双色双融合与额外信号探针在BCR/ABL融合基因检测中的比较及其意义

目的 探讨DCCF(dual color dual fusion)探针与ES(extra signal)探针在BCR/ABL融合基因检测中信号表现的特点,并明确其信号特征与染色体核型的相互关系.方法 对初治65例慢性粒细胞白血病(chronic myelocytic leukemia,CML)及50例急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)患者骨髓标本进行BCR/ABL的DCDF探针的荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)检测,FISH阳性标本则使用ES探针再次进行荧光原位杂交进行BCR断裂点的检测,同时对其中47例CML和40例ALL进行了核型分析.结果 FISH结果示65例CML均为BCR/ABL阳性,DCDFFISH中有17例为非典型信号表现,ES-FISH有12例为非典型信号表现;50例ALL中7例BCR/ABL阳性,ES探针显示5例BCR断裂点位于m-bcr,2例位于M-bcr.核型分析CML检出Ph阳性98%(43/44),ALL检出Ph阳性22%(7/32).结论 DCDF-FISH、ES-FISH以及核型分析各有其特性.根据每种方法的特性,对实验结果进行综合分析可对遗传学特征作出更准确判断.     

AML-M5患者树突细胞诱导活化自体外周血T细胞增殖及克隆性分析

AML-M5是急性髓系白血病各型中预后较差的一种,该病好发于老年人,患者常不能耐受高强度化疗,一般治疗预后较差.由于免疫细胞具有自动识别异己抗原(包括恶性转化的突变克隆肿瘤细胞)的特点,可以敏感地追踪、识别并杀伤少量残留的肿瘤细胞,在清除微量残留白血病(MRD)等方面具有天然的优势.     

减低强度预处理造血干细胞移植联合低剂量环孢素A治疗多发性骨髓瘤一例

患者男，44岁，因“腰背疼痛伴活动受限4个月余，加重2个月”于2006年8月2日人住我院血液科。诊断为多发性骨髓瘤（MM）（BIA期），IgG型，伴2型糖尿病。第1个疗程用VAD方案（长春新碱、阿霉素、地塞米松）化疗，骨髓无明显抑制；第2个疗程用VAD＋氟达拉滨（Flu）方案化疗，化疗结束后骨髓穿刺提示瘤细胞由56％降至17％，     

枸杞多糖对荷瘤小鼠免疫抑制因子VEGF、TGF-β1水平的影响

目的:观察枸杞多糖对荷瘤机体免疫逃逸的干预作用.方法:采用H22荷瘤小鼠,用枸杞多糖连续灌胃两周后观察胸腺、肿瘤重量,计算胸腺指数及肿瘤生长抑制率,ELISA双抗体夹心法检测各组血清中血管内皮细胞生长因子(VEGF)、转化生长因子β1(TGF-β1)水平.结果:枸杞多糖可明显抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长,对小鼠的胸腺具有一定的保护作用,可下调血清中VEGF、TGF-β1水平.结论:枸杞多糖的抗肿瘤作用与抑制肿瘤机体VEGF、TGF-β1因子的分泌,干预机体的免疫逃逸状态有关.     

ATG/ALG在非清髓性造血干细胞移植治疗血液病中临床应用

目的探讨抗胸腺细胞球蛋白(ATG)和抗淋巴细胞球蛋白(ALG)在非清髓性异基因造血干细胞移植中作用和毒副作用,对移植并发症的影响。方法以ATG/ALG为基础的非清髓性预处理方案,对14例恶性血液病、11例重型再生障碍性贫血(SAA)实施异基因骨髓或脐血造血干细胞移植;对5例恶性血液病实施供者淋巴细胞输注。移植物抗宿主病(GVHD)预防:恶性血液病采用环孢菌素A(CSA)联合短程甲氨喋呤(MTX),SAA患者采用CSA联合甲基强的松龙。结果3例患者未植入,于移植早期死于感染。其余22例恢复造血,ANC>0.5×109/L和Plt>20×109/L平均为12.1(3~29)d和20.1(5~79)d。移植后3例为供者型完全嵌合体(CC);19例为混合嵌合体(MC),4例自行转为CC,5例DLI后由MC转变为CC。移植早期均未见aGVHD,DLI后并发Ⅰ度aGVHD1例、Ⅱ度aGVHD3例,2例皮肤局限型cGVHD、2例为广泛型cGVHD。并发严重的细菌、病毒和真菌感染各2例、4例和5例。ATG/ALG使用过程中全部出现寒战、发热和流感样症状等。结论ATG/ALG使用安全,促进造血干细胞植入,减少aGVHD发生并降低严重程度。     

枸杞多糖抗实验性肝癌作用及对VEGF表达与分泌的影响

目的 观察枸杞多糖对实验性肝癌小鼠模型肿瘤细胞VEGF表达及分泌的影响,进一步探讨枸杞多糖的抗肿瘤作用机制。方法 枸杞多糖连续灌胃治疗两周后,LSAB免疫组织化学方法观察肿瘤模型组、LBP不同剂量组肿瘤组织VEGF表达情况,在小鼠脱颈处死前眼球放血,ELISA双抗体夹心法检测各组血清中VEGF水平。结果 枸杞多糖不同剂量均可降低肿瘤组织中VEGF的表达,其中高剂量组与肿瘤模型组间差异具显著性。同样枸杞多糖高剂量组可下调血清中VEGF水平。结论 枸杞多糖的抑瘤作用可能与抑制了肿瘤细胞VEGF因子的产生,从而减少了肿瘤间质中微血管的形成有关。     

RYBP在急性白血病中的表达

目的:观察RYBP(Ring1 and YY1-binding protein)在急性白血病中的表达情况,初步探索其在急性白血病中的临床意义。方法:应用蛋白质免疫印迹(western blot)技术分别检测急性单核细胞白血病细胞株SHI-1、急性早幼粒白血病细胞株HL-60、慢性粒细胞白血病细胞株K562、51例初治急性白血病(AL)患者、23例急性白血病完全缓解(ALCR)患者和21例对照(非恶性血液病)患者骨髓单个核细胞中RYBP的表达情况。结果:SHI-1、HL-60及K562细胞株RYBP表达均为强阳性;21例阴性对照中RYBP表达均为阴性。AL组RYBP表达阳性率为73%,ALCR组阳性率为13%,AL组RYBP表达阳性率及表达量比ALCR组及对照组明显增高(P<0.05)。结论:RYBP在急性白血病细胞中表达水平异常增高,提示RYBP可能与急性白血病密切相关。     

高分辨熔解曲线分析正常核型成人AML的NPM1基因突变

目的研究急性髓细胞白血病（AML）患者核仁磷酸蛋白1（NPM1）基因突变检测方法。方法应用PCR结合高分辨熔解曲线分析技术（HRM）和毛细管电泳法（CE）检测正常核型的成人AML样本的NPM1基因突变,并与CE法进行比较分析,结果经克隆测序验证。结果 85例AML样本均得到可供分析的NPM1基因突变检测结果,NPM1基因突变阳性19例,其中15例A型突变,4例B型突变,突变阳性率为22.4%。与CE法比较,二者符合率为100.0%（85/85）,HRM检测的敏感性和特异性均达到100.0%。结论应用HRM技术检测NPM1基因突变快速简便,而且敏感,是一项适合临床开展的新方法,可用于临床AML诊断分型、治疗和预后指导。     

急性髓系白血病患者外周血T细胞TCR Vβ亚家族表达及克隆性增殖分析

本研究探讨AML患者在初发、治疗缓解后、复发等不同疾病状态下外周血T细胞TCRVB亚家族表达及T细胞克隆性增殖的情况,分析不同白血病细胞负荷对患者外周血T淋巴细胞数量及功能．尤其是对抗白血病功能的影响。应用RT-PCR扩增11例AML白血病患者不同疾病状态下及3名正常供者外周血的TCRBV24个家族的基因序列,通过基因扫描（genescan）的方法判断TCRBV家族的克隆表达、CDR3克隆性质,比较不同疾病状态下白血病患者外周血T细胞的Vβ亚家族的应用、克隆性增殖、T细胞的复杂性以及T细胞免疫表型的变化。结果表明：11例AML白血病患者初诊时外周血T细胞均表达部分TCR Vβ亚家族,经体外诱导后TCR Vβ亚家族表达增加;完全缓解期患者外周血T细胞TCRVβ亚家族数量明显增多,但未达到完全正常;4例患者在复发时TCR Vβ亚家族表达数量明显下降;11例患者中有9例在初诊时外周血有1至2个TCR Vβ亚家族T细胞克隆性增殖,缓解期克隆性增殖的Vβ亚家族T细胞有增加趋势,在多数病例观察到部分Vβ亚家族T细胞在初发、缓解、体外诱导扩增以及复发时仍维持克隆性增殖状态;AML白血病患者初发及复发时T细胞CDR3复杂性明显降低,呈偏态分布,而疾病缓解时T细胞复杂性有所改善。结论：AML白血病患者外周血T细胞TCR Vβ亚家族呈限制性表达;在大多数病例中无论是疾病初发抑或缓解及体外诱导、甚至在疾病复发时均可观察到克隆性T细胞的存在;在部分病例中某些Vβ亚家族在上述不同疾病状态下始终维持克隆性增殖状态,部分Vβ亚家族的克隆性增殖同白血病细胞的存在相关;在疾病状态下,AML白血病患者外周血T细胞的复杂性有所降低,而疾病缓解后可部分恢复。     

BCR／ABLDCDF—FISH信号特征与染色体核型的关系及其在慢性粒细胞白血病中的意义

目的探讨慢性粒细胞白血病（CML）BCR／ABL DCCF—FISH的信号特点及其与染色体核型的关系。结果使用BCR／ABL的DCDF探针对65例慢性粒细胞白血病骨髓标本进行荧光原位杂交及染色体核型检查。结果65例CML核型43例Ph阳性,1例阴性,其余21例未行核性检查或无可分析分裂相;FISH结果65例均为BCR／ABL阳性,其中9例伴ASS基因缺失,5例复杂易位,1例＋Ph伴ASS基因缺失。结论传统核型与DCDF-FISH,应互相结合,方可对遗传学特征作出更准确分析。