Hypoxia-Inducible Factor-1alpha Suppressing Apoptosis and Increasing Tolerance of Lung Cancer Cells to Chemotherapy

In order to construct plasmid of hypoxia-inducible factor-lalpha (HIF-1α), and transfect into human lung cancer cells A549, the change in sensitivity of lung cancer cells A549 to chemotherapy was observed. HIF-1αmRNA structure region was amplified by RT-PCR and inserted into plasmid pcDNA3. The expression plasmid pcDNA3/HIF-1αwas transfected into A549 with Lipofec-tAMINE?000. The expression of HIF-1αprotein was detected by Western blot. After A549 cells were transfected with HIF-1αprior to addition of 5-Fu, the growth activity was measured by growth curve, apoptosis was detected by flow cytometry at 48 h, and the levels of caspase3 and MDR-1 were determined by Western blot. The results showed that the constructed expression plasmid was analyzed with restriction enzymes and gel electrophoresis. Two DNA lanes at 2.55 kb and 5.4 kb respectively were found, which were consistent with that expected. The growth rate in 5-Fu group was significantly inhibited, and the apoptosis index and caspase3 activity were increased significantly as compared with control group. After HIF-1αbeing transfected into A549, the activity of MDR-1 was increased and the effect of 5-Fu was weakened. In conclusion, HIF-1αcan promote chemoresistance by increasing the activation of MDR1 and suppressing apoptosis during lung cancer cells A549 induced with 5-Fu.     

离体肝切除术研究进展

对于需要手术切除的肝脏良恶性疾病,由于其位置侵及肝脏重要管道,难以在体切除.在移植技术的基础上,离体(或半离体)肝切除方法可以完成在体切除风险极大的外科手术.鉴于其高度复杂性及安全性问题,离体肝切除术较外科其他手术进展缓慢.近年来,随着肝脏外科手术技术及器官移植学理论的进步,离体肝切除术取得较大进展.但缺乏临床实践规范...     

乳腺癌耐药蛋白在肝癌多药耐药中的作用及其机制探讨

目的研究乳腺癌耐药蛋白(breastcancer resistance protein,BCRP)在肝癌中的表达及其意义。方法通过培养液中ADM浓度递增诱导法筛选培养,建立HepG2/ADM肝癌多药耐药细胞株;采用荧光定量PCR及免疫组织化学技术,分别在mRNA和蛋白质水平检测BCRP在正常肝细胞系L02、肝癌细胞系HepG2及HepG2/ADM与未经化疗的癌组织、多次化疗后的癌组织、癌旁组织的表达差异。结果HepG2/ADM的BCRPmRNA表达是HepG2的9倍(P<0.01);L02和HepG2中BCRPmRNA的表达无差异(P>0.05);化疗后病人癌组织BCRPmRNA平均表达是未化疗病人癌组织的4.2倍(P<0.01);化疗病人癌组织BCRPmRNA平均表达是癌旁组织的3.4倍(P<0.01);未化疗病人癌和癌旁组织间的表达无差异(P>0.05);免疫组织化学显示BCRP在胞膜表达;BCRPmRNA和蛋白表达具有一致性。结论HepG2/ADM多药耐药细胞株是一个较好的研究肝癌多药耐药的模型。BCRP基因在正常肝细胞中表达,而在多次化疗后的病人和HepG2/ADM中表达上调,提示化疗药物诱导BCRP的表达,BCRP的高表达与肝癌多药耐药有关。     

Th1/Th2类细胞因子转换对小鼠心脏移植物存活的影响

目的 探讨Th1/Th2类细胞因子转换对小鼠心脏移植物存活时间的影响。方法 采用小鼠腹部心脏移植模型，分为同种异体移植组（A组）、同种异体移植+免疫抑制处理组（B组）和同系移植组（C组），每组20对。观察移植物存活时间、供心病理改变、受鼠脾和供心内IFN-γ，IL-2，IL-4及IL-10 mRNA的表达水平。结果 A组及B组移植物平均存活时间分别为（7.8±0.77）d和（14.80±1.01）d，C组移植物存活均超过28d；3组间差异均有显著性（P<0.05）。A组与B组、C组比较，移植物的心肌细胞变性坏死严重，并有大量炎性细胞浸润。A组受鼠脾脏及供心内IFN-γ和IL-10 mRNA表达比其余两组明显增强；3组移植心组织IL-2及IL-4 mRNA均无表达；A组脾脏IL-2 mRNA表达最强；B组脾脏IL-4 mRNA表达明显强于其余两组。结论 Th1/Th2转换在延长移植物存活过程中起重要作用；IL-10也参与移植物排斥反应过程。     

NF-κB decoy寡核苷酸增强阿霉素对肝癌耐药细胞株HepG2/ADM化疗敏感性的研究

目的研究NF-κB decoy寡核苷酸增强肝癌耐药细胞株HepG2／ADM对阿霉素化疗敏感性的变化。方法通过培养液中阿霉素(adriamycin，ADM)的浓度梯度增加法，长期筛选培养，建立肝癌HepG2／ADM耐药细胞株，荧光定量PCR检测MDRl的表达，转染FITC标记的NF-κB decoy寡核苷酸，通过荧光显微镜和共聚焦显微镜进行核内定位的观察，凝胶迁移率实验检测转染前后NF-κB结合活性的变化，加入化疗药物阿霉素(ADM)，MTT比色法检测细胞增殖，细胞凋亡采用流式细胞仪和TUNEL法检测观察转染NF-κB decoy寡核苷酸后肝癌耐药细胞对化疗药物的敏感性变化。结果HepG2／ADM细胞是一个明确的多药耐药细胞模型，转染荧光标记的NF-κB decoy寡核苷酸1h，倒置荧光显微镜和共聚焦显微镜显示定位于细胞核内，凝胶阻滞分析实验(electrophoreretic mobility shift assay，EMSA)分析示NF-κB decoy寡核苷酸能够降低NF-κB核内结合，加入化疗ADM(0．1mg／L)后，MTT显示HepG2／ADM细胞的增殖明显抑制，ADM作用24h后出现细胞凋亡，流式细胞术、TUNEL法检测NF-κB decoy寡核苷酸转染HepG2／ADM细胞诱导的凋亡，与对照组相比，凋亡指数增加。结论NF-κB decoy寡核苷酸转染肝癌耐药细胞株HepG2／ADM后，能够抑制NF-κB的激活，逆转耐药细胞对化疗药物的耐受，增加其对化疗药物的敏感性。     

纳米材料碘油混悬液栓塞对肝肿瘤金属蛋白酶表达的影响

羟基磷灰石纳米粒子对肝肿瘤细胞有促凋亡作用,与碘油混合栓塞治疗肝肿瘤可提高其靶向性,抑制肿瘤生长[1,2].基质金属蛋白酶(MMP)-2可降解细胞外基质的纤维骨架结构,在肿瘤转移和浸润中发挥重要作用.本实验应用羟基磷灰石纳米粒子超液化碘油混悬液栓塞治疗兔VX2肝肿瘤,观察肿瘤组织中MMP-2表达,探讨纳米材料栓塞后肝肿瘤转移的可能趋势.     

Ciglitazone对肝癌血管形成的抑制作用

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体配体(ciglitazone)在肝癌血管形成中的抑制作用及bcl-2的表达变化。方法3周龄裸鼠随机分为处理组(10只)、对照组(10只)。皮下接种HepG2肝癌细胞,待肿瘤生长至0．5 cm时,处理组瘤内注射100μmol／L的ciglitazone 100μl,对照组注射100μl生理盐水,隔天1次,连续15次。免疫组化法和免疫印记法(Western blot)测定癌组织中因子VIII、VEGF和bcl-2的表达。结果处理组的肿瘤体积小、生长慢于对照组,为(2．51±0．33)g vs(3．44±0．40)g,但处理组PPARγ的表达,与对照组相比无明显差异,处理组裸鼠体内肿瘤微血管密度(MVD)低于对照组[(7．8±1．9)vs(16．9±1．2),P<0．05],VEGF的表达处理组与对照组相比为(0．149±0．057)vs(0．433±0．105),两者具有显著性差异。bcl-2表达处理组较对照组相比(0．435±0．127)vs(0．261±0．114),处理组bcl-2的表达为正常组的1．79倍。结论Ciglitazone对肝癌血管形成具有抑制作用,分析其机制可能与Ciglitazone增加凋亡抑制蛋白bcl-2的表达有关。     

特利加压素联合生长抑素治疗门静脉高压食管胃底曲张静脉破裂出血

目的观察特利加压素联合生长抑素治疗肝硬变门静脉高压食管胃底曲张静脉破裂出血的效果。方法我院2008年3月至2012年8月期间收治的47例肝硬变门静脉高压食管胃底曲张静脉破裂出血患者入院时采用掷硬币法被随机分为特利加压素＋生长抑素组（n=24）和生长抑素组（n=23）,分别给予联合用药或单独使用生长抑素,计算24 h止血率、总止血率、1周再出血率、1周死亡率,观察不良反应发生、尿量及腹水量情况。结果特利加压素＋生长抑素组24 h止血率、总止血率和不良反应发生率明显高于生长抑素组（P〈0.05）,1周再出血率明显低于生长抑素组（P〈0.05）,2组1周死亡率比较差异无统计学意义（P〉0.05）,特利加压素＋生长抑素组尿量明显多于生长抑素组（P〈0.05）,盆腔腹水量明显少于生长抑素组（P〈0.05）。结论特利加压素联合生长抑素用于肝硬变门静脉高压食管胃底曲张静脉破裂出血止血效果确切,可以明显降低死亡率;虽然其不良反应发生率略高,但均可以控制。