大鼠实验性肝癌发生中卵圆细胞的变化

目的：探讨卵圆细胞在大鼠肝癌发生、发展过程中的作用．方法：60只SD大鼠随机分为对照组(n=12)和实验组(n=48)．用化学致癌剂3’-甲基-4-二甲基氨偶氮苯(3’-Me-DAB)诱发大鼠肝癌,通过免疫组织化学、RT-PCR,Western blot技术对大鼠诱癌过程(4,8,12,16,20,24 wk)中肝组织内卵圆细胞及p53基因表达的变化进行动态的检测．结果：诱癌4wk,大鼠肝门管区及坏死区内均见大量卵圆细胞,这些细胞呈OV-6染色阳性．诱癌16wk,肝组织内可见癌结节形成,癌结节内外均可见有卵圆细胞聚集,部分增生的卵圆细胞P53阳性反应,二者的分布区域基本一致．诱癌20wk后大鼠肝癌组织内的p53 mRNA(F =4．78,P＜0．05),P53蛋白水平均显著升高(F= 2．46．P＜0．05)．结论：卵圆细胞贯穿了大鼠受化学诱癌剂作用后发生肝癌的全过程,与肝癌的发生有着密切的联系；其机制可能与p53基因的突变有关．     

过氧化物酶体增殖物激活受体α在人肝组织的表达及意义

过氧化物酶体增殖剂 （PPs）这类化学物质在啮质动物中可导致过氧化物酶体增殖、肝细胞增殖，最终导致肝细胞癌，在人类则主要再现为调节脂质代谢的作用。这在过氧化物酶体增殖物激活受体α（PPAR α）基因敲除鼠中被证实是通过转录因子PPAR α介导的。该研究探讨PPAR α在人肝组织中的表达及意义。     

ABC转运蛋白在大鼠肝脏卵圆细胞中的表达

目的研究ABC转运蛋白基因家族的三个主要成员MDR1、MRP1和Bcrp1基因在大鼠肝脏卵圆细胞中的表达及意义。方法建立大鼠2-乙酰氨基芴／三分之二肝切除模型，两步胶原酶灌注结合Percoll密度梯度离心分离大鼠肝脏卯圆细胞和肝细胞，采用免疫组织化学染色检测大鼠肝脏组织中MDR1、MRP1、Bcrp1转运蛋白的表达；采用荧光定量PCR方法检测MDR1、MRP1和Bcrp1基因mRNA在卵圆细胞和肝细胞中的表达水平。结果免疫组织化学染色显示大鼠肝脏组织中MDR1表达位于门静脉区附近，呈放射状分布，Bcrp1表达定位在细胞膜上。大鼠肝脏卵圆细胞MDR1、MRP1和Bcrp1基因mRNA的表达水平分别是肝细胞的9倍、1．5倍和13．8倍。结论卵圆细胞表达高水平的ABC转运蛋白，后者参与卵圆细胞免受外源性化学物质损伤的自我保护机制。     

端粒酶在大鼠肝卵圆细胞中表达的意义

目的 检测大鼠肝卵圆细胞端粒酶活性,探讨端粒酶表达与卵圆细胞增殖分化的关系.方法 采用2-AAF/PH模型诱导大鼠卵圆细胞增殖,改良的胶原酶灌注结合密度梯度离心法分离,用细胞免疫荧光和电镜鉴定卵圆细胞.采用免疫组织化学、RT-PCR、荧光定量PCR等方法检测卵圆细胞端粒酶的表达,组间比较采用t检验分析其意义.结果 采用2-AAF/PH模型成功诱导大鼠卵圆细胞增殖.分离的卵圆细胞核大,卵圆形,胞质少,呈铺路石样生长.电镜发现细胞核质比大,胞质内细胞器少且发育不成熟.细胞免疫荧光结果表达OV-6、AFP、CK-19、albumin、c-kit.端粒酶逆转录酶(TERT)表达在门静脉周围增殖的卵圆细胞核内,随着卵圆细胞逐渐向肝细胞方向分化,TERT阳性细胞数逐渐减少.大鼠正常肝组织TERT mRNA表达水平最高,为LE-6卵圆细胞的2.27倍;分离的卵圆细胞TERT mRNA表达水平为LE.6卵圆细胞的1.26倍;采用2μg和4μg细胞提取物分析细胞的端粒酶活性,随着LE-6卵圆细胞传代次数的增加,由24代传至40代,端粒酶活性由△A=1.05、1.15降低到△A=0.25、0.45(t=17.74,12.38,P<0.05).结论 卵圆细胞具有端粒酶活性,端粒酶可能是卵圆细胞维持其增殖能力和多分化潜能的一个必要条件.     

氯喹减轻重症急性胰腺炎肝损伤的机制研究

目的：探讨氯喹（CQ）减轻重症急性胰腺炎（SAP）肝损伤作用的机制。方法：60只Wistar雄性大鼠分为假手术组，SAP组，L-Arg治疗组，L-NAME治疗组，CQ治疗组，CQ+ L-NAME治疗组，每组各10只。RT-PCR和Western Blot检测肝组织TLR4的表达。结果：SAP 组肝组织TLR4表达明显增高,一氧化氮（NO）浓度降低,肝损伤加重(P<0.05)。L-Arg组NO升高，TLR4表达受抑，肝损伤减轻(P<0.05)。L-NAME组NO明显抑制，肝组织TLR4表达升高，肝损伤加重(P<0.05)。CQ组TLR4表达降低，肝组织NO升高，肝损伤减轻(P<0.05)。CQ+L-NAME组肝组织NO明显降低，TLR4升高，肝损伤加重(P<0.05)。结论：TLR4表达上调在SAP肝损伤的发生、发展中可能有重要作用。CQ可能通过提高NO的合成和释放而抑制TLR4的表达，减轻SAP并发肝损伤。     

HIF-3α在肝癌组织中的表达及临床意义

缺氧诱导因子（hypoxia-inducible factor）是一种广泛存在于人和哺乳动物体内的转录因子。可以上调多达150种靶基因的表达，如促红细胞生成素（EPO）、血管内皮生长因子（VEGF）、糖酵解酶等，是细胞在缺氧应答反应中最重要的调节因子。目前发现的缺氧诱导因子成员有HIF-1、     

溴隐亭逆转临床肝癌患者多药耐药性研究

目的利用溴隐亭逆转人肝癌化疗耐药性。方法78例未经任何治疗的原发性肝癌患者先后行2次^99m Tc-甲氧基异丁基异腈(MIBI)单光子发射计算机断层显像(SPECT)检测，经外周静脉注射20mCi ^99m Tc—MIBI后15和120min行平面显像半定量分析肿物部位的摄取比值(UR)第1次SPECT检测后口服溴隐亭2．5mg／次，3次／d，连续3d后进行第2次SPECT检测，两次检测结果进行对照比较。结果68例肝癌患者^99m Tc—MIBI SPECT肿瘤无MIBI摄取。10例患者^99m Tc—MIBI SPECT肿瘤部位有MIBI摄取。经溴隐亭治疗后所有肿瘤MIBI排空者均出现99^m Tc—MIBI浓聚。结论溴隐亭作为一种新型逆转剂可有效逆转临床肝癌患者的多药耐药性。     

肝细胞癌门静脉癌栓形成的分子生物学机制研究

目的 探讨肝细胞癌（HCC）患者门静脉癌栓（PVTT）形成的分子生物学机制。方法 采用免疫组织化学，原位杂交等方法分别对HCC伴有和不伴有PVTT的组织标本252例进行相关指标的检测，分析多种基因在PVTT形成中的意义。标本分为：A组，未发现转移和PVTT的原发肝细胞癌组织，78例；B组，伴PVTT的原发肝细胞癌组织，50例；C组，PVTT，92例；D组，癌旁组织。32例。结果 内皮钙黏附蛋白（E-CD）的表达为癌旁组织（D组）＞伴PVTT的原发癌组织（B组）＞门静脉癌栓组织（C组）；尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）／其受体（uPAR）的表达规律为门静脉癌栓组织（C组）＞伴PVTT的原发癌组织（B组）＞无转移肝癌组织（A组）（P均＜0．01）；增殖细胞核抗原（PCNA）的表达为门静脉癌栓组织（C组）＞伴PVTT的原发癌组织（B组）＞无转移肝癌组织（A组）；血管内皮细胞生长因子（VEGF）表达为门静脉癌栓组织（C组）＞伴PVTT的原发癌组织（B组）＞无转移肝癌组织（A组）（P均＜0．01）。结论PVTT组织中VEGF、PCNA、uPA／uPAR高表达，E-CD低表达为共同参与肝细胞癌门静脉癌栓形成的分子生物学机制。     

肝门部胆管癌切除后胆道重建术式的改进

法国学者Bismuth将肝门部胆管癌分为4型[1],除Ⅰ型外,Ⅱ、Ⅲ型和Ⅳ型胆管癌的根治术均需要同时切除部分肝脏.切除肝脏的范围有两种选择:一种方法是做半肝切除或扩大的半肝切除,但对于胆道长期阻塞而致肝内瘀胆者,手术风险大,病死率高达10%左右[1-3];另一种方法是肝方叶切除或扩大的肝方叶切除.     

The Roles of Four Multi-drug Resistance Proteins in Hepatocellular Carcinoma Multidrug Resistance

The roles of multi-drug resistance protein 1 (MDR1), multi-drug resistance related pro- tein 1 (MRP1), lung resistance protein (LRP) and breast cancer resistance protein (BCRP) in the multi-drug resistance (MDR) of hepatocellular carcinoma (HCC) were studied. By exposing HepG2 cell line to progressively increased concentrations of adriamycin (ADM), HepG2 multi-drug resistant subline (HepG2/ADM) was induced. The MDR index of HepG2/ADM was detected by using MTT. The expressions of the four MDR proteins in the three cell lines (L02, HepG2, HepG2/ADM) were investigated at mRNA and protein levels by real-time RT-PCR and Western blot respectively. Our re- sults showed that when the ADM concentration was under 100 μg/L, HepG2 could easily be induced to be drug-resistant. The IC50 of the HepG2/ADM to ADM was 282 times that of HepG2. The expres- sion of MDR1 and BCRP mRNA in HepG2/ADM cells were 400 and 9 times that of HepG2 cells re- spectively while there was no difference in the mRNA expressions of MRP1 and LRP. There was no difference between HepG2 and L02 cells in the mRNA expressions of the four genes. At the protein level, the expressions of MDR1, BCRP and LRP but MRP1 in HepG2/ADM were significantly higher than those of HepG2 and L02. Between HepG2 and L02, there was no difference in the ex- pressions of four genes at the protein level. HepG2/ADM is a good model for the study of MDR. The four genes are probably the normally expressed gene in liver. The expressions of MDR1 and BCRP could be up-regulated by anti-cancer agents in vitro. The MDR of HCC was mainly due to the up-regulation of MDR1 and BCRP but MRP1 and LRP. These findings suggest they may serve as targets for the reversal of MDR of HCC.