高教学质量.