抗弓形虫水通道蛋白多肽抗体的制备及鉴定

目的 研制抗弓形虫水通道蛋白(TgAQP)的特异性多肽抗体,并应用于检测弓形虫ME49株中水通道蛋白的表达和亚细胞定位。方法 根据TgAQP氨基酸序列设计B细胞抗原多肽,并将合成的多肽与KLH偶联作为免疫原免疫新西兰大耳白兔制备多克隆抗体,通过ELISA、Western blot和免疫荧光的方法对所得抗体进行鉴定。结果 选定并合成抗原表位多肽,与KLH偶联作为免疫原制备多克隆抗体;经ELISA测定其多肽抗体效价达1∶40 000; Western blot表明制备的抗体能特异地识别天然弓形虫中29.9 kDa处的条带,与预测的TgAQP相对分子量大小相符;免疫荧光检测到抗血清识别的蛋白定位于弓形虫胞质中。结论 制备了抗弓形虫水通道蛋白多肽的多克隆抗体,为进一步研究弓形虫水通道蛋白的生物学功能和代谢特点奠定了基础。     

雷帕霉素在大鼠梗阻性黄疸模型中对肝脏保护作用的研究

目的：探讨雷帕霉素对大鼠梗阻性黄疸肝脏保护作用的相关研究。方法：采用胆总管结扎方法建立大鼠梗阳性黄疸模型,将54只SD大鼠随机分为假手术组（A）组18只,梗阻性黄疸（B）18只,梗阳性黄疸＋STAT抑制剂雷帕霉素RPM处理组（C）18只。分别于术后1、3、5d处死大鼠,显色基质法测定各组内毒素含量,取肝脏组织测定超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量,RT-PCR测肿瘤坏死因子基因表达。结果：B和C组TNF-α mRNA表达水平均增加,B组较C组内毒素水平含量低,肿瘤坏死因子基因表达水平低,SOD活性相对高,MDA含量低,有显著差异。结论：梗阻性黄疸时TNF-α表达明显升高,通过雷帕霉素干预,肝组织TNF-α 的表达下降,SOD活性增加,MDA含量减少,可防止梗阳性黄疸所致失控性炎症反应性肝损伤。     

槲皮素对人鼻咽癌细胞生长和AKT/mTOR通路表达的影响

目的：探究槲皮素对人鼻咽癌5-8F细胞生长和AKT/mTOR通路表达的影响。方法：采用不同浓度槲皮素（20、40和60 μmol/L）处理人鼻咽癌5-8F细胞24 h、48 h和72 h后,MTT法检测细胞生长情况;荧光定量PCR和Western blot检测经不同浓度槲皮素处理后的5-8F细胞中AKT和mTOR的表达水平。裸鼠皮下接种5-8F细胞建立裸鼠鼻咽癌移植瘤模型,随机分为对照组和槲皮素处理组,每7天测量肿瘤体积并绘制肿瘤生长曲线;Western blot检测肿瘤组织中AKT和mTOR蛋白表达水平;免疫组织化学法检测肿瘤组织内AKT和mTOR的表达。结果：槲皮素处理组与对照组相比,5-8F细胞生长明显受抑制（P＜0.05）。槲皮素可降低5-8F细胞中AKT和mTOR的表达水平（P＜0.05）。体内实验中,槲皮素处理组的裸鼠肿瘤体积显著受抑制（P＜0.05）,且肿瘤组织中AKT和mTOR的表达水平降低（P＜0.05）。结论：槲皮素可抑制鼻咽癌细胞5-8F细胞生长,抑制AKT/mTOR通路表达。