缺氧诱导因子-1αsiRNA增强耐药肝癌细胞的化疗敏感性

目的 观察缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）特异性小分子干扰RNA（siRNA）对肝癌化疗的增敏作用。方法 构建HIF-1αsiRNA真核表达质粒，经脂质体稳定转染于耐药的C28肝癌细胞。研究分为实验组、阴性对照组和空白对照组。荧光定量PCR和Western blot技术分别检测3组细胞中多药耐药相关基因MDR1、LRP、MRP1在mRNA和蛋白水平的表达，PI法流式细胞术分析3组细胞在受到5-Fu作用后的凋亡指数。每组细胞分别随机注入10只裸鼠皮下，比较3组细胞成瘤后对ADM治疗的反应性。结果 HIF-1αsiRNA能有效抑制HIF-1α基因的表达，并能使C28耐药肝癌细胞内MDR1、MRP1、LRP基因在mRNA和蛋白水平表达明显下降。在5-Fu作用后第24、48、72小时，实验组细胞的凋亡指数分别是阴性对照组的2．88、3．56和3．87倍，实验组对化疗药物5-Fu的敏感性显著增强（P〈0．01）。注射阿霉素后，实验组裸鼠皮下的耐药肝癌瘤体明显缩小，肿瘤抑制率为41．35％，与阴性对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论 成功构建了HIF-1α—siRNA的真核表达质粒。HIF—1α靶序列特异性的siRNA可增强肝癌细胞对化疗药物的敏感性，它与传统化疗药物的联合应用可望实现对肝癌的有效治疗。     

过氧化物酶体增殖物激活受体对小鼠原代肝细胞即时反应基因和细胞周期蛋白D1表达的影响

目的 转染小鼠pSG5-过氧化物酶体增殖物激活受体α（pSG5-mPPARα）质粒对小鼠原代肝细胞细胞周期调节基因表达的影响。方法 在小鼠原代肝细胞培养中转染pSG5-mPPARα质粒及加入PPARα配体（WY-14643）后，检测即时反应基因（IEG）如fos癌基因（c—fos）、jun癌基因（c—jun）和早期生长反应因-1（EGR-1），细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）表达的变化。用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）、蛋白质印迹法（Western blot）方法。结果 EGR-1基因表达在小鼠原代肝细胞培养中转染pSG5-mPPARα质粒及加入PPARα配体WY-14643组与未转染加药组差异无统计学意义，而c—jun、C—los和Cyclin D1基因表达，较未转染加药组明显增强。结论 EGR-1、c—jun、c-fos和Cyclin D1基因在肿瘤发生前阶段肝脏中的异常表达．对肿瘤形成可能具有一定的重要性。     

缺氧诱导因子1α表达对裸鼠肝癌皮下移植瘤生长的促进作用

目的 探讨缺氧诱导因子1α表达对肝癌移植瘤生长的影响.方法 建立强力霉素诱导缺氧诱导因子1α表达的裸鼠肝癌HepG2 Tet-on-HIF-1α 细胞皮下移植瘤模型;荷瘤裸鼠口服强力霉素(Dox)后,观察上调缺氧诱导因子1α对皮下移植瘤生长的影响.结果 荷瘤裸鼠口服强力霉素可以上调裸鼠皮下移植瘤中缺氧诱导因子1α mRNA和蛋白表达水平;肿瘤体积Dox(+)组vs.Dox(-)组为(513.545±276.229)mm 3 vs.(166.506±110.142)mm 3 (P<0.05),肿瘤重量(1.251±0.438)g vs.(0.640±0.296)g(P<0.05),肿瘤生长速度Dox(+)组明显超过Dox(-)组,肿瘤内面积坏死率明显小于Dox(-)组(31.360%±2.728%)vs.(36.640±3.804%)(P<0.05);同Dox(-)组相比,Dox(+)组裸鼠体重下降更为明显(P<0.01).两组荷瘤鼠均无肝、肺转移发生.结论 强力霉素可以诱导裸鼠肝癌HepG2 Tet-on-HIF-1α 细胞皮下移植瘤模型中缺氧诱导因子1α的表达,促进肿瘤的生长.     

肝癌组织中livin基因表达及与乙型肝炎病毒X蛋白的关系研究

目的 探讨livin基因在肝癌组织中的表达及乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus Xprotein,HBx)对其表达的影响.方法 采用免疫组化染色法检测10例正常肝组织和30例肝癌组织中livin基因的表达.建立稳定转染HBx基因的L02(L02-X)细胞系,采用Real-time PCR和Western blot检测L02-X)细胞系转染HBx基因前后livin基因表达的变化.结果 Livin基因在肝癌组织的表达明显高于正常肝组织,且livin基因的表达与肝癌的大小、病理分级无明显相关性(t=1.688,P=0.103;γ=-0.137,P=0.471;P＞0.05),与门静脉癌栓有关(t=2.24,P=0.033;P＜0.05).转染HBx基因后livin基因mRNA表达水平上调(t=6.73,P＜0.05).结论 livin基因高表达引起的凋亡抑制可能在肝癌的发生、发展中起重要作用,HBx基因可以在转录水平上调其表达.     

入肝血流联合肝下下腔静脉阻断在腹腔镜肝切除术中的应用

目的评价入肝血流联合肝下下腔静脉阻断在腹腔镜肝切除中的安全性及疗效。方法回顾性分析2015年1月至2015年12月由同一医疗组开展的腹腔镜下肝切除51例,其中入肝血流联合肝下下腔静脉阻断(联合阻断组)32例,入肝血流阻断(Pringle组)19例。记录术中阻断时间、出血量、血流动力学改变、术后肝功能、肾功能变化,及并发症的发生率。结果联合阻断组入肝血流平均阻断时间17 min,肝下下腔静脉阻断时间12 min。Pringle组平均阻断时间23 min。联合阻断组术中出血量平均(370.1±107.9)ml,1例病人输血,显著低于Pringle组(560.3±191.3)ml,术中输血3例。联合阻断组无手术中转开腹,Pringle组中转开腹1例。阻断肝下下腔静脉,病人平均动脉压由阻断前的(92.3±4.7)mmHg下降至(71.3±4.6)mmHg,心率则由阻断前的(73.9±6.9)次/min增快至(93.5±10.7)次/min。松开阻断带后,在无明显出血情况下,平均动脉压和心率可自行恢复至阻断前水平。两组肝功能和肾功能恢复无明显差异,总体并发症无明显差异。结论腹腔镜下入肝血流联合肝下下腔静脉阻断安全有效,并能减少术中出血量及中转率。     

TRAIL的抗肝细胞癌作用研究

目的 探讨TRAIL对HCC的治疗作用。方法 用不同浓度TRAIL处理肝癌细胞株HepG2、SMMC7721，观察经药物处理前后肿瘤细胞的凋亡发生率。采用分子克隆技术构建了真核表达质粒pIRES-EGFP-TRAIL，转染肝癌细胞株HepG2、SMMC7721细胞，观察其疗效。体内实验建立裸鼠肝癌模型，观察TRAn。的抑癌作用。结果TRAR，(100ng／m1)处理24h，肝癌细胞凋亡发生率约10％，而Jurkat细胞凋亡率达70％以上，胆管癌细胞QBC939凋亡发生率约50％。真核表达质粒TRAIL体外转染肝癌细胞后对肝癌细胞的生长无显著性的抑制作用。体内直接瘤体注射pIRES-EGFP-TRAIL可有效的导入TRAIL基因并获得高表达，但对裸鼠肝癌无明显抑制作用。结论 肝细胞癌对TRAIL诱导的凋亡有耐药现象，提示HCC中存在抑制TRAIL诱导凋亡的因素，单一的TRAIL疗HCC疗效有限。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体对肝细胞肝癌的抑制作用

目的 研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体(TRAIL)对肝细胞肝癌的抑制作用。方法 构建绿色荧光蛋白融合TRAIL质粒,转染肝癌细胞株HepG2、SMMC7721细胞后,分别采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot检测 TRAIL的表达,采用流式细胞仪检测细胞周期、凋亡,噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率;体内实验建立裸鼠肝癌皮下模型,pIRES-EGFP-TRAIL直接瘤体注射,并观察TRAIL的抑癌作用。结果 真核表达质粒TRAIL体外转染肝癌细胞后,RT-PCR和 Western blot证实了肝癌细胞中有 TRAIL的表达,但对肝癌细胞的生长无显著性的抑制作用。体内直接瘤体注射 pIRES-EGFP-TRAIL 2周,RT-PCR证实瘤体有 TRAIL mRNA强表达,癌旁组织 TRAIL mRNA呈弱表达,正常肝无 TRAIL mRNA表达,但两组间肿瘤大小差异无显著性(P>0.05)。结论 肝细胞肝癌对TRAIL诱导的凋亡有耐药现象,提示HCC中存在抑制TRAIL诱导凋亡的因素,单一的TRAIL治疗HCC疗效有限。     

Pin1在肝硬化和肝癌组织中的表达及其与乙型肝炎病毒X蛋白的关系

目的通过检测Pin1在肝硬化组织和肝癌原发灶及门静脉癌栓中的表达,了解Pin1在肝癌发生、发展的不同阶段的表达情况,同时验证其与乙型肝炎病毒X蛋白的关系。方法用免疫组织化学染色法检测20例肝硬化组织,21例肝癌原发灶及门静脉中Pin1的表达,同时检测21例肝癌原发灶中乙型肝炎病毒X蛋白的表达情况,并用SPSS10.0软件进行相关性分析。结果肝硬化组织和大部分门静脉癌栓中Pin1的表达较肝癌原发灶中Pin1的表达强(P<0.05)。在肝癌组织中Pin1的表达与HBx的表达呈显著正相关(P<0.05)。结论Pin1在肝癌发生、发展的不同阶段表达不同,同时Pin1可以通过直接或间接作用稳定HBx的表达,为阐明其在肝癌发生、发展中的作用提供了新的思路。     

TNF-α和IL-6在卵圆细胞介导的肝再生中的作用

目的探讨肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）在卵圆细胞介导的肝再生中的作用。方法采用2-乙酰氨基芴（2-acetylaminofluroene，2-AAF）加2／3肝切除建立大鼠肝卵圆细胞介导的肝再生模型，以行2／3肝切除诱导的肝细胞介导的肝再生模型作为对照，采用RT-PCR方法检测TNF-α、IL-6在模型组及对照组肝组织中的表达。结果同正常组相比，术后模型组及对照组TNF-α mRNA表达明显上调，模型组持续至术后第3天（P〈0．05），对照组持续至术后第6天（P〈0．05）。对照组IL-6 mRNA术后8h显著升高（P〈0．05），而模型组IL-6mRNA术后无明显变化。结论TNF-α的高表达可能与肝卵圆细胞介导的肝再生过程密切相关。     

Antitumor Effects of Soluble TRAIL in Human Hepatocellular Carcinoma

TNF related apoptosis inducing ligand(TRAIL) is a promising cancer therapeutic agent,which appears to specifically kill transformed cells,and spare most normal cells[1, 2]. In the presentstudies, we investigated the expression of TRAILand TRAIL receptors in 60 HCC tissues, 20 nor mal liver samples and two HCC cell lines (HepG2and SMMC 7721). The effects of TRAIL on pro moting apoptosis in the HCC cell lines were ana lyzed after the cells exposed to the…